痰涂片標(biāo)準(zhǔn)化操作

痰涂片標(biāo)準(zhǔn)化操作普仁醫(yī)療集團(tuán)無(wú)錫市第五人民醫(yī)院檢查科劉君第1頁(yè)主要內(nèi)容標(biāo)本搜集與運(yùn)輸抗酸菌涂片Ziehl-Neelsen染色顯微鏡讀片檢查成果登記與玻片保存抗酸菌涂片檢查假陽(yáng)性及假陰性也許原因

第2頁(yè)標(biāo)本搜集與運(yùn)輸?shù)?頁(yè)提綱標(biāo)本容器標(biāo)本編號(hào)搜集辦法與運(yùn)輸注意事項(xiàng)標(biāo)本質(zhì)量評(píng)價(jià)第4頁(yè)容積20-50ml廣口半透明或透明材質(zhì)一次性使用螺旋蓋且能密封防水防滲出側(cè)面容易標(biāo)識(shí)（外壁有部分粗糙面）痰容器規(guī)格第5頁(yè)哪種痰盒合適?第6頁(yè)哪種痰盒合適?第7頁(yè)哪一種容器可作為痰盒？第8頁(yè)標(biāo)本搜集搜集3份標(biāo)本，是發(fā)覺(jué)傳染性結(jié)核病人最優(yōu)選擇

搜集標(biāo)本時(shí)要同步為患者和試驗(yàn)員提供方便。第9頁(yè)搜集三份痰優(yōu)缺陷超出三份痰后，檢出也許性不能大幅度提升晨痰檢出率比即時(shí)痰高搜集三份晨痰對(duì)住院患者比較適合前后兩次檢查在工作量較大時(shí)能發(fā)揮較大效率假如NTP指南中對(duì)搜集痰標(biāo)本另有要求，能夠進(jìn)行調(diào)整第10頁(yè)標(biāo)本搜集即時(shí)痰-夜痰-晨痰

即時(shí)痰 就診時(shí)夜痰

夜間留取痰晨痰 次日清晨留取痰

*假如規(guī)劃指南有所調(diào)整，請(qǐng)根據(jù)指南調(diào)整第11頁(yè)用于療效監(jiān)測(cè)隨訪標(biāo)本隨訪標(biāo)本(在治療期間和結(jié)束時(shí)候搜集)晨痰另外一份標(biāo)本根據(jù)NTP指南進(jìn)行搜集第12頁(yè)標(biāo)本搜集安全意識(shí):患者比標(biāo)本有危險(xiǎn)!假如有試驗(yàn)員指導(dǎo)監(jiān)督病人留痰，那么他面臨危險(xiǎn)要遠(yuǎn)高于其他試驗(yàn)員第13頁(yè)痰標(biāo)本搜集生物安全

就診者不要在試驗(yàn)室內(nèi)留痰。在室外留痰，最佳在陽(yáng)光直射地方。假如不能室外留痰，那么應(yīng)在通風(fēng)良好室內(nèi)且遠(yuǎn)離他人。就診者留痰時(shí)，監(jiān)督病人留痰人員應(yīng)站在留痰者身后或身邊，而不是站在留痰者正面。第14頁(yè)搜集標(biāo)本操作指南

就診者注意事項(xiàng)：如何減少對(duì)他人傳染危險(xiǎn)第15頁(yè)在空氣流動(dòng)地點(diǎn)搜集標(biāo)本流動(dòng)空氣能稀釋氣溶膠

UV光線能將結(jié)核菌滅活霧化消毒第16頁(yè)標(biāo)本搜集向患者解釋清楚下列幾點(diǎn):為何需要痰標(biāo)本；需要幾份痰，檢查三次痰必要性晨痰主要性，第二次送痰必要性第17頁(yè)向患者宣傳教育:如何留痰唾液或鼻腔分泌物不是合格痰標(biāo)本合格痰標(biāo)本來(lái)自肺深部什么是合格痰標(biāo)本，如何咳痰，如何使用痰盒；運(yùn)輸痰盒注意事項(xiàng)第18頁(yè)有關(guān)標(biāo)本信息

留痰或開化驗(yàn)單日期病人姓名，性別，年紀(jì)，住址痰盒上必須有病人有關(guān)信息，不能標(biāo)在痰盒蓋子上診斷機(jī)構(gòu)名稱（假如標(biāo)本是外單位送檢話）第19頁(yè)第20頁(yè)專業(yè)機(jī)構(gòu)痰標(biāo)本運(yùn)輸耐藥監(jiān)測(cè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)集痰點(diǎn)結(jié)防因此外機(jī)構(gòu)送檢標(biāo)本第21頁(yè)標(biāo)本接收查對(duì)化驗(yàn)單檢查標(biāo)本質(zhì)量體積(3-5ml)描述標(biāo)本性狀(干酪,血痰，粘液，唾液）登記標(biāo)本性狀和進(jìn)行試驗(yàn)室編號(hào)第22頁(yè)

只有取得高質(zhì)量痰標(biāo)本才能得到精確可信抗酸菌鏡檢成果第23頁(yè)檢查單參照樣式第24頁(yè)檢查單內(nèi)容病人一般信息：姓名、年紀(jì)、性別初診病人還是隨訪病人痰標(biāo)本送檢日期鏡檢報(bào)告成果檢測(cè)者及審核者報(bào)告日期

第25頁(yè)抗酸菌涂片

第26頁(yè)重點(diǎn)涂片過(guò)程涂抹一張符合要求涂片進(jìn)行示范列出符合要求涂片關(guān)鍵點(diǎn)評(píng)價(jià)已經(jīng)染色涂片第27頁(yè)內(nèi)容涂片制備涂片關(guān)鍵評(píng)價(jià)涂片第28頁(yè)涂片制備

每一張玻片都要編號(hào)

涂抹痰標(biāo)本

自然干燥

加熱固定第29頁(yè)使用鉛筆在磨砂面上編號(hào)第30頁(yè)使用竹木簽進(jìn)行涂抹第31頁(yè)第32頁(yè)不得使用火焰加熱辦法加速痰膜干燥×第33頁(yè)

太厚合適太薄痰膜厚薄第34頁(yè)合適痰膜厚度第35頁(yè)好

脫落好

不均勻第36頁(yè)

合適太厚太薄涂片厚度第37頁(yè)涂片質(zhì)量評(píng)價(jià)不均勻太厚形狀不規(guī)則，太薄第38頁(yè)形狀不規(guī)范，太薄涂片質(zhì)量評(píng)價(jià)第39頁(yè)好涂片:

挑取了痰標(biāo)本膿性部分做螺旋狀軌跡涂抹均勻大小約為2cmX1cm

不要太厚：透過(guò)染色前痰膜能夠隱約看到報(bào)紙上字第40頁(yè)哪個(gè)涂片比較好？第41頁(yè)Ziehl-Neelsen染色第42頁(yè)染色步驟初染(堿性復(fù)紅)脫色(鹽酸酒精)復(fù)染

(亞甲蘭)

第43頁(yè)抗酸染色原理初染時(shí)堿性復(fù)紅與細(xì)胞壁分枝菌酸結(jié)合脫色時(shí)脫色液不能將堿性復(fù)紅從抗酸菌細(xì)胞壁上洗脫抗酸菌染色保持初染顏色復(fù)染提供背景對(duì)比第44頁(yè)抗酸菌非抗酸菌Z－N染色原理

細(xì)胞壁脂質(zhì)復(fù)合物第45頁(yè)抗酸菌非抗酸菌堿性復(fù)紅脫色Z－N染色原理復(fù)染第46頁(yè)染色過(guò)程將涂片排放在染色架上滴加堿性復(fù)紅染色液，加熱出現(xiàn)蒸汽后，保持5分鐘流水輕緩沖洗滴加脫色液，保持1分鐘流水輕緩沖洗滴加亞甲蘭復(fù)染液，保持1分鐘流水輕緩沖洗第47頁(yè)將涂片排放在染色架上，注意間隔第48頁(yè)火焰固定？？？第49頁(yè)滴加堿性復(fù)紅第50頁(yè)加熱第51頁(yè)滴加染液和加熱第52頁(yè)第53頁(yè)滴加染液和加熱第54頁(yè)流水沖洗第55頁(yè)不可大水流迅速?zèng)_洗第56頁(yè)脫色第57頁(yè)流水輕緩沖洗后，復(fù)染第58頁(yè)流水洗去復(fù)染液第59頁(yè)在玻片架上自然干燥第60頁(yè)顯微鏡讀片檢查第61頁(yè)顯微鏡簡(jiǎn)圖第62頁(yè)操作步驟第63頁(yè)顯微鏡檢查操作第64頁(yè)第65頁(yè)第66頁(yè)涂片檢查視野次序第67頁(yè)2cm,3cm=150fields3cm2cm2cm=100fields2cm1cm1cm涂片鏡檢報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)2verticallines,1cmeach=100fields第68頁(yè)第69頁(yè)第70頁(yè)單一抗酸菌第71頁(yè)“V”-字形第72頁(yè)成簇抗酸菌第73頁(yè)復(fù)染太濃造成影響第74頁(yè)合適復(fù)染第75頁(yè)76顯微鏡讀片練習(xí)第76頁(yè)第77頁(yè)報(bào)告成果分級(jí)

陰性

未發(fā)覺(jué)抗酸菌/300視野

報(bào)告實(shí)際菌落數(shù) 1-8條/300視野 (1+) 3-9條/100視野(2+) 1-9條/l0視野 (3+) 1-9條/每視野 (4+) 達(dá)成或超出10條/每視野第78頁(yè)涂片分級(jí):4+

(每個(gè)視野達(dá)成或多于10條)

第79頁(yè)涂片分級(jí):2+(1-9條/10視野最少50個(gè)視野)第80頁(yè)涂片分級(jí):1+

3-9條/100視野第81頁(yè)涂片分級(jí):實(shí)際菌數(shù)

(1－8AFBin300fields)第82頁(yè)將下列成果分級(jí):第83頁(yè)第84頁(yè)

1＋第85頁(yè)第86頁(yè)

2+第87頁(yè)第88頁(yè)3+第89頁(yè)第90頁(yè)

6條(實(shí)際菌數(shù))第91頁(yè)第92頁(yè)

4+第93頁(yè)第94頁(yè)

1＋第95頁(yè)第96頁(yè)3+第97頁(yè)第98頁(yè)

2+第99頁(yè)第100頁(yè)

4+第101頁(yè)登記與玻片保存第102頁(yè)內(nèi)容提綱：

試驗(yàn)室化驗(yàn)單填寫試驗(yàn)室登記本填寫我國(guó)NTP推薦抗酸桿菌萋-尼氏法鏡檢成果報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)報(bào)告假陰性、假陽(yáng)性成果造成后果

第103頁(yè)化驗(yàn)單參照樣式第104頁(yè)試驗(yàn)室登記本第105頁(yè)填寫說(shuō)明：1.試驗(yàn)序號(hào)：為試驗(yàn)室流水號(hào)，每年從“1”開始，初診患者3個(gè)標(biāo)本，隨訪患者2個(gè)痰標(biāo)本，每次均用同一試驗(yàn)序號(hào)編號(hào)。2.痰標(biāo)本起源：根據(jù)患者做痰檢查時(shí)情況，選擇1欄填寫。初診患者填寫門診序號(hào)，隨訪患者填寫患者登記號(hào)。3.性狀：標(biāo)本性狀按照國(guó)家試驗(yàn)室質(zhì)量控制新標(biāo)準(zhǔn)，分為干酪痰（A）、血痰(B)、粘液痰(C)和唾液(D)，分別按A、B、C、D分類登記。第106頁(yè)填寫說(shuō)明：4.成果：涂片陽(yáng)性者使用紅筆統(tǒng)計(jì)為“數(shù)字+”，如“1+、2+、3+”，300個(gè)視野內(nèi)僅見1～8條抗酸桿菌者填寫“條數(shù)”；陰性成果填為“陰性”，不能統(tǒng)計(jì)為“-”或“（-）”。5.報(bào)告人：檢查人員填寫全名。6.備注：填寫需要尤其說(shuō)明事宜。第107頁(yè)精確登記、報(bào)告應(yīng)當(dāng)具有完整性、連續(xù)性、可靠性、及時(shí)行，是結(jié)核病控制規(guī)劃中十分主要一項(xiàng)內(nèi)容。

第108頁(yè)用紅色筆標(biāo)注陽(yáng)性成果陰性成果應(yīng)填記“陰性”不得以“-”體現(xiàn)。第109頁(yè)成果填寫必須精確，如填寫抗酸菌詳細(xì)條數(shù)時(shí)應(yīng)如實(shí)填寫而不應(yīng)當(dāng)簡(jiǎn)寫為陰性或者陽(yáng)性。隨訪成果也應(yīng)當(dāng)精確填寫.第110頁(yè)登記本統(tǒng)計(jì)有何問(wèn)題？第111頁(yè)玻片保存假如使用顯微鏡附帶鏡油，或者是購(gòu)買粘度合適鏡油（immersionoil）,而不是香柏油（cedaroil）,則不需使用二甲苯，直接使用鏡頭紙擦拭即可。第112頁(yè)玻片保存干燥后玻片，按試驗(yàn)室序號(hào)及涂片編號(hào)放置在玻片盒中，寄存在陰涼干燥環(huán)境中。處于潮濕酷熱環(huán)境中抗酸菌易于褪色（見下列圖）第113頁(yè)第114頁(yè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)查痰點(diǎn)涂片送區(qū)縣結(jié)防所區(qū)縣結(jié)防所涂片保存3個(gè)月第115頁(yè)抗酸菌涂片檢查

假陽(yáng)性及假陰性也許原因

第116頁(yè)假陽(yáng)性原因染料沉渣或結(jié)晶等脫色不徹底抗酸性物質(zhì)或細(xì)菌染色液中污染抗酸菌試驗(yàn)室污染第117頁(yè)第118頁(yè)脫色不徹底第119頁(yè)假陽(yáng)性造成成果就診者被誤診誤治隨訪病人延長(zhǎng)了治療時(shí)間揮霍了醫(yī)療資源第120頁(yè)AFB痰檢假陽(yáng)性成果預(yù)防措施使用新載玻片進(jìn)行對(duì)應(yīng)檢查。每個(gè)標(biāo)本均使用新竹簽完成涂抹。所有染液均通過(guò)濾。染色時(shí)玻片彼此保持一定距離。嚴(yán)禁使用染色缸染色。染色時(shí)勿使玻片上染液干燥第121頁(yè)

滴鏡油時(shí)，鏡油容器或吸管不接觸痰膜。不要用竹木簽蘸鏡油避免物鏡鏡頭直接接觸玻片痰膜。完整、精確標(biāo)注痰盒、玻片和登記試驗(yàn)登記本。登記前、后對(duì)檢查單和標(biāo)本盒上標(biāo)注進(jìn)行認(rèn)真查對(duì)。精確統(tǒng)計(jì)和報(bào)告成果AFB痰檢假陽(yáng)性成果預(yù)防措施第122頁(yè)假陰性原因1）觀測(cè)涂片視野數(shù)量不足2）鏡檢技術(shù)能力差3）染色操作不規(guī)范（抗酸桿菌顏色暗淡、背景太淡或過(guò)深）4）顯微鏡存在問(wèn)題5）染液質(zhì)量差

第123頁(yè)假陰性造成成果結(jié)核病人沒(méi)有得到正確診斷和治療，向其他人傳