臨床微生物學尿培養(yǎng)操作規(guī)范

臨床微生物學

尿培養(yǎng)操作規(guī)范

尿路感染是指尿道內(nèi)有大量微生物繁殖而引起的尿路炎癥。尿路感染并非是一種單一的疾病，而是一種臨床綜合征。根據(jù)感染部位可分為上尿路感染（如腎盂腎炎）及下尿路感染（如膀胱炎），男性還可出現(xiàn)前列腺感染，不同部位同時感染也很常見。尿路感染是人類最常見的感染之一，可發(fā)生于各個年齡段的人群，好發(fā)于女性，男:女之比為1:10。典型的臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、尿頻、尿急、尿痛、排尿困難和恥骨上壓痛，臨床表現(xiàn)可因患者年齡和健康狀況不同而異。新生兒尿路感染的癥狀往往是非特異性的、模湖的，可表現(xiàn)有厭食，嘔吐，倦怠，無發(fā)熱的菌血癥等；嬰兒期直到2歲，常有高熱；2歲以后的尿路感染才會有典型的臨床表現(xiàn)；老年患者的尿路感染，常缺乏明顯的癥狀，更易造成菌血癥和急性腎功能衰竭，應引起重視。

診斷尿路感染最常用的方法是進行尿液標本的細菌學檢查，主要致病菌可因尿路感染的原因不同而有所不同（表1）。表１尿路感染的原因及常見病原菌

感染原因 主要致病菌 感染特點上行感染大腸埃希菌、克雷伯菌、變形桿菌、淋病奈瑟菌主要為腸道菌群或會陰部細菌逆行感染，多見于女性，多為單一細菌感染，以大腸埃希菌感染最常見泌尿系統(tǒng)解剖結構和生理功能改變引起的感染大腸埃希菌、克雷伯菌、變形桿菌、腸桿菌、普羅威登菌、沙雷菌、不動桿菌、假單胞菌、葡萄球菌、腸球菌多見于留置導尿管、腎盂造瘺術、尿路結石、尿路重建、前列腺肥大、膀胱排空能力受損的患者，容易發(fā)生多種微生物的混合感染，易被誤認為標本污染發(fā)生于菌血癥的患者，血液中的細菌通過血流進入腎臟引起感染，比較少見血行感染葡萄球菌、結核分枝桿菌、沙門菌直接感染大腸埃希菌、葡萄球菌、鏈球菌、腸桿菌外傷或腎周圍器官發(fā)生感染時，細菌直接侵入腎臟引起感染，非常少見

一、尿液標本采集和運送１．采集指征：有典型的尿路感染癥狀；肉眼膿尿或血尿；尿常規(guī)檢查表現(xiàn)為白細胞或亞硝酸鹽陽性；不明原因發(fā)熱，無其他局部癥狀；留置導尿管的患者出現(xiàn)發(fā)熱；膀胱排空功能受損；泌尿系統(tǒng)疾病手術前２．采集方法：

標本采集應力爭在未使用抗生素之前，注意避免消毒劑污染標本，方法有：

（１）清潔中段尿：最好留取早晨清潔中段尿標本，囑咐患者睡前少飲水，清晨起床后用肥皂水清洗會陰部，女性應用手分開大陰唇，男性應翻上包皮，仔細清洗，再用清沖洗尿道口周圍；開始排尿，將前段尿排去，中段尿約10～20ml直接排入專用的無菌容器中，立即送檢，2h內(nèi)接種。該方法簡單易行，是最常用的尿培養(yǎng)標本收集方法，但很容易受到會陰部細菌污染，應由醫(yī)務人員采集或在醫(yī)務人員指導下由患者正確留取。

（２）恥骨上膀胱穿刺：使用無菌注射器直接從恥骨上經(jīng)皮膚消毒穿入膀胱吸取尿液，是評估膀胱內(nèi)細菌感染的“金標準”方法，但有一定的痛苦，患者難以接受。主要用于厭氧菌培養(yǎng)或留取標本困難的嬰兒尿標本的采集。

（３）直接導尿：按常規(guī)方法對會陰部進行消毒后，用導尿管直接經(jīng)尿道插入膀胱，獲取膀胱尿液，可減少尿液標本污染，準確地反映膀胱感染情況。但有可能將下尿道細菌引入膀胱，導致繼發(fā)感染，一般不提倡使用。

（４）留置導尿管收集尿液：利用留置導尿管采集標本時，應先消毒導尿管外部，按無菌操作方法用注射器穿刺導尿管吸取尿液，操作時應防止混入消毒劑，注意不能從尿液收集袋中采集尿液。３．采集容器：應由不與尿液成份發(fā)生反應的惰性材料制成；潔凈、無菌、加蓋、密封、防滲漏；不含防腐劑和抑菌劑；廣口、具有較寬的底部、容積應大于50ml、盒蓋易于開啟。４．標本運送：

標本采集后應及時送檢、及時接種，室溫下保存時間不得超過2h（夏季保存時間應適當縮短或冷藏保存），4°C冷藏保存時間不得超過8h，但應注意冷藏保存的標本不能用于淋病奈瑟菌培養(yǎng)。二、標本驗收１．申請單驗收：要求尿培養(yǎng)申請單除患者的基本信息以外還應包括標本收集時間、收集方式、是否已使用過抗生素等，驗收時應檢查申請單是否填寫完整。２．標本驗收：（１）檢查標本標識是否與申請單相符；（２）檢查標本容器有無溢漏、滲出，是否加蓋；（３）檢查送檢時間是否超過標本保存時間。３．不合格標本處理：（１）對申請單信息不全者應設法與臨床醫(yī)生取得聯(lián)系；（２）對標識不符、送檢容器不合格、送檢時間超過規(guī)定時間的標本應注明原因，退回，要求重新留取標本，并做記錄。三、實驗室檢查１．涂片檢查：尿路感染標本可直接做細菌培養(yǎng)無需常規(guī)進行涂片檢查。對于臨床懷疑淋病奈瑟菌、假絲酵母菌或結核分枝桿菌感染的標本可用無菌吸管吸取尿液5～10ml置無菌試管中，3000～4000r/min離心30min，傾去上清液，取沉渣涂片，行革蘭染色或抗酸染色后鏡檢。

２．細菌培養(yǎng)：（１）普通培養(yǎng)：將收集標本的容器輕輕旋轉混勻，用定量接種環(huán)分別取尿液1ul涂抹接種血平板和麥康凱平板（或中國藍平板），35～37°C培養(yǎng)18～24h，觀察結果。對導尿、恥骨上膀胱穿刺和已使用抗生素治療的患者標本應增加一個10ul接種量。（２）特殊培養(yǎng)：對懷疑有苛養(yǎng)菌感染者應采用恥骨上膀胱穿刺法或導尿法采集標本，加種一塊巧克力平板，置5%CO2環(huán)境中培養(yǎng)48h。檢查淋病奈瑟菌、結核分枝桿菌感染時無需做定量培養(yǎng)，可將標本離心后取尿沉渣進行培養(yǎng)，以提高陽性率。（３）普通培養(yǎng)18～24h無細菌生長時，應將所有培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h。四、結果觀察和報告

１．結果觀察和評價：

（１）菌落計數(shù)：計數(shù)平板上的菌落數(shù)，采用1ul接種量者，將菌落數(shù)乘以103；采10ul接種量者，將平板菌落數(shù)乘以102，即為每ml尿液中所含有的細菌數(shù)（CFU/ml）。如菌落生長過多無法精確計數(shù)時，則報告＞105CFU/ml。

（２）結果評價：正常情況下從腎臟排泌至膀胱的尿液是無菌的，但膀胱中的尿液經(jīng)尿道排出體外時可受