ELISA在食品檢驗(yàn)中的應(yīng)用

9/2/2023酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)是把抗原抗體反應(yīng)的特異性和酶的高效催化作用有機(jī)結(jié)合起來(lái)的一種非放射性標(biāo)記免疫檢測(cè)技術(shù)。ELISA技術(shù)流程第1頁(yè)/共15頁(yè)9/2/2023ELISA在食品檢驗(yàn)中的應(yīng)用食品中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)食品中藥物殘留的檢測(cè)食品中毒素的檢測(cè)食品中微生物的檢測(cè)食品中轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的檢測(cè)食品中其他成分的檢測(cè)第2頁(yè)/共15頁(yè)9/2/20231.1食品中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)

自1983年以來(lái)，ELISA成為許多國(guó)際權(quán)威分析機(jī)構(gòu)(如AOAC)分析殘留農(nóng)藥的首選方法。有些發(fā)達(dá)國(guó)家，如美國(guó)、德國(guó)已開(kāi)發(fā)出商品檢測(cè)試劑盒應(yīng)用于食品、蔬菜和環(huán)境中的農(nóng)藥殘留的檢測(cè)分析。迄今為止，應(yīng)用ELISA檢測(cè)食品中的殘留農(nóng)藥主要是除草劑、殺菌劑和殺蟲(chóng)劑。Clegg等建立了分析草甘膦的ELISA；余萬(wàn)俊等用抗殺蟲(chóng)脒單克隆抗體為試劑，建立了間接競(jìng)爭(zhēng)法、直接競(jìng)爭(zhēng)法和標(biāo)記抗原競(jìng)爭(zhēng)法等三種測(cè)出大米中殺蟲(chóng)脒的ELISA；浙江大學(xué)的朱國(guó)念等研究出ELISA試劑盒來(lái)檢測(cè)克百威。第3頁(yè)/共15頁(yè)9/2/20231.2食品中藥物殘留的檢測(cè)為了促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，預(yù)防動(dòng)物的各種傳染病、寄生蟲(chóng)病的發(fā)生，越來(lái)越多的激素類獸藥、抗菌藥、抗寄生蟲(chóng)藥，常常被用作飼料添加劑，小劑量長(zhǎng)期喂養(yǎng)禽畜水產(chǎn)等動(dòng)物，導(dǎo)致肉類食品中的獸藥殘留超標(biāo)現(xiàn)象日益嚴(yán)重?，F(xiàn)在國(guó)際上比較重視的殘留藥物有抗生素、磺胺類、呋喃類、喹喏酮類、激素類和轉(zhuǎn)基因類藥物。人們都在尋求適用的檢測(cè)方法．第4頁(yè)/共15頁(yè)9/2/20238O年代后期，ELISA在殘留分析中發(fā)展迅速，吳定等制備了兔抗氨芐西林鈉血清，建立了快速測(cè)定乳中氨芐西林鈉含量的ELISA方法。2003年，LoomansE等用新霉胺作為免疫原建立ELISA方法同時(shí)檢測(cè)牛奶中的慶大霉素、卡那霉素和新霉素。第5頁(yè)/共15頁(yè)9/2/20231.3食品中毒素的檢測(cè)食品中的毒素有三種：一、細(xì)菌產(chǎn)生的毒素；二、真菌所產(chǎn)生的毒素三、一些動(dòng)植物中含有天然毒性蛋白。第6頁(yè)/共15頁(yè)9/2/2023采用辣根過(guò)氧化氫酶(HRP)標(biāo)準(zhǔn)高親和力的黃曲霉B1抗體，可以建立直接競(jìng)爭(zhēng)抑制ELISA快速篩選法。在獲得抗河豚毒素(TXX)的單克隆抗體的基礎(chǔ)上建立了檢測(cè)TXX的間接ELISA方法，其最低檢出濃度為1.0×103mg/I，明顯優(yōu)于傳統(tǒng)方法。與傳統(tǒng)方法相比，間接ElISA方法的樣品提取方法比較簡(jiǎn)單。第7頁(yè)/共15頁(yè)9/2/20231.4食品中微生物的檢測(cè)

常規(guī)的微生物學(xué)檢驗(yàn)：以分離培養(yǎng)、生化試驗(yàn)及血清學(xué)試驗(yàn)來(lái)進(jìn)行判斷，不僅需要大量的手工勞動(dòng)，而且檢驗(yàn)周期長(zhǎng)(6—7d)。ELISA檢測(cè)：不受各種樣品成分的影響，而且在2—3d內(nèi)即可完成樣品篩選。糞樣、魚(yú)粉、奶樣，其敏感性和特異性分別高達(dá)100和97.6?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)有些細(xì)菌，如副溶血性弧菌、幽門(mén)螺桿菌、大腸桿菌等在低溫貧營(yíng)養(yǎng)的條件下，可以進(jìn)入“活的非可培養(yǎng)態(tài)”，在適當(dāng)狀態(tài)下還可以復(fù)蘇，仍具有致病力。常規(guī)的培養(yǎng)法無(wú)法檢測(cè)到處于這種狀態(tài)的細(xì)菌，造成漏檢。而ELISA在這方面具有一定的潛力。第8頁(yè)/共15頁(yè)9/2/20231.5食品中轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的檢測(cè)Rogan等人用ELISA法檢測(cè)出傳統(tǒng)大豆加工產(chǎn)品中混有的CP4EPSPS蛋白質(zhì)。這種蛋白質(zhì)檢測(cè)方法具有商業(yè)可利用性，并具有高度選擇性和靈敏性。FDA已研究了用雙夾心ELISA法來(lái)檢測(cè)食品是否含轉(zhuǎn)基因玉米成分。EnvimlogixELISA測(cè)試盒可用于測(cè)定玉米中的cry9e蛋白，共測(cè)試了9種含玉米的食品，結(jié)果的重現(xiàn)性相當(dāng)好。第9頁(yè)/共15頁(yè)9/2/20231.6食品中其它成分的檢測(cè)免疫球蛋白(Immunoglobulin，簡(jiǎn)稱Ig)指具有抗體活性，能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異結(jié)合的球蛋白，是構(gòu)成體液免疫的重要的物質(zhì)。牛乳中特別是初乳中免疫球蛋白的含量相當(dāng)高，最近開(kāi)發(fā)的免疫奶，就是通過(guò)對(duì)乳牛進(jìn)行免疫注射從而提高牛奶中的免疫球蛋白的含量；再有市場(chǎng)中強(qiáng)化免疫球蛋白的奶粉等，因免疫球蛋白也是一種蛋白質(zhì)，具有蛋白質(zhì)的共性，但其在上述制品中含量又相對(duì)的少，常規(guī)的蛋白測(cè)定法無(wú)法測(cè)出免疫球蛋白的含量。用ELISA即可成功解決這個(gè)問(wèn)題，且同時(shí)可完成含量與活性的檢測(cè)。第10頁(yè)/共15頁(yè)9/2/2023以辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記不同動(dòng)物肌肉和血清球蛋A抗血清檢查牛肉、馬肉、豬肉、羊肉和駝肉，檢出率均在95﹪以上，經(jīng)與其他血清學(xué)方法比較，證實(shí)用該法鑒別不同肉類具有較高的敏感性和特異性，而且方法簡(jiǎn)便，設(shè)備簡(jiǎn)單，判斷指標(biāo)客觀真實(shí)。目前，ELISA可檢測(cè)14種畜禽熟肉制品，包括牛肉、羊肉、鹿肉和馬肉等，在摻假率為1﹪時(shí)即可檢出。第11頁(yè)/共15頁(yè)9/2/2023第12頁(yè)/共15頁(yè)9/2/2023

對(duì)試劑的選擇性高,很難同時(shí)分析多種成分對(duì)結(jié)構(gòu)類似的化合物有一定程度的交叉反應(yīng)分析分子量很小的化合物或很不穩(wěn)定的化合物有一定的困難缺陷第13頁(yè)/共15頁(yè)9/2/2023

許多學(xué)者致力于改進(jìn)和完善這種技術(shù)，

重點(diǎn)在多克隆抗體