梅毒的實驗室診斷

梅毒的實驗室診斷第1頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月一、概述-梅毒病原體（一）、名詞由梅毒螺旋體感染引起的一種慢性全身性性傳播疾病是我國衛(wèi)生部規(guī)定的8種重點防治性病之一《中華人民共和國傳染病防治法》規(guī)定的乙類傳染病世界衛(wèi)生組織列為世界上最常見的50種傳染病之一

梅毒螺旋體（Treponemapallidum，TP）是梅毒的病原體，因其透明，不易著色，故又稱蒼白螺旋體

第2頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）、生物學特性小而纖細的螺旋狀微生物長5～20μm，粗細<0.2μm有6～12個規(guī)則的螺旋基本結構為一原生質的圓柱體，為兩層膜所圍繞行動緩慢而有規(guī)律

-圍繞其長軸旋轉中前后移動-伸縮其圈間之距離而移動-全身彎曲如蛇行

第3頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月（三）、繁殖繁殖方式與其生活環(huán)境有關近年來電子顯微鏡觀察，在培養(yǎng)條件下或在體內適宜環(huán)境中為橫斷分裂，分裂時將軀干分裂成長短兩段分裂增代時間為30—33小時當條件不利時，以分芽子繁殖生活發(fā)育周期:顆粒期、球形體期及螺旋體期，與所致疾病周期、隱伏發(fā)作及慢性病程有關

第4頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月（四）、培養(yǎng)一般不能人工培養(yǎng)Nichols株（有毒株）能接種在家兔睪丸中或眼前房內繁殖，能保持毒力Reiter株能生長繁殖，已喪失致病力Nichols株和Reiter株已廣泛用作多種梅毒血清學的診斷抗原第5頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月(五）、生存條件厭氧寄生物，在人體內可長期生存，體外不易生存干燥、肥皂水及一般消毒劑如1：1000苯酚、新潔爾滅、稀酒精均可于短時間將其殺死在血液中4℃經(jīng)3日可死亡，故在血庫冰箱冷藏3日以上的血液就無傳染性溫度的影響：41-42℃時可生活1-2小時，在48℃僅半小時即失去感染力，100℃立即死亡。對寒冷抵抗力大，在0℃時，可生活48小時，如將梅毒病損標本置于冰箱內，經(jīng)1周仍可致病。在低溫（-78℃）保存數(shù)年，仍可保持其形態(tài)、活動及毒性在封存的生理鹽水稀釋的組織液中可生活10小時左右在潮濕的器具或濕毛巾中，亦可生存數(shù)小時在干燥環(huán)境中可見迅速死亡。第6頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月（六）、宿主梅毒螺旋體只感染人類人是梅毒的唯一傳染源第7頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月（七）、毒力因子目前未證明具有內毒素或外毒素粘多糖和粘多糖酶是其主要毒力因子

第8頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月（八）、致病性由于其表面有賴以生存的莢膜樣的粘多糖，由于粘多糖是宿主組織和血管支架的重要基質成分，粘多糖被梅毒螺旋體分解后，組織受到損傷破壞，從而引起血管的塌陷，血供受阻，造成管腔閉合性動脈內膜炎，動脈周圍炎及壞死，潰瘍等病變第9頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月（九）、抗原1．表面特異性抗原：刺激機體產(chǎn)生特異凝集抗體及密螺旋體制動或溶解抗體，后者加補體可溶解螺旋體2．螺旋體內類屬抗原：可產(chǎn)生補體結合抗體，與非病原性螺旋體有交叉反應3，螺旋體與宿主組織磷脂形成的復合抗原：當螺旋體侵入組織后，組織中的磷脂可粘附在螺旋體上，形成復合抗原，此種復合抗原可刺激機體產(chǎn)生抗磷脂的自身免疫抗體，稱為反應素（Aegagin），可與牛心肌或其他正常動物心肌提取的類脂質抗原起沉淀反應（康氏試驗）或補體結合反應（華氏試驗）第10頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月(十）、免疫以細胞免疫為主，體液免疫只有一定的輔助防御作用當螺旋體從體內清除后可再感染，而且仍可出現(xiàn)一期梅毒癥狀此病周期性潛伏與再發(fā)的原因可能與體內產(chǎn)生的免疫力有關第11頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月二、檢測方法-病原體檢查梅毒螺旋體檢查是診斷早期梅毒的最佳方法。診斷一期梅毒、二期梅毒時，可取患者的滲出液或淋巴結穿刺術得到的組織液，在暗視野顯微鏡下觀察螺旋體的特征性形態(tài)和運動方式.病原學檢查的主要方法有暗視顯微鏡檢查、鍍銀染色法和直接熒光法第12頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月暗視野顯微鏡檢查、鍍銀染色和熒光抗梅毒螺旋體單克隆抗體等檢查方法，直接鏡檢到梅毒螺旋體，在臨床可確診梅毒，且具有快速、方便、易操作的特點。暗視野顯微鏡檢查已被世界衛(wèi)生組織指定為性病實驗室必備項目之一。螺旋體檢查是診斷早期現(xiàn)癥梅毒的最佳方法，對于患者的早期診斷、及時治療、預后和盡早切斷傳染源都有十分重要的意義。如未見到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性，第13頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月第14頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月暗視野顯微鏡檢查第15頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月鍍銀染色第16頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月

檢測方法-血清學檢測

根據(jù)檢測所用抗原不同，臨床血清試驗分為兩大類：1.非梅毒螺旋體抗原血清試驗2.梅毒螺旋體抗原血清試驗第17頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月

檢測方法-非梅毒螺旋體血清試驗性病研究實驗室試驗（VDRL）不加熱血清反應素試驗（USR）血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR、TRUST）第18頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月檢測方法-非梅毒螺旋體血清試驗所有的非梅毒螺旋體血清試驗的抗原基本成分都一樣,其基本成分是心磷脂、卵磷脂和膽固醇抗原抗體結合形成復合物凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒被肉眼所見上述方法的敏感性和特異性都基本相似第19頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月檢測方法-非梅毒螺旋體血清試驗RPR試驗特點：在USR試劑成分的基礎上加入黑色碳顆粒作為沉淀的指示物用白色的硬紙片替代玻片血清不需要滅活不需要顯微鏡觀測結果可作定量試驗有現(xiàn)成的試劑盒攜帶方便操作簡單價格便宜試驗的結果可長期保存

第20頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月檢測方法-非梅毒螺旋體血清試驗甲苯胺紅試驗(TRUST)特點：其原理和成分與RPR試驗相同用紅色的甲苯胺紅替代了碳顆粒其余的特點均與RPR相同第21頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月非梅毒螺旋體血清試驗原理示意圖第22頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月RPR結果第23頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月TRUST結果第24頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月檢測方法非梅毒螺旋體血清試驗臨床意義非梅毒螺旋體抗原血清試驗方法簡單、快速、敏感性和特異性較好。適用于大量人群的篩查。早期梅毒硬下疳出現(xiàn)1周-2周后，血清可呈陽性。經(jīng)治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復發(fā)或再感染的指征。第25頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月檢測方法-非梅毒螺旋體血清試驗特點前帶現(xiàn)象

指非梅毒螺旋體抗原血清試驗中，有時血清中存在高濃度的抗體時出現(xiàn)的弱陽性、不典型或陰性反應的結果，而臨床上又象二期梅毒，此時將血清稀釋后再進行試驗，出現(xiàn)了陽性的結果，該現(xiàn)象稱為前帶現(xiàn)象。第26頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月第27頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月第28頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月檢測方法-梅毒螺旋體血清試驗

采用梅毒螺旋體作抗原，是特異性的抗原體反應。梅毒螺旋體血球凝集試驗（TPHA）梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TP-PA）熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS）、梅毒螺旋體抗體酶聯(lián)免疫試驗（ELSA-TP）梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（WB-Test）第29頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月檢測方法-梅毒螺旋體血清試驗

TPPATPPA試驗原理與TPHA試驗基本相同。TPPA試驗用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒替代TPHA試驗中致敏羊紅細胞，此致敏顆粒與人血清中的抗梅毒螺旋體抗體結合，產(chǎn)生可見的凝集反應，具有較高的敏感性。明膠粒子為洋紅色，在操作部步上也較為方便，出結果較快。檢測IgM或IgG抗體第30頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月檢測方法-梅毒螺旋體血清試驗FTA-ABSFTA-ABS試驗是檢測梅毒的“金標準”試驗。其原理是將有完整形態(tài)的梅毒螺旋體作為抗原，加上經(jīng)吸收劑（用Reiter螺旋體制備而成）吸收過的梅毒患者血清形成抗原抗體復合物，再加入熒光素（FTIC）標記的抗人免疫球蛋白，與抗梅毒螺旋體抗體結合，形成熒光的抗原抗體復合物。在熒光顯微鏡下，螺旋體顯出蘋果綠色的熒光，即為陽性反應。第31頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月+SheepredcellT.pallidum+SensitisedcellSensitisedcellSpecificAntibodyHemagglutinationTPPA/TPHA第32頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月檢測方法-梅毒螺旋體血清試驗梅毒螺旋體抗體酶聯(lián)免疫試驗（ELSA-TP抗原采用超聲破碎的螺旋體抗原或重組抗原檢測IgM或IgG敏感性和特異性與其他試劑基本一致應作進一步評價第33頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月梅毒診斷方法比較

RPR、TRUST、USR、VDRLTPHA、FTA-ABS間接EIA、雙抗原夾心EIA牛心磷脂完整病原體純化抗原梅毒非特異性抗原梅毒特異性抗原梅毒特異性抗原特異性中特異性高特異性高敏感性低敏感性中敏感性高肉眼判讀結果肉眼判讀結果機器判讀結果自動化程度低自動化程度低自動化程度高單獨適用血液篩查單獨不適用血液篩查單獨適用血液篩查適用少批量樣本檢測適用少批量樣本檢測適用大批量樣本檢測價格低價格高價格中

注：反應素存在生物學真陽性反應、生物學假陽性反應、人工假陽性反應。第34頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月

梅毒各期血清學檢驗的陽性率（%）試驗一期梅毒二期梅毒三期梅毒RPR8510075FTA-ABS8610097TPHA77100100

第35頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月

2008年梅毒試劑評估參比試劑：1.美國BD公司生產(chǎn)的“梅毒快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗診斷試劑盒(RPR試劑盒)(批號：8095883)”

2.日本富士株式會社生產(chǎn)的“梅毒螺旋體抗體診斷試劑(凝集法)(TPPA試劑盒)(批號：VN80807)”

3.抗梅毒螺旋體抗體(IgG)檢測試劑盒(免疫印漬法)(16人份/盒)（批號：D081009A1）第36頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月非梅毒螺旋體抗原血清學檢測用試劑敏感性和特異性

試劑名稱生產(chǎn)廠家生產(chǎn)批號敏感性(%)特異性(%)

梅毒快速血漿反應素環(huán)狀上?？迫A生物技術有限公司2007062097.293.4卡片試驗診斷試劑盒(RPR)梅毒甲苯胺紅不加熱血清上海榮盛生物技術有限公司2007050195.495.1試驗診斷試劑盒(TRUST)梅毒甲苯胺紅不加熱血清蘭州生物制品研究所2007020192.296.2試驗診斷試劑盒(TRUST)梅毒甲苯胺紅不加熱血清英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司200806760297.293.4試驗診斷試劑(TRUST)梅毒甲苯胺紅不加熱血清鄭州安圖綠科生物工程有限公司2007050987.194.4試驗診斷試劑盒(TRUST)第37頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月梅毒螺旋體血清學檢測用試劑(ELISA法)的敏感性和特異性試劑名稱生產(chǎn)廠家生產(chǎn)批號敏感性(%)特異性(%)

梅毒螺旋體抗體診斷試劑珠海麗珠試劑有限公司2008061899.699.6(雙抗夾心法)(ELISA-TP)梅毒螺旋體抗體診斷試劑英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司200807750699.698.3(雙抗夾心法)(ELISA-TP)梅毒螺旋體抗體診斷試劑北京華大吉比愛生物技術有限公司2008091299.697.1(雙抗夾心法)(ELISA-TP)梅毒螺旋體抗體診斷試劑北京萬泰生物藥業(yè)有限N2008060699.299.6(雙抗夾心法)(ELISA-TP)梅毒螺旋體抗體診斷試劑北京現(xiàn)代高達生物技術20080600398.999.6(雙抗夾心法)(ELISA-TP)有限責任公司梅毒螺旋體抗體診斷試劑北京金豪制藥股份有限公司20080707698.998.3(雙抗夾心法)(ELISA-TP) 梅毒螺旋體抗體診斷試劑上?？迫A生物技術有限公司2008071497.793.8(雙抗夾心法)(ELISA-TP)

第38頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月梅毒螺旋體血清學檢測用試劑(快速)的敏感性和特異性

試劑名稱生產(chǎn)廠家生產(chǎn)批號敏感性(%)特異性(%)

梅毒螺旋體抗體診斷北京萬泰生物藥業(yè)有限公司02008080398.196.3試紙盒(膠體金法)梅毒螺旋體抗體檢測英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司02712270295.893.8試紙條(膠體金)梅毒螺旋體抗體膠體韓國SD公司02503591.699.2金診斷試劑梅毒螺旋體抗體膠體艾康生物技術(杭州)有限公司20081021687.8100金診斷試劑

第39頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月檢測方法-梅毒螺旋體血清試驗的臨床意義作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(如RPR等)初篩陽性標本的確證試驗。梅毒患者經(jīng)過抗梅治療后，ELSA、TPPA試驗仍可陽性，故TPPA試驗陽性不能作為療效觀察的指標。ELSA、TPPA陽性不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，應結合非梅毒螺旋體抗原血清試驗結果進行診斷。第40頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月非梅毒螺旋體抗原血清學試驗結果解釋示意圖早期晚期一期二期早期潛伏晚期潛伏三期

治療前治療后

陽性陰性第41頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月梅毒螺旋體抗原血清學試驗結果解釋示意圖早期一期二期早期潛伏晚期晚期潛伏三期治療前治療后陽性陰性第42頁，課件共48頁，創(chuàng)作于2023年2月梅毒血清學試驗結果的臨床意義總匯USRELISA意義RPRTPPAVDRLFTA-ABS__排除梅毒一期梅毒的早期