刺梨原汁酒中總黃酮的測(cè)定

刺梨原汁酒中總黃酮的測(cè)定

原黑莓果汁是以藍(lán)莓果實(shí)為主要原料通過發(fā)酵和提取而成的原果汁。酒中含有豐富的黃酮類化合物，可以預(yù)防神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、皮膚、骨骼和生殖系統(tǒng)的衰老。目前，測(cè)定黃酮類化合物的方法有紫外-可見分光光度法、高效液相色譜法。但測(cè)定刺梨原汁酒的總黃酮方法未見報(bào)道，本文采用蘆丁作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用硝酸鋁-亞硝酸鈉體系顯色，紫外-可見分光光度法測(cè)定刺梨原汁酒的總黃酮。1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)室用水及儀器(1）材料。刺梨原汁酒6批；蘆丁對(duì)照品（批號(hào)：100080-200707），含量92.5%）由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供；實(shí)驗(yàn)室用水為二級(jí)純化水；其它試劑均為分析純。(2）儀器。紫外分光光度計(jì)（型號(hào)：TU-1901，北京普析）；萬分之一電子天平（型號(hào)：AUY220，賽多利斯）；十萬分之一電子天平（型號(hào)：AUW220D，賽多利斯）；TAISITE數(shù)顯電熱恒溫水浴鍋；雙頻數(shù)控超聲波清洗器（型號(hào)：KQ-300VDE，昆山市超聲儀器有限公司）。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1黃酮，原果汁精密吸取刺梨原汁酒10mL至100mL容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，即得待測(cè)樣品。1.2.2對(duì)照溶液的制備精密稱取26.10mg的蘆丁對(duì)照品溶液置于100mL容量瓶中，用無水乙醇溶解并定容至刻度線，搖勻，即得0.2414mg·mL1.2.3顯色劑的制備準(zhǔn)確稱取九水合硝酸鋁于燒杯中，加水配制成10%的溶液待用。另外配制5%亞硝酸鈉和10%的氫氧化鈉溶液于試劑瓶中，待用。1.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別精密量取0.2414mg·mL1.2.5亞硝酸鈉空白溶液精密吸取樣品溶液1.0mL于25mL容量瓶中，別取1.0mL無水乙醇溶液作為空白溶液，分別加5%亞硝酸鈉溶液1.0mL,混勻，放置6min，加10%硝酸鋁溶液1.0mL，混勻，放置6min，加10%氫氧化鈉溶液，搖勻后用乙醇補(bǔ)齊至刻度，再搖勻，顯色30min。在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定以無水乙醇管作為空白測(cè)定吸收度。2結(jié)果與分析2.1紫外分光光度計(jì)掃描蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)硝酸鋁-亞硝酸鈉顯色后用TU-1901型紫外可見分光光度計(jì)在400～600nm范圍掃描。掃描結(jié)果表明，標(biāo)準(zhǔn)溶液均在503nm處有最大吸收，確定該波長(zhǎng)為測(cè)定波長(zhǎng)。2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，吸收度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得出回歸方程y=12.574x+0.00941,R2.3l容量瓶精密度試驗(yàn)吸取樣品溶液1.0mL于25mL容量瓶中，按硝酸鋁-亞硝酸鈉法顯色，測(cè)試6次，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=1.55%，結(jié)果表明精密度良好，見表1。2.4供試品溶液穩(wěn)定性精密吸取樣品溶液1mL于25mL容量瓶中，按硝酸鋁-亞硝酸鈉法顯色，每隔10min測(cè)定一次吸收度，連續(xù)1h考察其穩(wěn)定性，計(jì)算RSD為0.80%，結(jié)果表明，供試品溶液在1h內(nèi)穩(wěn)定，見表2。2.5重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果精密稱取同一批樣品6份，精密吸取10mL，置100mL容量瓶中，按硝酸鋁-亞硝酸鈉法顯色，分別測(cè)定其吸收度，計(jì)算RSD值（n=6）為1.03%，表明該方法重復(fù)性好，見表3。2.6加入2.0.3ml容量瓶取同一批樣品6份見表4，每份5mL于100mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，再精密量取1.0mL于25mL容量瓶中，其中3份加入3mL0.2414mg·mL2.7總黃酮吸收度的測(cè)定精確稱取6批刺梨原汁酒樣品，各10mL，按照1.2.1的方法制備總黃酮，精密吸取樣品溶液1.0mL置25mL容量瓶中，按硝酸鋁-亞硝酸鈉法顯色制備后，分別測(cè)定其吸收度，根據(jù)回歸方程，計(jì)算結(jié)果見表5。3總黃酮含量的測(cè)定本文以蘆丁為對(duì)照品，硝酸鋁-亞硝酸鈉法顯色法測(cè)定刺梨原汁酒中的總黃酮含量，其實(shí)驗(yàn)原理是在待測(cè)溶液中加入硝酸鋁-亞硝酸鈉-氫氧化鈉溶液，鋁離子與黃酮類化合物3,4-二羥基發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)使溶液呈紅色，試樣溶液顏色的深淺由樣品中總黃酮含量決定。結(jié)果表明，刺梨原汁酒中保留了刺梨果中的大量