黃芪多糖對克氏原螯蝦生長和非特異性免疫指標(biāo)的影響

黃芪多糖對克氏原螯蝦生長和非特異性免疫指標(biāo)的影響

黃鼠尾糖是黃鼠尾科的主要活性成分之一。它是一種免疫糖。可用作免疫促進(jìn)劑和殺菌劑，具有抗疾病、抗疲勞等作用。克氏原螯蝦(Procambarusclarkii)俗稱小龍蝦,屬節(jié)肢動物門、甲殼綱,是目前全世界最廣的淡水螯蝦養(yǎng)殖種類,在我國長江中下游地區(qū)有廣泛養(yǎng)殖,其肉質(zhì)鮮美、營養(yǎng)豐富深受消費者青睞。近年來,克氏原螯蝦養(yǎng)殖中暴發(fā)流行的白斑綜合征等病害,給養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大損失黃芪多糖能有效地提高動物的免疫力,對克氏原螯蝦的病害預(yù)防具有很好的應(yīng)用前景,且有關(guān)黃芪多糖在克氏原螯蝦養(yǎng)殖中的應(yīng)用研究尚未見報道。本實驗旨在探索黃芪多糖對于克氏原螯蝦生長性能和非特異性免疫因子的影響,以期為克氏原螯蝦的餌料開發(fā)及疫病綜合防控提供有益參考。1材料和方法1.1實驗用黃芪多糖克氏原螯蝦取自江蘇省淡水水產(chǎn)研究所,平均體重(10.25±1.7)g,平均頭胸甲長(28.5±3.7)mm,選取體質(zhì)健壯、反應(yīng)靈敏的個體進(jìn)行實驗,實驗前馴養(yǎng)7d。實驗用黃芪多糖(批號:20120701,購自大連容海生物科技有限公司),含70%的有效成份。以江蘇省淡水水產(chǎn)研究所提供的河蟹用飼料為基礎(chǔ)飼料(不含免疫多糖),分別添加0%、0.2%、0.4%、0.8%的黃芪多糖,配成實驗飼料,自然風(fēng)干。在干燥條件下密封保存?zhèn)溆谩?.2水質(zhì)分析與水質(zhì)分析實驗在80cm×58cm×60cm的聚乙烯塑料箱中進(jìn)行,設(shè)置掩蔽物(PVC管、石棉瓦),養(yǎng)殖用水為充分曝氣3d的自來水,每天采用便攜式多參數(shù)水質(zhì)分析儀(YSI-ADV6600)監(jiān)測水質(zhì),pH值7.4~7.9,總硬度(100~250)mg/L(以CaCO1.3實驗飼料的投喂實驗分為空白對照組(S1)與添加處理組(S2、S3、S4),每組設(shè)置3個平行。每組投放20只克氏原螯蝦(共計用蝦240只)。S1、S2、S3、S4組分別投喂含黃芪多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0%、0.2%、0.4%、0.8%的實驗飼料。每天兩次定點投喂實驗飼料0.5g/只。次日,用虹吸管將未利用飼料吸出。實驗期間,每天更換水量1/3。在0、2、4、6、8、12、16、20d分別對各實驗組的克氏原螯蝦隨機(jī)抽取5只進(jìn)行活體體重稱量,活體抽取血淋巴進(jìn)行免疫指標(biāo)測定,將取樣后的克氏原螯蝦再放回原箱進(jìn)行飼養(yǎng)。實驗期間每天觀察各實驗組中克氏原螯蝦的個體蛻殼數(shù)等情況。1.4生長指數(shù)的測量在0、2、4、6、8、12、16、20d計算增重率(R式中:W1.5抗氧化酶活力測定在0、2、4、6、8、12、16、20d各實驗組中隨機(jī)抽取5只實驗蝦,采用1mL無菌注射器于腹節(jié)第二節(jié)背部抽取血淋巴150μL,將血淋巴置于加入150μL抗凝血劑(4.8g/L檸檬酸,13.2g/L檸檬酸鈉,14.7g/L葡萄糖)的離心管中,置于冰箱中(-80℃)保存,用于測定溶菌酶(LSZ)、酸性磷酸酶(ACP)及超氧化物歧化酶(SOD)活力。使用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒測定超氧化物歧化酶(SOD)、酸性磷酸酶(ACP)及溶菌酶(LSZ)活性,按說明書進(jìn)行操作。SOD以每毫升反應(yīng)液中SOD抑制率達(dá)50%時所對應(yīng)的SOD量為一個SOD活力單位(U/mL)。ACP以100mL血清在37℃時與基質(zhì)作用30min產(chǎn)生1mg酚為1個活力單位(U/100mL)。LSZ在血清中單位為μg/mL。1.6數(shù)據(jù)處理與分析實驗數(shù)據(jù)均以(平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤)表示,通過統(tǒng)計軟件SPSS16.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行重復(fù)測量方差分析,采用SigmaPlot12.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析(ANOVA)與作圖。2結(jié)果2.1配方的特定生長率與增重率不同添加濃度的黃芪多糖對克氏原螯蝦的體重均起促進(jìn)作用且影響極顯著(P<0.01)。16d時,黃芪多糖濃度為0.2%的添加組顯著高于其他實驗組(P<0.05);20d時,0.2%、0.4%、0.8%添加組差異不顯著,但顯著高于對照組(P<0.01,圖1)。增重率受黃芪多糖濃度影響差異不顯著(P>0.05)。20d時,0%,0.2%,0.4%,0.8%添加組的增重率分別為13.72%±6.69%,31.62%±11.58%,37.13%±7.75%,36.47%±29.07%(圖2)。特定生長率變化與增重率變化類似(圖3)。通過修正的高斯模型(R蛻殼數(shù)N2.2各組超氧化物歧化酶及l(fā)sz的比較在不同添加濃度的黃芪多糖組中,酸性磷酸酶(ACP)均呈現(xiàn)先上升達(dá)到峰值再下降后上升的趨勢。4d時各組ACP均達(dá)到峰值;16d時,0.4%的實驗組ACP顯著高于0.2%、0.8%組與對照組(P<0.05);20d時,0.2%、0.4%、0.8%組ACP高于對照組,0.4%、0.8%組與對照組差異極顯著(P<0.01)。超氧化物歧化酶(SOD)變化趨勢與ACP類似。2d時,0.8%組與對照組有極顯著差異(P<0.01);4d時,0.2%、0.4%組與對照組差異極顯著(P<0.01);8d時,0.2%組與對照組差異顯著(P<0.05);16d時,0.2%、0.4%、0.8%組與對照組差異顯著(P<0.05);20d時,黃芪多糖添加濃度為0.2%組與對照組差異顯著(P<0.05)。不同時間及不同添加濃度的黃芪多糖對溶菌酶(LSZ)的影響極顯著(P<0.01)。各組變化趨勢一致;8d時,0.2%、0.4%、0.8%的實驗組與對照組差異極顯著(P<0.01),0.4%、0.8%實驗組明顯高于對照組;8d到12d時,LSZ隨時間增加而下降;12d后,LSZ隨時間增加而上升,在18d時達(dá)到峰值;18d時,0.4%實驗組與對照組差異顯著(P<0.05)。3克氏原螯蝦對鹽脅迫后黃芪多糖的免疫作用黃芪多糖可促進(jìn)細(xì)胞中的核酸、蛋白質(zhì)及多肽的合成。能夠促進(jìn)胃液分泌和養(yǎng)分消化,調(diào)節(jié)代謝過程,促進(jìn)對蝦生長當(dāng)病原入侵時,甲殼動物通過體液免疫因子等識別病原,將信息傳遞到特定細(xì)胞內(nèi)促使免疫因子合成,利用免疫因子或協(xié)助免疫細(xì)胞清除病原等異物發(fā)揮免疫功能在本實驗中ACP與LSZ隨時間變化出現(xiàn)較大幅