001液相色譜柱選擇思路

液相色譜柱選擇思路第一講液相色譜柱選擇思路

色譜柱的選擇一半是科學，一半是藝術(shù)。我們之所以這么說，是因為這里有一些確定的明了標準：與應用相適合的色譜柱固定相、與系統(tǒng)壓力限相適應的規(guī)格等等。

對于液相色譜柱的選擇，我們首先要根據(jù)化合物的類型、溶解度確定液相方法的模式,如圖一所示。

反相色譜是到目前為止最通用的HPLC方法，大約占所有方法的60%，將近95%的色譜工作者都在使用，這里我們主要來討論反相色譜柱的選擇。

從化合物的極性考慮（圖二），對于較強極性的化合物，一般會使用較高比例的水相作為流動相，推薦首先嘗試耐高水相比例流動相的StableBond系列，比如SB-C8或SB-Aq，如果SB系列不能得到好的分離結(jié)果，可以嘗試同樣耐高水相比例流動相并提供選擇差異性較大的BonusRP色譜柱?；蛘?，可以選擇極性較強的氰基柱或苯基柱。另外，如果反相色譜柱對強極性化合物保留太弱，則可采用親水色譜模式，比如AgilentZORBAXHILICPlus色譜柱。對于中等極性到非極性的化合物，可以從C18固定相開始，比如AgilentZORBAXEclipsePlusC18，如果保留太強，則可以選擇極性稍強的C8或苯基柱。如果反相模式保留弱，或選擇性差，同樣也可以嘗試HILIC模式，或極性較強的氰基柱。從化合物結(jié)構(gòu)上考慮，首先根據(jù)化合物的大小選擇不同孔徑的色譜柱。一般分子量大于2000或者空間位阻較大的分子，建議使用孔徑較大的色譜柱（比如300?）；分子量小于2000的小分子化合物，建議采用較小孔徑（80?到120?）的色譜柱。一般情況下，我們采用AgilentZORBAXEclipsePlusC18作為方法的首選柱。

如果不能提供較強保留，則對于酸性的目標化合物，可以采用較低的pH流動相增強保留，可選擇耐低pH值流動相的SB-C18/C8色譜柱；對于堿性的目標化合物，可采用較高pH的流動相增強其保留，則可以選擇耐高pH值流動相的ZORBAXExtendC18或PoroshellHPH-C18/C8.對于一些含芳香環(huán)、鹵代物或位置異構(gòu)體的化合物，可以嘗試苯基柱或五氟苯基柱，比如Poroshell120PFP或Poroshell120PhenylHexyl.從流動相的pH上考慮，一般情況首選AgilentZORBAXEclipsePlusC18或PoroshellEC-C18.如果流動相的pH值低于3，則可以選擇耐低pH值流動相的SB系列的色譜柱，比如ZORBAXSB-C18或PoroshellSB-C18.如果流動相的pH值高于7，則可以選擇耐高pH值流動相的Extend或HPH系列的色譜柱，比如ZORBAXExtend-C18,或PoroshellHPH-C18/C8.如果流動相水相比例較高，比如高于90%