丹參酮a對裸鼠hc-106細胞裸鼠皮下移植瘤血管新生抑制作用的研究

丹參酮a對裸鼠hc-106細胞裸鼠皮下移植瘤血管新生抑制作用的研究

癌癥是胃腸道常見的腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率在中國乃至世界上逐年增加。目前以手術治療為主,但復發(fā)轉移率高,其主要原因是腫瘤血管新生導致腫瘤向其他臟器組織侵襲、轉移。丹參酮Ⅱ1材料表面1.1細胞系統(tǒng)1.2實驗動物及動物BALB/c裸小鼠,體質量18~20g,雄性,SPF級,購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司,許可證號SCXK(滬)2008-0016。1.3藥物和試劑TSⅡ1.4熒光倒置顯微檢測5804R高速冷凍離心機(德國Eppendorf公司),CKX41/U-RFLT50熒光倒置顯微鏡(日本Olympus),GalaxySu3000CO2方法2.1hct-116細胞培養(yǎng)2.2裸鼠腫瘤移植模型的構建和組給藥取處于對數生長期的人腸癌HCT-116細胞,調整細胞密度為1×102.3染色程度的觀察組織塊用福爾馬林固定液固定,乙醇脫水,二甲苯透明,石蠟包埋,切片,抗原熱修復,封閉,一抗孵育,二抗孵育,DAB顯色,在顯微鏡下觀察染色程度,自來水充分沖洗終止反應;復染,脫水,透明,常規(guī)樹脂封片;每批染色均用已知的陽性切片做陽性對照,用PBS代替一抗做陰性對照。按照Weidner2.4vegf蛋白表達將裸鼠進行摘除眼球取血,離心得到血清后進行ELISA實驗,測定血清中VEGF的表達情況。操作步驟按參照美國BioSourse公司提供的試劑盒說明書進行。將檢測結果用ELISA標準曲線專用軟件做出VEGF濃度的標準曲線,分別用標準曲線計算出各檢測孔中VEGF的濃度。2.5kbp的制備瘤體組織稱重,切小塊放入微量離心管中。在液氮下,將組織研碎成粉末狀,之后加入含蛋白酶抑制劑的PBS,用網狀過濾器過濾。細胞總蛋白抽提步驟:冰浴下?lián)u動30min進行裂解,之后4℃離心12000r·min2.6統(tǒng)計方法數據以3結果3.1抑制小鼠結腸癌的生長3.2影響小鼠腸腫瘤微血管形成的風險免疫組化結果顯示,DMSO組裸鼠瘤體MVD計數為(60.8±7.0)。TSⅡ3.3TSⅡELISA結果顯示,TSⅡ3.4關于裸鼠腸癌的報道：t-gaeninWesternblot結果顯示,與DMSO組比較,TSⅡ4藥代動力學研究腫瘤血管新生(tumorangiogenesis)或血管生成(vascularization)是實體瘤生長非常關鍵的因素。惡性腫瘤的生長、浸潤和轉移有賴于腫瘤血管的生成,如果沒有血管生成,原發(fā)腫瘤生長不會超過1~2mm中醫(yī)藥在抗腫瘤血管新生方面的研究取得了較大進展,研究較多的中藥有天龍目前研究腫瘤新生血管形成最常用的方法是微血管密度(MVD)的測定。大量研究證明,MVD與血道轉移密切相關Wnt/β-catenin信號通路是目前公認的與大腸癌等多種腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關的信號通路。Wnt/β-catenin信號通路的關鍵分子是β-catenin。當該信號通路激活時,β-catenin從胞漿轉入至細胞核,與T細胞因子/淋巴增強因子(TCF/LEF)蛋白結合,激活靶基因VEGF人腸癌HCT-116細胞系購自中國科學院上海細胞研究所。人腸癌HCT-116細胞,用含10%的胎牛血清,1.5g·L