頂空毛細管氣相色譜法測定來曲唑的殘留量

頂空毛細管氣相色譜法測定來曲唑的殘留量

托吡魯酯是第三種高選擇性非醇衍生物，具有治療晚乳癥的首選藥物。1材料表面1.1頂空進樣器6890氣相色譜儀、6890化學工作站、7694E頂空進樣器(美國安捷倫公司);ME2355型電子天平(德國Sartorius公司)。1.2來曲唑、來曲唑、zet-u-u-去曲唑來曲唑樣品1(批號:L080320,含量:99.2%)、來曲唑樣品2(批號:L080321,含量:99.1%)、來曲唑樣品3(批號:L080322,含量:99.5%)、中間體樣品1(批號:ZH080315)、中間體樣品2(批號:ZH080316)、中間體樣品3(批號:ZH080317)均為鄭州大學藥學院自制;三氯甲烷、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、異丙醇均為色譜純,DMF、二甲基亞砜(DMSO)均為分析純(天津市科密歐化學試劑有限公司)。2方法和結果2.1條件12.1.1設備及傳輸線溫度色譜柱:HP-5(30m×0.32mm,0.25μm);柱溫:60℃;檢測器(ECD)溫度:270℃;進樣口溫度:200℃;載氣:N頂空條件:樣品瓶加熱溫度:85℃;平衡時間:30min;進樣環(huán)溫度:90℃;傳輸線溫度:110℃;進樣體積:1mL,分流比:10∶1。2.1.2頂空條件及傳輸線溫度色譜柱:HP-5(30m×0.32mm,0.25μm);起始柱溫:50℃,保持5min,以50℃·min頂空條件:樣品加熱溫度:85℃;平衡時間:30min;進樣環(huán)溫度:90℃;傳輸線溫度:110℃;進樣體積:1mL;分流比:10∶1。2.1.3樣品溫度及傳輸線溫度色譜柱:HP-5(30m×0.32mm,0.25μm);起始柱溫:60℃,保持5min,以50℃·min頂空條件:樣品加熱溫度:90℃;平衡時間:30min;進樣環(huán)溫度:90℃;傳輸線溫度:110℃;進樣體積:1mL;分流比:10∶1。2.2對照溶液的制備2.2.1對照品貯備液a精密量取三氯甲烷適量,加DMSO制成每1mL中含有三氯甲烷0.2570mg的溶液,搖勻,作為對照品貯備液a。精密量取貯備液1mL置于25mL容量瓶中,用DMSO稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液a。2.2.2對照品貯備液b精密量取乙醇、丙酮、乙酸乙酯適量,加DMSO制成每1mL中含乙醇23.67mg、丙酮23.66mg、乙酸乙酯27.66mg的溶液,搖勻,作為對照品貯備液b。精密量取1mL貯備液置于25mL容量瓶中,用DMSO稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液b。2.2.3對照品貯備液精密量取異丙醇、DMF適量,加DMSO制成每1mL中含異丙醇29.12mg、DMF3.780mg的溶液,搖勻,作為對照品貯備液c。精密量取貯備液1mL置于25mL容量瓶中,用DMSO稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液c。2.3試驗溶液的制備2.3.1供試品溶液的制備精密稱定中間體4-[1-(1,2,4-三氮唑-1-基)甲基]苯腈樣品1.0g2份,分別置于10mL容量瓶中,用DMSO溶解并稀釋至刻度,搖勻得供試品溶液d、e,備用。2.3.2由來曲唑試劑配制精密稱定來曲唑1.0g,置于10mL容量瓶中,用DMSO溶解并稀釋至刻度,搖勻得供試品溶液f,備用。2.4殘留溶劑的檢測分別按“2.1.1”、“2.1.2”、“2.1.3”項下色譜條件,分別取相應的對照品溶液a、b、c各5mL分別置于頂空瓶中,加蓋密封,頂空進樣,分別記錄色譜,詳見圖1。由圖1可見,三氯甲烷、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、異丙醇、DMF的保留時間分別為3.30、2.97、3.09、3.62、2.933、4.74min;理論塔板數(shù)分別為171219、158259、171462、167197、195966、279562;三氯甲烷與DMSO、乙醇與丙酮、丙酮與乙酸乙酯、異丙醇與DMF分離度R分別為24.3、2.86、16.57、58.22,達到了本試驗所設定的每組殘留溶劑的測定要求。圖1中峰8為溶劑中雜質,此雜質在本測定方法中無干擾,不影響測定。取“2.3”項下供試品溶液d、f進樣,色譜詳見圖2。2.5線性回歸試驗精密量取各相應對照品溶液1.0、2.0、2.5、5.0、10.0mL分別置于10mL容量瓶中,加DMSO稀釋至刻度,分別制成相應的一系列濃度溶液。分別按“2.1.1”、“2.1.2”、“2.1.3”項下色譜條件,各取5mL置于頂空瓶中,加蓋密封,頂空進樣,記錄色譜;以對照品峰面積為縱坐標(Y),對照品溶液濃度為橫坐標(X)進行線性回歸,結果見表1。表1結果表明,三氯甲烷、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、異丙醇及DMF在相應的檢測濃度范圍內線性關系良好。將各相應的對照品溶液逐步釋稀進樣,測得三氯甲烷、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、異丙醇及DMF的最低檢測濃度(S/N>2)分別為87.2、20.71、23.65、54.32、78.45、89.12μg·L2.6精密度的測定分別按“2.1.1”、“2.1.2”、“2.1.3”項下色譜條件,取相應的對照品溶液5mL置于頂空瓶中,加蓋密封,均平行制備5份進行測定,考察精密度。結果三氯甲烷、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、異丙醇及DMF的RSD分別為1.51%、3.94%、1.69%、1.61%、3.41%、4.01%(n=5),符合要求。2.7返回率測試2.7.1回收率的測定精密稱定來曲唑中間體樣品1.0g,共12份,分別置于10mL容量瓶中,前6份精密加入三氯甲烷的對照品貯備液1mL,后6份精密加入乙醇、丙酮和乙酸乙酯的對照品貯備液1mL,均用DMSO溶解并稀釋至刻度,搖勻,分別制成相應的6份試樣。同時制備相同濃度不加樣品的各相應對照品溶液。分別按“2.1.1”、“2.1.2”項下色譜條件,各取5mL置于頂空瓶中,加蓋密封,頂空進樣測定,計算回收率。結果三氯甲烷、乙醇、丙酮、乙酸乙酯的平均回收率為102.7%、98.7%、96.8%、97.0%(n=6),符合規(guī)定要求且方法準確度較好。2.7.2加樣回收率試驗精密稱定來曲唑1.0g,共6份,分別置于10mL容量瓶中,精密加入對照品貯備液1mL,用DMSO溶解并稀釋至刻度,搖勻制成6份試樣。同時制備相同濃度不加樣品的對照品溶液。按“2.1.3”項下色譜條件,各取5mL置于頂空瓶中,加蓋密封,頂空進樣測定,計算回收率。結果異丙醇、DMF的平均回收率分別為100.8%、102.4%(n=6),均符合規(guī)定要求且方法準確度較好。2.8樣品含量測定按“2.1.1”、“2.1.2”項下色譜條件,分別取供試品溶液d、e5mL置于頂空瓶中,加蓋密封,頂空進樣測定,記錄色譜。以峰面積計算樣品中三氯甲烷、乙醇、丙酮、乙酸乙酯的殘留量。結果,3批樣品中均未檢出三氯甲烷、乙醇、丙酮、乙酸乙酯,符合《中國藥典》規(guī)定。按“2.1.3”項下色譜條件,取供試品溶液f5mL置于頂空瓶中,加蓋密封,頂空進樣測定,記錄色譜。以峰面積計算樣品中異丙醇、DMF的殘留量。結果,3批樣品均未檢出異丙醇、DMF,符合《中國藥典》規(guī)定。3討論3.1溶劑dmso和ecd檢測為保證其中的殘留有機物完全釋放,必須選擇適合的溶劑完全溶解待測樣品。由于來曲唑及其中間體在DMSO中易溶,在水中不溶;且DMSO沸點較高,其溶劑色譜蜂在被測組分之后出峰,不干擾殘留溶劑測定,故選擇DMSO為溶劑。采用ECD檢測器時,溶劑DMSO中有雜質峰出現(xiàn)(見圖1峰8),但此雜質在本測定方法中無干擾,不影響測定;采用FID檢測器時未檢測出雜質峰,且溶劑峰不干擾待測組分的測定。3.2分離柱的選擇在有機溶劑的分離測定中,分離柱大多采用填充柱,但對于殘留量的分析,填充柱的分析時間長,分離度低,所以筆者采用彈性石英毛細管柱作為分離柱。HP-5(5%苯基甲基聚硅氧烷)是非極性毛細管柱,適用于多核芳烴、酚、酯、碳氫化合物、醇等,比較適合用于殘留溶劑分析。所以最終選用HP-5作為分離柱,結果,在本試驗條件下各物質均可達到有效分離,且峰形好,靈敏度高,精密度好。3.3設備與儀器的用量對于大部分的有機溶劑殘留量的分析,均選用通用型檢測器FID,但對于含鹵素的有機溶劑如氯仿等,宜采用ECD可達到更高的靈敏度。因此本文根據(jù)溶劑屬性不同而選擇不同的檢測器,以達到更好的分離效果。3.4頂空進樣法直接進樣時,微小不溶雜質有可能堵塞針頭,也會對分離柱產生影響,縮短柱的使用壽命,造成分析困難,且直接手動進樣誤差較大。而采用頂空進樣法,可使殘留溶劑氣化后進樣,濃度與溶液相比有很大增加;也可大大減少溶解樣品的溶劑量和樣品本身對色譜系統(tǒng)帶來的干擾和污染,縮短分析時間,延長色譜柱的使用壽命,且方法的精密度較好。故選擇HP7694E頂空進樣器進行頂空進樣。3.5