流式細(xì)胞術(shù)講義

流式細(xì)胞術(shù)講義第1頁(yè)，課件共24頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月流式細(xì)胞術(shù)的概念流式細(xì)胞術(shù)（Flowcytometry；FCM）是集計(jì)算機(jī)技術(shù)、激光技術(shù)、電子技術(shù)、流體力學(xué)、細(xì)胞化學(xué)、細(xì)胞免疫學(xué)等多門(mén)高新技術(shù)與方法為一體的現(xiàn)代細(xì)胞分析技術(shù)，它以流式細(xì)胞儀（Flowcytometer）為工具，在單細(xì)胞水平上對(duì)大量細(xì)胞進(jìn)行高速（每秒計(jì)數(shù)可達(dá)1000~10000個(gè)細(xì)胞）、準(zhǔn)確、多參數(shù)的定量分析或分選（純度可達(dá)99%以上），已成為現(xiàn)代骨髓血細(xì)胞學(xué)研究中最先進(jìn)的分析技術(shù)。第2頁(yè)，課件共24頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月流式細(xì)胞術(shù)與PNH的診斷第3頁(yè)，課件共24頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月原理陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥（PNH）是一種獲得性基因突變所致的克隆性疾病，其異常的血細(xì)胞膜糖化肌醇磷脂－錨（GPI－anchor）連接蛋白如CD59,CD55等表達(dá)明顯減低或缺乏，導(dǎo)致對(duì)補(bǔ)體的敏感性增強(qiáng)而產(chǎn)生溶血性貧血。第4頁(yè)，課件共24頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月樣本要求：EDTA抗凝血或骨髓3ml每天上午送檢收費(fèi)：CD55/CD59280元

CD59140元第5頁(yè)，課件共24頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月臨床診斷值CD59陽(yáng)性的紅細(xì)胞大于等于95%CD59陽(yáng)性的中性粒細(xì)胞大于90%第6頁(yè)，課件共24頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月流式細(xì)胞術(shù)與

白血病免疫分型第7頁(yè)，課件共24頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月免疫分型原理流式細(xì)胞術(shù)（FCM）白血病免疫分型是利用熒光染料標(biāo)記的單克隆抗體（McAb）檢測(cè)相應(yīng)抗原，經(jīng)過(guò)多參數(shù)分析，測(cè)定白血病細(xì)胞的細(xì)胞膜、細(xì)胞漿和細(xì)胞核的免疫表型，由此了解被測(cè)白血病細(xì)胞所屬細(xì)胞系列及其分化程度。FCM分析白血病免疫表型時(shí)測(cè)量細(xì)胞數(shù)量一般是在10000~50000個(gè)細(xì)胞之間，而且快速、特異、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，能區(qū)分細(xì)胞的系列，劃分其分化、發(fā)育階段等，對(duì)白血病的診斷與分型、治療方案選擇與預(yù)后判斷、發(fā)病機(jī)制研究等有重要價(jià)值。第8頁(yè)，課件共24頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月樣本要求：肝素抗凝骨髓3ml(或外周血)每天上午送檢收費(fèi)：

70元/每個(gè)單抗(臨床常規(guī)檢測(cè)12個(gè)單抗)第9頁(yè)，課件共24頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月干/祖細(xì)胞標(biāo)志：

CD34、CA133髓系標(biāo)志：

CD33、CD13、CD11b、CD15、MPOB細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志：

CD10、CD19、CD20、CD22、CD23、CD79a、

CyIg、SmIgT細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志：

CD2、CD3、CD5、CD7、CD4、CD8第10頁(yè)，課件共24頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月常用白血病免疫分型熒光素標(biāo)記單克隆抗體組合及其意義管號(hào)三色標(biāo)記McAb染色細(xì)胞及目的1MouseIgG1/MouseIgG1/CD45PerCP陰性對(duì)照及設(shè)門(mén)2CD5FITC/CD7PE/CD45PerCPT淋巴系細(xì)胞、部分早期髓系細(xì)胞3CD10FITC/CD19PE/CD45PerCPB淋巴系細(xì)胞4Anti-HLA-DAFITC/CD13PE/CD45PerCP髓系細(xì)胞、B淋巴系細(xì)胞、部分T淋巴系細(xì)胞5CD34FITC/CD38PE/CD45PerCP反映細(xì)胞分化程度6CD14FITC/CD33PE/CD45PerCP髓系細(xì)胞和單核細(xì)胞7CD20FITC/CD22PE/CD45PerCPB淋巴系細(xì)胞及其分化程度8CD8FITC/CD4PE/CD45PerCPT淋巴系細(xì)胞及其分化程度9CD3FITC/CD16+56PE/CD45PerCPT淋巴系細(xì)胞、NK細(xì)胞10CD36FITC/GP-APE/CD45PerCP幼紅細(xì)胞11CD61FITC/CD41PE/CD45PerCP巨核細(xì)胞第11頁(yè)，課件共24頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月B-ALLT-ALLAMLCD10+－－CD19+－－CD22c/m+－－CD3c/m－+－CD5－+－CD7－+－CD13－－+CD33－－+MPO－－+第12頁(yè)，課件共24頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月AML免疫分型FAB/CD34CD33HLA-DRCD13CD14CD15CD11b其它M1＋＋＋＋－±－M2±＋＋＋－±－M3－＋－＋－±－CD38CD9M4－＋＋±＋＋±M5－＋＋±＋＋±M6±±±±－±－CD71GP-AM7±＋＋－－±－CD41CD61第13頁(yè)，課件共24頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月T-ALL免疫分型CD2CD3CD5CD7CD4CD8TdT早期T-ALL++±+－－+前T－ALL+++++++T-ALL++++±±+第14頁(yè)，課件共24頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月B-ALL免疫分型HLA-DRCD19CD10CD20CD22cIgMmIgMTdT早B前體ALL++－－－－－＋普通型+++－－－－+前B-ALL++±+－＋－－B-ALL++－+＋±＋－第15頁(yè)，課件共24頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月FCM-IM診斷混合型白血病流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定發(fā)現(xiàn)的雙系列或多系列表達(dá)的結(jié)果較多，但雙表型白血病不一定就是混合型，理由如下：混合型白血病診斷：應(yīng)根據(jù)形態(tài)、免疫、遺傳、分子生物學(xué)等綜合判斷，屬雙系列（雙克?。?？雙表型（單克?。?？系列轉(zhuǎn)換型？需考慮到抗原/單抗的多向性：CD4、CD7、CD10、CD38、CD56正常血細(xì)胞隨分化成熟，各系列血細(xì)胞的免疫標(biāo)志特性逐步規(guī)律化：白血病細(xì)胞的分化發(fā)育卻喪失嚴(yán)格的規(guī)律性（lineageinfidelity）與免疫表型的階段性（differentiationasynchrony），因而出現(xiàn)異常抗原表達(dá)，或過(guò)高或過(guò)低或不表達(dá)或交叉系列表達(dá)。第16頁(yè)，課件共24頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月設(shè)門(mén)方案采用CD45/SSC設(shè)門(mén)法（優(yōu)于FSC/SSC設(shè)門(mén)法）CD45其表達(dá)程度在不同細(xì)胞各異。淋巴細(xì)胞>單核細(xì)胞>成熟粒細(xì)胞>原/幼細(xì)胞，而紅細(xì)胞不表達(dá)。SSC在成熟粒細(xì)胞>單核細(xì)胞>原/幼細(xì)胞>淋巴細(xì)胞>紅細(xì)胞。第17頁(yè)，課件共24頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月臨床原/幼細(xì)胞群定量按照新的WHO分型標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)初發(fā)病者，原/幼細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)20%以上即可判為白血病。對(duì)于臨床原/幼細(xì)胞群定量應(yīng)以原/幼細(xì)胞群的細(xì)胞數(shù)為分母。對(duì)于臨床原/幼細(xì)胞群定性比定量更重要。第18頁(yè)，課件共24頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月白血病免疫分型病例分析病例1梁麗琴女性24歲異常表型中:CD10+.CD34+.CD22+.CD38+.CD19+.HLA-DR+結(jié)論：表型符合Pre-B-ALL第19頁(yè)，課件共24頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月白血病免疫分型病例分析病例2王丙午男性68歲異常表型中:CD33+.CD13+.CD15+.CD11b+.HLA-DR+.CD34+.CD19+結(jié)論：表型符合AML-M2第20頁(yè)，課件共24頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月白血病免疫分型病例分析病例3馮亮男性33歲異常表型中:CD34+.CD10+.CD22+.CD19+.CD33+.CD13+.CD15+.HLA-DR+結(jié)論：表型符合雙表型白血病第21頁(yè)，課件共24頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月流式細(xì)胞術(shù)與

造血干/祖細(xì)胞計(jì)數(shù)第22頁(yè)，課件共24頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月原理造血干/祖細(xì)胞存在于骨髓和外周血中，形態(tài)與淋巴細(xì)胞相似，用普通形態(tài)學(xué)方法難于識(shí)別。但根據(jù)造血干/祖細(xì)胞的特征，可