病原生物實驗

病原生物學試驗指導試驗一顯微鏡的使用及細菌的觀看一、顯微鏡油鏡的使用和保護目的料標本。原理細菌個體微小，肉眼不能看到，必需使用油鏡，將其放大1000倍左標本玻片上加上折光率和玻片n=1.52〕相近的香柏油n=1.515，就可避開光線的分散，加強視野的亮度，獲得清楚的物像〔1。材料附有油鏡頭的一般光學顯微鏡一架，染色標本片，香柏油，擦鏡紙，二甲苯，消毒缸。方法步驟〔一〕使用法油鏡的識別鏡頭前端有黑、白或紅色的圓圈：刻有“HI”或“oil”等，其孔徑也較其他物鏡小，約帽針頭大。油鏡的使用(1)用油鏡觀看標本時應將顯微鏡直立，勿將鏡臂彎曲，以免鏡油流散。光鏡。(3)將聚光器升到最高位置，再將光圈完全翻開，增大射入光線的強度。1(6)用眼從側方看著物鏡，緩慢轉動粗調整器，使物鏡頭浸于油滴內，并幾到物像時，再重復上述操作。滴少許二甲苯擦試，并隨即用干的試鏡紙擦去二甲苯，以防鏡片脫落。〔二〕油鏡的保護顯微鏡是貴重周密儀器，使用時要細心疼惜，不得隨便拆散和碰撞。臺面上或柜箱內。防止與強酸、強堿、乙醚、氯仿、酒精等化學藥品接觸。順其直徑方向擦，不要轉圈擦。碰撞。將聚光器下降，罩上鏡套或蓋布，對號歸位。思考題怎樣操作才能使顯微鏡的視野最亮？標本最清楚？使用油鏡應留意哪些主要事項？二、細菌材料玻片標本制備〔操作〕目的染色反響。原理再經染色沖洗既可被染上顏色，且不易被水沖洗掉。材料葡萄球菌、大腸桿菌培育物、玻片、生理鹽水、接種環(huán)、酒精燈、火柴、消毒缸。方法步驟按涂片→枯燥→固定挨次進展。1~2環(huán)滅菌后取菌少許，與鹽水混勻并涂成面積不超過1cm2的薄膜。如用液體培育物涂片，可直接取培育物涂于玻片上，不加生理鹽水?？菰飳⑼科趴諝庵凶匀豢菰?，或將標本面對上，放在離火焰較遠處烘干，避開烤焦。32～3就可固定標本。留意事項時視野難調清楚。取菌量宜少，涂上要均而薄定的標本馬上染色水洗。思考題涂片后為什么必需進展固定？固定時應留意什么？三、細菌的革蘭染色法〔操作〕目的致病性和選用抗菌藥物供給依據。原理酒精脫色后，肽聚糖層的孔徑變小，通透性降低，細胞仍保存結晶紫的顏色。材料葡萄球菌和大腸桿菌18～24小時培育后的混合菌液。革蘭染色液一套。其它材料同玻片標本制備法。方法步驟 涂片→枯燥→固定后按以下挨次染色。初染 滴加結晶紫染液數(shù)滴于標本面上染色1分鐘輕輕水洗甩干。媒染 滴加盧戈氏碘液數(shù)滴于標本面上染色1分鐘輕輕水洗甩干。脫色滴加95%酒精于標本面上，頻頻傾動玻片，直到不再溶下染料為止，約半分鐘，視標本片材料厚薄而增減時間，然后水洗、甩干。復染 分鐘，水洗后甩干，用毛邊紙或濾紙輕輕吸干，待標本充分枯燥后加油，用油鏡觀看并繪圖。提示：經革蘭染色后，顯紫色者為革蘭陽性菌，顯紅色者為革蘭陰性菌。留意事項留意把握好染色的時間，尤其是酒精脫色時間，不宜過長或過短。染色過程中，不行使染液枯槁。選用適齡培育物，以18～24小時為宜，否則影響染色效果。細菌染色標本片觀看后仍應放入規(guī)定的玻片缸中以便消毒處理。思考題革蘭染色法的根本步驟如何？應留意哪些關鍵步驟？革蘭染色有何實際意義？四、細菌的根本形態(tài)和特別構造觀看〔示教〕目的可供菌種的鑒別。原理特別構造，可以供菌種的觀看和識別。材料1．細菌根本形態(tài)標本片球菌 葡萄球菌、鏈球菌、肺炎雙球菌、腦膜炎雙球菌染色標本片。桿菌 白喉桿菌、炭疽桿菌等染色標本片。螺菌類 霍亂弧菌、幽門彎曲菌標本片等。2．細菌特別構造標本片肺炎球菌莢膜、破傷風桿菌芽胞、變形桿菌鞭毛等染色片。方法步驟使用油鏡觀看細菌根本形態(tài)各標本片并繪圖。在示教油鏡下觀看細菌特別構造標本片并繪圖。思考題細菌有哪些特別構造，其在醫(yī)學實踐中意義如何？為什么細菌能保持其固有形態(tài)？試驗二病原性球菌、桿菌一、觀看各病原性球菌的菌落特征〔示教〕目的生疏病原性球菌的培育特性及主要鑒別點材料與方法肺炎鏈球菌血瓊脂平板、腦膜炎雙球菌巧克力平板培育物。色及溶血環(huán)。思考題溶血的實質是什么？二、血漿凝固酶試驗-玻片法〔操作〕目的把握血漿凝固酶試驗的原理。原理酶樣物質，而使纖維蛋白原變成纖維蛋白，從而使血漿凝固，可用試管法測出。材料金黃色葡萄球菌培育物、表皮葡萄球菌培育物、玻片、生理鹽水、兔血漿、接種環(huán)、酒精燈、火柴、消毒缸方法取干凈玻片一張，用記號筆將玻片劃成三格，其中第一格、其次格各加22的生理鹽水混勻，取少許表皮葡萄球菌培育物與其次格的兔血漿混勻。結果假設有凝塊消滅，即為陽性；假設無凝塊消滅，則為陰性。思考題致病性葡萄球菌的特點有哪些？鑒定致病性葡萄球菌常用的方法有哪些？三、腸道桿菌在選擇鑒別培育基上的菌落特點〔示教〕選擇鑒別培育基中除根本養(yǎng)分成格外，含乳糖、指示劑、選擇性抑菌劑等成分。如SS瓊脂培育基中指示劑為中性紅，選擇性抑菌劑為膽鹽、枸櫞酸鈉和煌桿菌在SS平板上生長受抑制，少數(shù)長出菌落者因發(fā)酵乳糖產生酸類，能使中性紅變紅，以致菌落呈紅色，而一般腸道致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨產生鹼性物質，故菌落呈淡黃色，故起到選擇鑒別大腸桿菌及其他腸道致病菌的作用。EMBEMB上因分解乳糖產酸，pH下降，使菌體帶正電荷，從而結合伊紅、美藍使呈紫黑色有金屬光澤的菌落，而一般腸道致病菌不分解乳糖、呈無色半透亮菌落。SS者更適宜于沙門菌、志賀菌等腸道病原性桿菌的分別培育。表SSEMB培育基SSEMB

紅色

較小、淡黃色半透亮較小，無色半透亮四、腸道桿菌的生化反響及動力〔示教〕材料5種腸道桿菌在葡萄糖發(fā)酵管、克氏雙糖鐵培育基、尿素培育基、蛋24結果觀看5氣。分解力量、能否產氣；有無硫化氫產生。觀看能否分解尿素，如能分解尿素形成NHOH呈鹼性，可使培育基〔含4指標劑酚紅〕變?yōu)樘壹t色。在蛋白胨水培育物中滴加數(shù)滴吲哚試劑〔對二甲基氨基苯甲醛分解色氨酸產生吲哚，則消滅玫瑰紅色環(huán)，即為吲哚試驗陽性。試驗陰性，如集中生長而使整個培育基混濁，則為動力試驗陽性。表 5種腸道桿菌的生化反響及動力試驗生化生化反應葡萄糖乳糖HS2 尿素靛基質大腸桿菌++－－＋＋變形桿菌+－＋＋＋／－＋乙型副傷寒桿菌+－++－－＋傷寒桿菌＋－＋／－－－＋痢疾桿菌＋－－－＋／－－思考題什么叫選擇鑒別培育基？舉例說明。試驗三病毒及其它微生物一、鉤端螺旋體〔示教〕材料鉤端螺旋體鍍銀染色示教片方法用油鏡觀看鉤端螺旋體的形態(tài)、染色特點二、狂犬病病毒包涵體〔示教〕材料狂犬病病毒包涵體HE方法1三、病毒的血凝抑制試驗〔示教〕原理病毒的紅細胞凝集現(xiàn)象，可于病毒〔或其血凝素〕懸液中，參加特異性免疫血清所抑制，即為病毒的紅細胞凝集抑制試驗。方法按下表進展塑料板孔 123456789血清10抗原11血球比照比照比照生理鹽水－(ml)0.250.250.250.250.250.250.250.250.250.25病人血清棄(ml) 0.250.250.250.250.250.250.250.250.250.2501:100病毒抗原0.250.250.250.250.250.250.250.2500.250(ml)%雞紅細胞(ml)

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