認識微生物 普通光學顯微鏡的使用與維護 課件

項目一認識微生物---普通光學顯微鏡的使用與維護一、普通光學顯微鏡的基本結構絮狀普通光學顯微鏡的構造可分為兩部分：1）機械裝置：鏡座、鏡筒、鏡臂、物鏡轉換器、載物臺、標本移動螺旋、粗調螺旋和細調螺旋等部件組成。2）光學系統(tǒng)：目鏡、物鏡、聚光器、虹彩光圈、光源等組成。絮狀要知道的幾個重要的分辨率人眼：0.2mm/250mm光學顯微鏡：0.2um電子顯微鏡：0.2nm顯微鏡的結構組成光學放大系統(tǒng)照明系統(tǒng)機械和支架系統(tǒng)物鏡光源折光鏡聚光鏡濾光片目鏡絮狀放大倍數(shù)=物鏡放大倍數(shù)×目鏡放大倍數(shù)絮狀在顯微鏡的光學系統(tǒng)中，物鏡的性能最為關鍵，它直接影響著顯微鏡的分辨率。而在普通光學顯微鏡配置的幾種物鏡中，油鏡的放大倍數(shù)最大，對微生物學研究最為重要。與其他物鏡相比，油鏡的使用比較特殊，需在載玻片和鏡頭之間加滴鏡油。顯微鏡的光學原理成像原理光路：光源→虹彩光圈→聚光鏡→通光孔→標本（一定要透明）→物鏡→鏡筒→目鏡→眼。二、油鏡的工作原理絮狀1.增加照明亮度油鏡的放大倍數(shù)可達100×，放大倍數(shù)這樣大的鏡頭，焦距很短，直徑很小，但所需要的光照強度卻最大。絮狀從承載標本的玻片透過來的光線，因介質密度不同（從玻片進入空氣，再進入鏡頭），有些光線會因折射或全反射，不能進入鏡頭，致使在使用油鏡時會因射入的光線較少，物像顯現(xiàn)不清。所以為了不使通過的光線有所損失，在使用油鏡時需在油鏡和玻片之間加入與玻璃的折射率相仿的鏡油（通常使用香柏油，其折射率n=1.52）。增加了視野的進光量，從而使物象更加清晰。絮狀2.增加數(shù)值孔徑(NA)，提高顯微鏡的分辨率顯微鏡的分辨率或分辨力（resolutionorresolvingpower）是指顯微鏡能辨別兩點之間的最小距離的能力。從物理學角度看，光學顯微鏡的分辨率受光的干涉現(xiàn)象及所用物鏡性能的限制，可表示為：式中：λ=光波波長（平均0.55m)

NA=物鏡的數(shù)值孔徑值。絮狀數(shù)值孔徑則取決于物鏡的鏡口角和玻片與鏡頭間介質的折射率，可表示為：

NA=n·sin(α/2）n:物鏡和被檢標本間介質的折射率。

：鏡口角。以香柏油為介質的油鏡所能達到的數(shù)值孔徑（NA一般在1.2～1.4）要高于低倍鏡、高倍鏡等物鏡（NA都低于1.0）。數(shù)值孔徑通常在0.65左右的高倍鏡只能分辨距離不小于0.4μm的物體，而油鏡的分辨率卻可達到0.2μm左右。三、普通光學顯微鏡的使用與維護絮狀1、顯微觀察步驟低倍鏡觀察（10×）：高倍鏡觀察（40×）：油鏡觀察（100×）：低倍鏡的操作絮狀1.置顯微鏡于固定的桌上,，離桌邊8-10cm,大約一掌的距離。2.旋動轉換器，將低倍鏡移到鏡筒下方與之對直。3.調整光源，同時用眼對準目鏡，仔細觀察，視野亮度均勻。4.將標本放在載物臺上，使觀察的目的物置于圓孔的正中央。5.將粗調節(jié)器向下旋轉，眼睛注視物鏡，以防物鏡和載玻片相碰，當物鏡的尖端距載玻片約0.5cm處時停止旋轉。6.雙眼向目鏡觀察，調節(jié)粗、細調節(jié)器直至目的物清晰為止。高倍鏡的操作絮狀1.使用高倍鏡之前，先用低倍鏡觀察，將目的物移至視野正中央。2.旋動轉換器換成高倍鏡，調節(jié)細調節(jié)器直至目的物清晰；如果高倍鏡觸及載玻片應立即停止旋動，說明原來低倍鏡沒有調準焦距，應重調低倍鏡，找到目的物。油鏡的操作絮狀1.如果用高倍鏡未能看清目的物，則可用油鏡。應先用低倍鏡和高倍鏡檢查標本片，將目的物移到視野正中。2.下降載物臺在載玻片上滴一滴香柏油，將油鏡移至正中央，使油鏡頭浸沒在油中，剛好貼近載玻片。用細調節(jié)器微微向上調即可。油鏡的操作絮狀1.如果用高倍鏡未能看清目的物，則可用油鏡。應先用低倍鏡和高倍鏡檢查標本片，將目的物移到視野正中。2.下降載物臺在載玻片上滴一滴香柏油，將油鏡移至正中央，使油鏡頭浸沒在油中，剛好貼近載玻片。用細調節(jié)器微微向上調即可。2、顯微鏡用畢后的處理絮狀拔掉電源插頭下降載物臺取干凈擦鏡紙拭去鏡頭上的香柏油