維生素C的提取及含量測(cè)定

一、試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)學(xué)習(xí)維生素C主要性質(zhì)掌握2,6-二氯酚靛酚法測(cè)定維生素C原理和方法維生素C的提取及含量測(cè)定第1頁二、試驗(yàn)原理維生素C結(jié)構(gòu)與性質(zhì)維生素定量測(cè)定維生素C的提取及含量測(cè)定第2頁結(jié)構(gòu)與性質(zhì)維生素C/L-抗壞血酸(ascorbicacid)多羥基，內(nèi)酯；酸性；易被氧化：中、堿性，熱，光，重金屬破壞

維生素C的提取及含量測(cè)定第3頁L-抗壞血酸脫氫抗壞血酸*若脫氫維生素C深入氧化，則失去活性維生素C的提取及含量測(cè)定第4頁

維生素C功效維生素C是主要供氫體促進(jìn)膠原合成—壞血病

維生素C的提取及含量測(cè)定第5頁起源

新鮮水果及蔬菜:橙類、番茄、辣椒維生素C的提取及含量測(cè)定第6頁富含維生素C量高食物（毫克/100克食物)

酸棗——830-1170

獼猴桃——568

棗——549

辣椒——185

山楂——89

柿子椒——89

菜花——88

金花菜——85

苦瓜——84

雪里紅——83

豌豆苗——53

油菜——51

橙——49

柚——41

檸檬——40

柑橘——34

水蘿卜——34

大白菜——19

西紅柿——12芥菜頭——80

青蒜——77

維生素C的提取及含量測(cè)定第7頁

2,6-二氯酚靛酚

——氧化還原指示劑維生素C的提取及含量測(cè)定第8頁三、試驗(yàn)內(nèi)容樣品處理：2.0g獼猴桃5～10ml2%草酸研磨成漿狀50ml容量瓶定容過濾維生素C的提取及含量測(cè)定第9頁標(biāo)準(zhǔn)液滴定：5ml1％草酸+5ml0.001mol／L維生素C(176.13)2,6-D滴定到淺紅色，30s；3次（10x2,6-D)計(jì)算1ml2,6-D相當(dāng)于維生素Cmg數(shù)——TC：抗壞血酸濃度（mg/ml）V1：抗壞血酸量（ml）V2：消耗染料溶液量（ml）維生素C的提取及含量測(cè)定第10頁樣品滴定：50ml錐形瓶：濾液5ml（移液管）2,6-D滴定到淺紅色，30s；3次空白滴定：50ml錐形瓶：5mll％草酸2,6-D滴定到淺紅色，30s；3次維生素C的提取及含量測(cè)定第11頁計(jì)算結(jié)果100g樣品含維生素Cmg數(shù)=Bx(A-E)xTx100/CxDA——滴定樣品所消耗2,6-二氯酚靛酚鈉平均毫升數(shù)；E——滴定空白所消耗2,6-二氯酚靛酚鈉平均毫升數(shù)；B——樣品提取液總體積（50ml）；C——每次滴定所用提取液毫升數(shù)（5ml）；D——提取所用樣品重量（2g）；T——1ml2,6-D相當(dāng)于維生素Cmg數(shù)。

維生素C的提取及含量測(cè)定第12頁四、操作關(guān)鍵點(diǎn)定容維生素C的提取及含量測(cè)定第13頁過濾維生素C的提取及含量測(cè)定第14頁移液管使用維生素C的提取及含量測(cè)定第15頁滴定管使用維生素C的提取及含量測(cè)定第16頁滴定維生素C的提取及含量測(cè)定第17頁思索題為何維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液要用新鮮配制？為準(zhǔn)確測(cè)得維生素C含量，試驗(yàn)時(shí)要注意那些操作步驟？維生素C的提取及含量測(cè)定第18頁多酚氧化酶制備和性質(zhì)研究維生素C的提取及含量測(cè)定第19頁一、試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)了解植物組織褐變和多酚氧化酶關(guān)系。學(xué)習(xí)多酚氧化酶提取和活力測(cè)定方法了解影響酶促反應(yīng)速度各種原因維生素C的提取及含量測(cè)定第20頁二、試驗(yàn)原理酶分離純化：材料選擇（新鮮、目標(biāo)蛋白含量高）分離過程中防止一切可能引發(fā)變性條件蛋白質(zhì)純化普通在低溫下進(jìn)行（4oC）細(xì)胞破碎：機(jī)械破碎分離目標(biāo)蛋白：鹽析法維生素C的提取及含量測(cè)定第21頁維生素C的提取及含量測(cè)定第22頁多酚氧化酶催化反應(yīng)鄰苯二酚鄰苯醌維生素C的提取及含量測(cè)定第23頁三、試驗(yàn)內(nèi)容多酚氧化酶制備：50g小塊土豆+50ml氟化鈉（600g/班）搗碎機(jī)中研磨30s3-5層紗布過濾（40-45ml濾液/組）等體積飽和硫酸銨，4℃，30min離心4℃，4000r/min，20min沉淀+15ml檸檬酸緩沖液離心4℃，4000r/min，15min上清→多酚氧化酶粗制品

維生素C的提取及含量測(cè)定第24頁多酚氧化酶性質(zhì)多酚氧化酶作用：催化反應(yīng)多酚氧化酶化學(xué)性質(zhì)：穩(wěn)定性底物專一性（鄰苯二酚，對(duì)苯二酚，間苯二酚）底物濃度酶濃度氫離子濃度（移液管）維生素C的提取及含量測(cè)定第25頁四、操作關(guān)鍵點(diǎn)公用試劑使用、玻璃器皿清潔、定量、定時(shí)維生素C的提取及含量測(cè)定第26頁離心機(jī)及其使用

離心機(jī)是利用離心力對(duì)混合液（含有固形物）進(jìn)行分離和沉淀一個(gè)專用儀器。

普通（非冷凍）離心機(jī)：轉(zhuǎn)速小于4000rpm(RotatePerMinute)，臺(tái)式高速離心機(jī)最大轉(zhuǎn)速可18000rpm。低速冷凍離心機(jī)：轉(zhuǎn)速普通不超出4000rpm高速冷凍離心機(jī)：轉(zhuǎn)速可達(dá)0rpm，搜集微生物、細(xì)胞碎片、細(xì)胞、大細(xì)胞器、硫酸沉淀物以及免疫沉淀物等。超速離心機(jī)：轉(zhuǎn)速可達(dá)50000rpm，能使亞細(xì)胞器分級(jí)分離，并用于蛋白質(zhì)、核酸分子量測(cè)定等。維生素C的提取及含量測(cè)定第27頁維生素C的提取及含量測(cè)定第28頁轉(zhuǎn)頭50TiRotorJA20.1Rotor

JA-18RotorJA17Rotor維生素C的提取及含量測(cè)定第29頁維生素C的提取及含量測(cè)定第30頁離心管維生素C的提取及含量測(cè)定第31頁開啟離心機(jī)控制電閘維生素C的提取及含量測(cè)定第32頁打開離心機(jī)電源開關(guān)維生素C的提取及含量測(cè)定第33頁選擇轉(zhuǎn)頭維生素C的提取及含量測(cè)定第34頁將轉(zhuǎn)頭放入離心機(jī)內(nèi)預(yù)冷維生素C的提取及含量測(cè)定第35頁平衡離心管維生素C的提取及含量測(cè)定第36頁離心管放入轉(zhuǎn)頭、擰緊轉(zhuǎn)頭蓋維生素C的提取及含量測(cè)定