微生物實(shí)驗(yàn)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法課件

二、實(shí)驗(yàn)原理1.血球計(jì)數(shù)板法

利用計(jì)數(shù)板上有固定體積和精確刻度的兩個(gè)計(jì)數(shù)室進(jìn)行計(jì)數(shù)，是常用的在顯微鏡下對細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行計(jì)數(shù)的方法。具有直觀、快速等優(yōu)點(diǎn)，但誤差較大，不適合細(xì)菌計(jì)數(shù)。（1）計(jì)數(shù)室體積：正方形，邊長為1mm，深0.1mm→蓋上蓋玻片后，容積為0.1mm3。（2）計(jì)數(shù)室刻度的規(guī)格16×25型：16個(gè)中方格，每個(gè)中方格分25個(gè)小格；25×16型：25個(gè)中方格，每個(gè)中方格分16個(gè)小格。二、實(shí)驗(yàn)原理1計(jì)數(shù)室

計(jì)數(shù)室2微生物實(shí)驗(yàn)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法課件3（3）計(jì)數(shù)和計(jì)算方法我們采用的是25×16的，計(jì)數(shù)時(shí)查5個(gè)中方格的總菌數(shù)。如圖：計(jì)算：1個(gè)計(jì)數(shù)室的總菌數(shù)=A/5×25×B1g（ml）樣品中的總菌數(shù)=A/5×25×10×1000×B=50,000A×B個(gè)5個(gè)方格的總菌數(shù)稀釋倍數(shù)（3）計(jì)數(shù)和計(jì)算方法5個(gè)方格的總菌數(shù)稀釋倍數(shù)42.測定生長量的其他方法平板菌落計(jì)數(shù)法、干重法和比濁法等。（1）平板菌落計(jì)數(shù)法（2）干重法（適合濃度較高的樣品）取一定量菌液中→離心或過濾，分離菌體→烘干至恒重(溫度可采用105℃、100℃或80℃)→稱重。一般干重為濕重的10%-20%。2.測定生長量的其他方法5微生物實(shí)驗(yàn)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法課件6（3）比濁法在一定范圍內(nèi)，菌懸液中的細(xì)胞濃度與混濁度成正比，即與吸光值成正比，菌數(shù)越多，吸光值越大。因此，借助于分光光度計(jì)，在一定波長下測定菌懸液的光密度，就可反應(yīng)出菌液的濃度。該法適合測定濃度較高的樣品。（3）比濁法7三、實(shí)驗(yàn)材料1.菌種：酵母菌（Saccharomycescerevisiae）懸液(已稀釋100倍)2.器具：顯微鏡、血球計(jì)數(shù)板、吸管、蓋玻片。四、實(shí)驗(yàn)步驟1.檢查計(jì)數(shù)板

檢查計(jì)數(shù)板是否有破損。2.鏡檢計(jì)數(shù)室

在加樣前，先對計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室進(jìn)行鏡檢。若有污物，則需清洗后才能進(jìn)行計(jì)數(shù)。三、實(shí)驗(yàn)材料83.加樣品

在清潔干燥的血球計(jì)數(shù)板蓋上蓋玻片，再用細(xì)口滴管將酵母菌稀釋液由蓋玻片邊緣點(diǎn)一小滴（不宜過多），讓菌液沿縫隙靠毛細(xì)滲透作用自行進(jìn)入計(jì)數(shù)室，一般計(jì)數(shù)室均能充滿菌液。注意不可有氣泡產(chǎn)生。3.加樣品94.顯微鏡計(jì)數(shù)靜置幾分鐘，將計(jì)數(shù)板放在顯微鏡下，先用低倍鏡找到計(jì)數(shù)室，再換成高倍鏡進(jìn)行計(jì)數(shù)。5.清洗血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)完畢，將計(jì)數(shù)板在水龍頭下沖洗干凈后自行晾干，鏡檢觀察每小格內(nèi)無殘留物為止。

4.顯微鏡計(jì)數(shù)10五、注意事項(xiàng)1.加樣前先搖勻菌液，計(jì)數(shù)室中不可有氣泡產(chǎn)生；2.菌液濃度以每小格有5-10個(gè)菌體為宜。3.計(jì)數(shù)時(shí)，格線上的菌體只數(shù)上方和右邊線上的；4.如遇酵母出芽，芽體大小達(dá)到母細(xì)胞的一半時(shí)，作為兩個(gè)菌體計(jì)算；5.清洗計(jì)數(shù)板時(shí)切勿用手或硬物刷洗。在水龍頭上用水柱清洗，直到洗凈為止。6.一個(gè)樣品要從兩個(gè)計(jì)數(shù)室中計(jì)得的平均值來計(jì)算。五、注意事項(xiàng)11特別注意血球計(jì)數(shù)板均有編號，一人一個(gè)，務(wù)必小心使用，若損壞，需原價(jià)賠償或賠償原物！特別注意血球計(jì)數(shù)板均有編號，一人一個(gè)，務(wù)必12精品課件！精品課件！13