助溶劑對(duì)氟苯尼考水溶制劑穩(wěn)定性的影響

助溶劑對(duì)氟苯尼考水溶制劑穩(wěn)定性的影響

氟苯尼科又稱氟霉素，是20世紀(jì)80年代開發(fā)的一種新型抗凝劑。其具有抗菌譜廣、吸收良好、體內(nèi)分布廣泛、無潛在的致再生障礙性貧血作用氟苯尼考為白色或類白色的結(jié)晶性粉末,無臭,其化學(xué)結(jié)構(gòu)如圖1所示。氟苯尼考在二甲基甲酰胺中極易溶解,在甲醇中溶解,在冰醋酸中略溶,在水或氯仿中極微溶解氟苯尼考的水溶劑微量溶解的問題嚴(yán)重制約了其在養(yǎng)殖生產(chǎn)中的應(yīng)用,也給其藥理、藥效相關(guān)方面的研究帶來了極大的困擾。目前,尚未見到關(guān)于提高氟苯尼考在水中的溶解度、各種助溶劑對(duì)其藥效的影響及最適用量等方面的相關(guān)報(bào)道。本文以常見、已報(bào)道的二甲基亞砜1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)試劑與菌株1.1.1實(shí)驗(yàn)藥品氟苯尼考粉劑(寧夏太平洋生物制藥有限公司,100%);氟苯尼考注射液(濟(jì)寧市萬生藥業(yè)有限公司,30%);二甲基亞砜、甲醇及乙醇等常用試劑購自天津市天力化學(xué)試劑有限公司;實(shí)驗(yàn)用水均為超純水。1.1.2實(shí)驗(yàn)菌株實(shí)驗(yàn)所用嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)和克里斯坦森耶爾森氏菌(Yersiniakrislensenii)分離株為黑龍江水產(chǎn)研究所魚病研究室鑒定和保存的菌株。1.1.3培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基為普通蛋白胨水,固體培養(yǎng)基為普通瓊脂培養(yǎng)基,培養(yǎng)基所用成分購自北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司。1.2氟苯尼考的制備1.2.1三種助溶劑對(duì)氟苯尼考的助溶效果實(shí)驗(yàn)使用二甲基亞砜、甲醇、乙醇三種助溶劑來促進(jìn)氟苯尼考在其水溶液中的溶解度。經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)粗篩,分別選取最低助溶劑添加量,且在助溶劑最大添加量不超過70%的前提下,分別配制不同助溶劑比例的氟苯尼考最高濃度水溶液。二甲基亞砜助溶的氟苯尼考水溶液濃度為0.1%~30%;甲醇助溶組為0.1%~2%;乙醇助溶組為0.1%~0.7%。1.2.2溫度對(duì)氟苯尼考溶解度的影響實(shí)驗(yàn)將目測能充分溶解的各實(shí)驗(yàn)溶解管分別置于4℃(低溫)、20℃(常溫)、30℃(高溫)三個(gè)溫度下7d,連續(xù)目測觀察藥物是否有析出,以判定其溶解穩(wěn)定性。低溫及常溫控制分別于4℃藥品保存柜及恒溫烘箱中進(jìn)行。1.2.4藥敏片的制作將自制的直徑為6mm的圓形濾紙片高溫高壓滅菌,烘干,然后分別浸潤于含三種助溶劑的3g/L的氟苯尼考水溶液中1h,最終使每個(gè)濾紙片含氟苯尼考30μg,取出低溫烘干,制成藥敏片D(二甲基亞砜助溶)、E(乙醇助溶)和M(甲醇助溶)。用購買的30%氟苯尼考注射液按照同樣的方法制成對(duì)照藥敏片。1.2.5抑菌試驗(yàn)分別取嗜水氣單胞菌和克里斯坦森耶爾森氏菌16%甘油保存菌液200μL,接種到3mL普通蛋白胨水中,28℃震蕩培養(yǎng)過夜。取0.1mL對(duì)數(shù)生長期培養(yǎng)菌液均勻涂板于普通瓊脂培養(yǎng)基平板上,然后等距離貼上對(duì)照及D、E、M四種自制藥敏片,28℃恒溫培養(yǎng)24h,測量抑菌圈直徑。2結(jié)果2.1甲基亞添加量對(duì)氟苯尼考的影響隨著助溶劑添加量的升高,氟苯尼考在水溶液中的溶解度也逐漸增大。各助溶劑的助溶效果見表1。由表1可見,隨著二甲基亞砜添加量的不斷升高,氟苯尼考在其水溶液中的溶解度也逐漸增大。當(dāng)二甲基亞砜的添加量從10%逐漸升高到70%時(shí),氟苯尼考水溶液最大濃度也從0.1%提升至30%。值得注意的是,在二甲基亞砜添加量為20%、30%和40%時(shí),氟苯尼考的溶解度不變,其水溶液最大濃度均為0.5%。由表2可見,水溶液中甲醇濃度低于50%時(shí),氟苯尼考的溶解度極小,低于0.1%。而在甲醇添加量為50%、55%、60%時(shí),可配制穩(wěn)定的0.1%、0.5%、1%的氟苯尼考水溶液,當(dāng)甲醇的添加量達(dá)到70%時(shí),氟苯尼考水溶液的最高濃度僅為2%。由表3可見,配制0.1%和0.5%的氟苯尼考需要添加的乙醇量為10%和50%,在保證乙醇的添加量不超過70%的情況下,最大只能配制出0.7%的氟苯尼考水溶液。由實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可見,1mL乙醇可以助溶0.01g氟苯尼考原粉。2.2氟苯尼考溶解組藥物出用時(shí)間經(jīng)連續(xù)7d目測觀察,使用10%、20%、50%、60%、62.5%、65%、70%的二甲基亞砜配制出的0.1%、0.5%、1%、5%、10%、20%、30%的氟苯尼考溶解組在低溫下均有藥物析出,藥物析出時(shí)間與藥液濃度有關(guān)。而以甲醇和乙醇為助溶劑的溶解組在低溫、常溫和高溫條件下均無藥物析出,溶解效果較穩(wěn)定。2.3藥物含量測定在氟苯尼考溶解后1d和7d時(shí),用紫外分光光度法實(shí)驗(yàn)所選定的三個(gè)溫度下,無結(jié)晶析出的助溶劑溶解管中藥物的含量,各助溶劑溶解管的含量未發(fā)生改變,與藥物配制濃度基本一致。2.4抑菌圈直徑測定對(duì)照及D、E、M四種自制藥敏片分別貼于普通瓊脂培養(yǎng)基上,28℃恒溫培養(yǎng)24h后,測定其抑菌圈直徑大小,具體數(shù)值詳見表4。從表4中可以看出,與對(duì)照組相比,E組抑菌圈直徑明顯增大,而M,D的抑菌圈直徑與對(duì)照組基本一致。3甲基亞對(duì)氟苯尼考的助溶效果液體制劑與其他劑型相比具有分散度大、便于分劑量、易于服用、吸收快、作用迅速、刺激性小等特點(diǎn)本實(shí)驗(yàn)采用添加助溶劑的方法用以增加氟苯尼考在其水溶液中的溶解度,使其達(dá)到速效、高效的目的。根據(jù)市面現(xiàn)主要銷售的氟苯尼考各劑型的濃度來確定所配藥液濃度,以商品化氟苯尼考溶液助溶劑最大添加量不超過70%為限,測定了二甲基亞砜、乙醇及甲醇對(duì)其助溶效果及藥效影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,三種助溶劑對(duì)氟苯尼考均有一定助溶作用,以二甲基亞砜助溶效果最好,甲醇次之,乙醇效果較小。當(dāng)二甲基亞砜添加量達(dá)到70%時(shí),可配制出與商品化最大濃度氟苯尼考溶液(30%)的濃度一致,而甲醇及乙醇助溶的氟苯尼考水溶液最大濃度僅為2%和0.7%。二甲基亞砜是一種強(qiáng)極性惰性溶劑,常溫下為無色透明液體,熱穩(wěn)定性好,能溶于水、乙醇、氯仿等大多數(shù)有機(jī)物中,一向被稱為“萬能溶媒”,廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、石油、化工、印染等行業(yè)中尿、鎮(zhèn)靜作用。能增加藥物吸收和提高療效,因此在國外叫做“萬能藥”。中國藥物檢測中心等在60年代進(jìn)行了全面的毒理檢驗(yàn)及病理解剖證明:二甲基亞砜的半數(shù)致死量LD與二甲基亞砜相比,乙醇及甲醇對(duì)氟苯尼考的助溶效果較差,大量助溶劑的添加對(duì)藥物溶解度提升作用不大,其優(yōu)點(diǎn)是助溶的藥物溶液穩(wěn)定性高,低溫下不易析出。而乙醇助溶組對(duì)藥物抑菌效果影響較大,可能乙醇本身具有一定的殺菌效果,在大量添加助溶劑的同時(shí),影響了正常藥物抑菌效果的判定,而甲醇具有一定毒性,也可能對(duì)藥物效果及抑菌實(shí)驗(yàn)有較大干擾作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,二甲基亞砜助溶效果最好,對(duì)藥效影響最小,可作為氟苯尼考水溶制劑的首選助溶劑。配制溶液時(shí)應(yīng)注意:1.配制氟苯尼考水溶液時(shí),先加助溶劑,充分溶解氟苯尼考后,再加水。2.二甲基亞砜配制