臨床基因擴增檢驗標本的處理保存及核酸提取方法

臨床基因擴增檢查標本處理保存及核酸提取辦法第1頁臨床PCR檢查標本采集、處理、保存及核酸提取辦法江西省腫瘤醫(yī)院陳文學第2頁檢查誤差發(fā)生率1997年,一位意大利著名檢查專家對急診檢查誤差發(fā)生種類和發(fā)生率進行了統(tǒng)計。成果顯約有682%檢查誤差發(fā)生在檢查前期,而來自檢查中期和檢查后期誤差率分別為133%和18:5%■2023年,這位專家又進行了類似統(tǒng)計,成果顯示,檢查前期誤差發(fā)生率仍高達61.9%第3頁正確采集、運輸、保存臨床標本主要性質量確保關鍵性步驟處理包括試驗室檢查醫(yī)患糾紛方法之第4頁核酸提取主要性核酸提取是臨床PCR檢查最為關鍵部分■核酸提取成敗關系到臨床PR檢查正確是否■臨床PCR檢查操作中最易出問題步驟第5頁標本采集標本采集時間對擴增檢測成果影響(過早或過晚都也許會出現(xiàn)假陰性成果)■標本采集部位準備(適度消毒)■標本類型和采集量(衣原體上皮細胞)■采樣質量評價(評價辦法:肉眼觀測、顯微鏡下觀測和化學分析)釆樣及運輸容器(次性無菌器材防腐劑抗凝劑)■標本采集中防污染(-次性無菌容器,避免混入操作者頭發(fā),表皮等,如玻璃容器要高壓滅菌)第6頁標本運輸■樣本一經(jīng)采集,則應盡也許快送至檢測試驗室樣本中如加入了合適穩(wěn)定劑如用于RNA測定加入GITC血清(漿樣本和用于DNA測定EDTA抗凝血等則可在室溫下運輸或郵寄。試驗室應根據(jù)待測靶核酸特性,對多種臨床樣本運輸條件作出對應要求第7頁臨床標本處理和保存血清(漿)全血外周血單個核細胞痰棉拭子膿液體液乳汁組織第8頁血清(漿DNA測定,可按照一般血清標本處理序,對測定影響不大。RNA測定,標本獲取和保存方式對測定成果,也許有決定性影響。最佳是使用EDTA抗凝(嚴禁使用肝素,因其對PCR擴增有抑制,且很難在核酸提取過程中完全清除全血標本,抗凝后6小時內分離血漿,如使用血清標本,則需盡快(2小時內)分離血清,標本短期1~2周)保存可在-20℃下,較長期保存應在70℃下。第9頁全血■以全血作為待測標本時,必須注意抗凝劑選擇,一般使用EDTA-Na2或枸椽酸鈉,不可使用肝素。全血樣本如用于DNA提取檢測可4℃下短期保存,如用于RNA檢測,則應在取血后,盡快提取RNA。第10頁外周血單個核細胞外周血單個核細胞可從抗凝全血制備,主要有兩條途徑,一是使用淋巴細胞分離液分離制備;二是使用紅細胞裂解液,裂解全血中紅細胞,經(jīng)生理鹽水數(shù)次洗滌,即可得到單個核細胞?！鐾庵苎獑蝹€核細胞如暫不提取核酸,可保存于-70℃C下第11頁第12頁第13頁第14頁第15頁第16頁第17頁第18頁第19頁第20頁第21頁第22頁第23頁第24頁第25頁第26頁第27頁第28頁第29頁第30頁第31頁第32頁第33頁第34頁第35頁第36頁第37頁第38頁第39頁第40頁第41頁第42頁第43頁第44頁第45頁第46頁第47頁第48頁第49頁第50頁第51頁第52頁第53頁第54頁第55頁第56頁第57頁第58頁第59頁第60頁第61頁第62頁第63頁第64頁第65頁謝謝！21、要懂得對好事稱頌過于夸張，也會招來人們反感輕蔑和嫉妒。——培根

22、業(yè)精于勤，荒于嬉；行成于思，毀于隨?！n愈

23、一切節(jié)省，歸根究竟都歸結為時間節(jié)省。——馬克思

24、意志命運往往背道而馳，決心到最后會所有推倒?！勘葋?/p>

25、學習是勞動，是充滿思想勞