HIV實驗室生物安全基本要求

HIV實驗室生物安全基本要求重慶市疾病預防控制中心張敏一實驗室生物安全的概念與范圍實驗室——進行科學實驗或試驗的場所按學科領域可分為——生物學、化學和物理實驗室病原微生物實驗室——從事傳染性物質操作活動的實驗室病原微生物實驗室因為實驗活動的特殊性，其生物安全問題越來越引起人們的重視。病原微生物實驗室實驗活動操作對象主要為細菌、真菌、病毒和寄生蟲等生物因子。其中的大部分生物因子能引起人或動物的發(fā)病，有的還具有較強的傳染性。實驗室因實驗活動所產生的污水、廢氣和固體廢物，如果不通過嚴格的處理或處置，可能引起傳染病的發(fā)生，對環(huán)境和人體健康造成嚴重危害

隨著SARS疫情的暴發(fā)，以及禽流感、O157：H7大腸桿菌感染、豬鏈球菌感染、甲型H1N1流感等人畜共患病的不斷出現(xiàn)，各國對病原微生物的監(jiān)測越來越重視，對病原微生物實驗室的需求越來越高實驗室生物安全實驗室生物安全條件和狀態(tài)不低于容許水平,可避免實驗室人員、來訪人員、社區(qū)及環(huán)境受到不可接受的損害，符合相關法規(guī)、標準等對實驗室安全責任的要求。實驗室防護區(qū)—實驗室的物理分區(qū)，該區(qū)域內生物風險相對較大，需對實驗室的平面設計、圍護結構的密閉性、氣流，以及人員進入、個體防護等進行控制的區(qū)域。生物安全實驗室—指從事微生物和生物活性物質相關研究、教學、檢測、診斷等活動的實驗室。根據所操作的生物因子的危害程度和采取的防護措施，將生物安全防護水平分為4級，1級防護水平最低，4級防護水平最高。以BSL-1、BSL-2、BSL-3和BSL-4表示實驗室的相應生物安全防護水平。BSL-1實驗室—適用于操作在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物BSL-2實驗室

—適用于操作能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構成嚴重危害，傳播風險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，并且具備有效治療和預防措施的微生物。

BSL-3實驗室

—適用于操作能夠引起人類或動物嚴重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。BSL-4實驗室

—適用于操作能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經消滅的微生物。生物危險感染性的致病因子，無論是直接感染，還是間接地散播到環(huán)境中去，對人類、動物或植物都是一個現(xiàn)實的或潛在的危險。AnimalsHumansPlants實驗室相關感染發(fā)生的原因傳染來源：感染性生物因子傳播途徑：徑口、經皮膚、經呼吸道易感人群：實驗室操作人員及相關工作人員生物因子

一切微生物和生物活性物質。實驗相關感染以吸入氣溶膠最為常見實驗室感染定義實驗室操作人員出現(xiàn)與實驗室病原微生物相關的臨床癥狀、體征或者疾病的；實驗室操作人員出現(xiàn)的臨床癥狀、體征或者疾病尚不能排除實驗室感染的；實驗操作不當或者其他原因造成非實驗室人員感染或突發(fā)公共衛(wèi)生事件發(fā)生等實驗室病原微生物泄漏的;

病原微生物導致的實驗室感染是實驗室生物安全的最大威脅，實驗室相關感染大部分是由實驗室工作人員的生物安全意識不強、人為操作錯誤、實驗室技術欠佳和儀器的錯誤使用等原因造成的，所以良好的操作技術規(guī)范對于實驗室生物安全至關重要。病原微生物的分類國家根據病原微生物的傳染性、感染后對個體或者群體的危害程度，將病原微生物分為四類：第一類：是指能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經宣布消滅的微生物。第二類：是指能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。第三類：是指能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構成嚴重危害，傳播風險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，并且具備有效治療和預防措施的微生物。第四類：是指在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物。第一類、第二類病原微生物統(tǒng)稱為高致病性病原微生物。從事病原微生物的操作,都應遵循下列基本原則所有操作人員必須經過培訓，通過考核，獲得上崗證書；在開始相關工作之前，應對所從事的病原微生物及相關操作進行危險評估，根據國家對于各種微生物操作的危險等級劃分和防護要求以及危險評估的結果，制定全面、細致的標準操作規(guī)程和程序文件，對于關鍵的危險步驟設計出可行的防護措施并對這些細節(jié)了然于胸；熟悉各級生物安全實驗室運行的一般規(guī)則，掌握各種儀器、設備、裝備的操作步驟和要點，對于各種可能的危害應非常熟悉；應掌握各種感染性物質操作的一般準則和技術要點。生物安全意識至關重要生物安全實驗室污染定義

是指生物安全實驗室內發(fā)生與實驗活動相關的一切微生物和生物活性物質對實驗室內環(huán)境包括氣體、液體和各種固體表面的污染。生物安全實驗室污染后果影響實驗結果的判定及實驗的科學性和可信性引起實驗室感染或中毒事件公共突發(fā)衛(wèi)生事件發(fā)生實驗室的生物安全規(guī)范實驗室的運行規(guī)范儀器設備的使用規(guī)范針對感染性材料的操作規(guī)范個人防護用品的使用規(guī)范……二、HIV檢測實驗室相關生物安全1、范圍艾滋病實驗室安全防護和職業(yè)暴露預防。適用于全國各級各類艾滋病實驗室的安全防護和職業(yè)暴露預防。2、相關法律和標準?微生物和生物醫(yī)學實驗室生物安全通用準則?(WS233-2002)衛(wèi)生部2003年8月1日起實施?實驗室生物安全通用要求?(GB19489-2008)2009年7月1日起實施

?全國艾滋病檢測工作管理辦法?衛(wèi)疾控發(fā)子[2006]218號?病原微生物實驗室生物安全管理條例?

國務院第424號令《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規(guī)定》衛(wèi)生部第45號令?醫(yī)務人員艾滋病病毒職業(yè)暴露防護工作指導原則(試行)?衛(wèi)生部頒布2004年6月1日起實施?消毒技術規(guī)范(2008年版)?衛(wèi)生部發(fā)布3、HIV實驗室的生物危害

第一類、第二類病原微生物統(tǒng)稱為高致病性病原微生物。人類免疫缺陷病毒（HIV）屬第二類病原微生物，是高致病性病原微生物。實驗室主要生物危害微生物氣溶膠吸入刺傷、割傷皮膚、黏膜污染食入感染的實驗動物咬傷……還有許多不明原因的實驗室相關感染

風險評估與控制當實驗室活動涉及傳染或潛在傳染性生物因子時，應進行生物風險評估。風險評估應至少包括下列內容：生物因子的種類、來源、傳染性、致病性、變異性、易感性、傳播途徑、潛伏期、在環(huán)境中的穩(wěn)定性、感染劑量、濃度、實驗數據、流行病學資料、預防和治療方案等。風險評估應由適當的有經驗的專業(yè)技術人員進行。

4、HIV相關檢測的生物安全級別

4.1HIV抗體檢測（包括篩查和確證實驗）、抗原檢測和相關的免疫學檢測應在符合Ⅱ級生物安全實驗室（BSL-2）要求的艾滋病檢測實驗室中進行4.2HIV分離培養(yǎng)、濃縮、中和試驗、細胞培養(yǎng)及研究工作及其它需要應用活病毒的研究工作，應在Ⅲ級生物安全實驗室（BSL-3）中進行。

4.3HIV核酸提取和檢測均應在符合Ⅱ級生物安全實驗室（BSL-2）要求的艾滋病檢測實驗室中進行。

4.4HIV病毒株應保存在符合Ⅲ級生物安全實驗室（BSL-3）要求的艾滋病實驗室；HIV陽性樣品，包括全血、血清、血槳和其他組織（液）、核酸提取物應保存在符合BSL-2要求的艾滋病實驗室。5生物安全保證措施5.1、建立安全制度根據《全國艾滋病檢測技術規(guī)范》（2009年修訂版）及相關的法律法規(guī)制訂本實驗室的安全工作制度或安全標準操作程序，每年應對其制度或程序及其實施情況進行檢查和修訂，并有記錄。

生物安全責任制，明確實驗室各崗位人員職責，實驗室主任是實驗室安全的第一責任人。準入制度人員健康監(jiān)護制度安全工作制度實驗室安全防護及實驗室的清理和消毒制定意外事故處理預案，主要是生物安全意外事故的處理、登記、調查和報告制度建立實驗室安全操作行為程序。建立實驗室廢棄物安全處理程序信息安全及保密制度：

與HIV/AIDS檢測相關的所有資料均應嚴格保密

5.2培訓和管理實驗室應進行全員安全培訓并強化“普遍性防護原則”安全意識，所有的血液、未固定的組織和組織液樣品，均應視為有潛在的傳染性，都應以安全的方式進行操作。所有管理和檢測人員都應接受省級以上艾滋病檢測實驗室主持的安全培訓，包括上崗前培訓和復訓，并接受管理人員的監(jiān)督。必須對新上崗人員進行安全教育和培訓，使他們清楚實驗室工作的潛在危險，通過考核等方式確認他們具備安全操作的能力后方可單獨工作。從事HIV的工作人員必須經過生物安全培訓并取得相應資質，在身體健康狀態(tài)良好的情況下開展工作。對實驗室其他相關人員，包括清潔人員、運輸工、修理工等也要定期進行培訓，使他們熟悉工作環(huán)境，了解潛在的危害以及相應的事故預防和緊急情況處理措施。實驗室的進入建立實驗室準入制度：

必須對新調入人員、外來合作、進修和學習的人員進行生物安全培訓，經實驗室主任批準后，方可進入實驗室。未經批準，任何人不得進入實驗室工作區(qū)域。兒童不得進入實驗室工作區(qū)域?？赡茉黾荧@得性感染的危險性或感染后可能引起嚴重后果的人員不允許進入實驗室或動物房。BSL-2實驗室門上應標有國際通用的生物危害警告標志，包括通用的生物危險性標志，標明傳染因子、生物安全水平、實驗室負責人或其他人姓名、電話（白天、家庭）、以及進入實驗室的特殊要求。實驗室的門應保持關閉。工作人員進入動物房應當經過特別批準。與實驗室工作無關的動物不得帶入實驗室。

生物安全培訓和監(jiān)督應有客觀詳實的記錄。實驗室主任應詳細了解所有工作人員的教育和培訓背景、特長、性格特點等。要根據人員特點、工作種類、所涉及的生物材料合理安排工作區(qū)域。實驗室的安全責任人要對工作和環(huán)境的安全負責，定期進行安全檢查。所有工作人員都有責任保護自己和他人安全檢查實驗室管理層有責任確保安全檢查的執(zhí)行。每年應對工作場所至少檢查一次，以保證：應急裝備、警報體系和撤離程序功能及狀態(tài)正常；用于危險物質漏出控制的程序和物品狀態(tài)，包括緊急淋??；對可燃易燃性、可傳染性、放射性和有毒物質的存放進行適當的防護和控制；去污染和廢棄物處理程序的狀態(tài)；實驗室設施、設備、人員的狀態(tài)。

5.3個人保健和防護

1）環(huán)境設施三區(qū)劃分設置洗手池（感應水龍頭）沖眼器自動關閉門，實驗室門應有可視窗足夠空間存儲物品及實驗操作實驗室應通風，如使用窗戶自然通風，應有防蟲紗窗可靠電力供應和應急照明黑暗中出口應有可辨認的標識

2）設備設施生物安全柜高壓蒸汽滅菌器，并按期檢查和驗證，以保證符合要求。應有適當的消毒設備個人防護裝備，應符合國家有關標準要求。（防護服、手套、防護鞋、帽子、口罩、防護鏡）脫蓋機、移液器3）防護要求在實驗室工作時，必須穿著合適的工作服或防護服。在進行可能接觸到血液、體液以及其他具有潛在感染性的材料或感染性動物的操作時，應戴上合適的手套。手套用完后，應先消毒再摘除，隨后必須洗手。禁止使用口腔吸液管，必須使用移液器來操作實驗的所有液體。

遇有手部皮膚有開放性傷口及其他不適于工作的情況，不要進入實驗室工作。嚴禁穿著實驗室防護服離開實驗室工作區(qū)域。不得在實驗室內穿露腳趾的鞋。禁止在實驗室工作區(qū)域進食、飲水、吸煙、化妝和處理隱形眼鏡。禁止在實驗室工作區(qū)域儲存食品和飲料。在實驗室內用過的防護服不得和清潔的防護服及日常服裝放在同一柜子內。在同一個實驗室的同一個獨立安全區(qū)域內，只能同時從事一種致病性病原微生物的相關實驗活動使用螺旋帽的塑料管盛放含HIV的樣品,禁止使用Ep管,以防止在開啟管蓋時發(fā)生樣品迸濺,建立員工健康檔案：工作人員上崗前必須進行HIV抗體和乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒等肝炎病毒標志物檢測，應接種乙肝疫苗。應每年對工作人員采血檢測HIV抗體，血清應長期保留。應指定專人監(jiān)督保持良好內務的行為。工作區(qū)應時刻保持整潔有序。禁止在工作場所存放可能導致阻礙和絆倒危險的在量一次性材料。所有用于處理污染材料的設備和工作表面在每班工作結束、有任何漏出或發(fā)生了其他污染時應使用適當的試劑清潔和消毒。5.4安全操作1）試劑及樣品的管理

設有專門儲存陽性血清、質控品的低溫冰箱和/或血清庫、毒種庫，上鎖并由專人管理。對存放試劑和樣品的區(qū)域應進行監(jiān)控2）實驗室的清潔和消毒工作結束后及時消毒工作臺面，有污染的地方要及時消毒處理。3）樣品的采集和處理采集血樣時要注意安全。離心樣品時要使用有密閉蓋的離心機。4）樣品的帶入、帶出和操作不得將非實驗室物品帶入實驗室。常規(guī)處理血液、體液樣品可在工作臺上進行，如樣品有可能濺出，則應戴手套、口罩和防護眼鏡，在生物安全柜中操作。被污染或可能污染的材料在帶出實驗室前應進行消毒。用后的包裹應進行消毒。接收樣品時要檢查樣品質量，有無完整信息，

用于國際空運的樣品要按照國際空運協(xié)會（IATA）的規(guī)則進行包裝和標記，并提交相應的資料。5）儀器設備的安全操作生物安全柜高壓消毒鍋離心機移液器冰箱生物安全柜的使用戴手套防止手部被污染；在開始工作以前，將實驗所必需的物品全部放進安全柜內，并對表面進行消毒處理；對生物安全柜工作臺面，側壁表面以及后壁內側進行消毒處理；讓生物安全柜工作區(qū)排氣幾分鐘之后再開始工作；不要在工作區(qū)內排放過多的物品；不要阻塞進氣格柵；實驗操作盡可能靠近安全柜內部進行；盡量減少手臂的移動。移動時要緩慢；移出手臂之前，表面消毒處理，然后緩慢移出；拿放物品一定要遵守從潔凈區(qū)到污染區(qū)的順序；生物廢棄物袋應放在安全柜內不能拿出安全柜；一旦實驗過程中產生溢出物，用消毒紙巾置于其表面吸附清理，應在生物安全柜處于工作狀態(tài)下進行處理。從安全柜內部拿取可能產生污染的物品時，一定要進行表面消毒處理；將產生氣溶膠的器皿盡可能擺放在安全柜工作區(qū)靠里的位置；潔凈的物品應放置在距離產生氣溶膠器皿至少150mm外，降低交叉污染的可能性；禁止使用氣體火焰，以防影響