壁虎抗腫瘤作用的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究現(xiàn)狀

壁虎抗腫瘤作用的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究現(xiàn)狀

壁虎又名蝎子虎、龍眼草和虎科，是中國傳統(tǒng)的腫瘤中藥。根據(jù)《四川中醫(yī)藥》的記載，壁虎的治療有“驅(qū)風(fēng)除血積虛證治腫瘤”的記載。大量臨床實(shí)踐和基礎(chǔ)研究表明，壁虎具有腫瘤作用，對(duì)胃腸道腫瘤有顯著影響。盡管壁虎有明確的抗腫瘤效果,但其成分復(fù)雜、作用機(jī)制尚不清楚。本文就壁虎抗腫瘤作用的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究現(xiàn)狀作一綜述。1壁虎氨基酸測(cè)定壁虎中含有與馬蜂毒相似的有毒物質(zhì)及組織胺類、蛋白質(zhì)。通過氨基酸含量測(cè)定壁虎中含有17種氨基酸,薄層色譜檢測(cè)壁虎中含有膽固醇和硬脂酸;黃筱美等對(duì)蛤蚧與壁虎化學(xué)成分比較分析,發(fā)現(xiàn)壁虎醇提部分經(jīng)氨基酸測(cè)定含有14種氨基酸,水溶部分經(jīng)光譜分析含有18種微量元素。另有研究發(fā)現(xiàn)壁虎中還含有維生素、胡蘿卜素、粗纖維、脂肪等。2不同制備過程中腫瘤活性藥物的效率研究壁虎抗腫瘤藥效學(xué)研究主要表現(xiàn)為整體用藥和從壁虎中分離出有效抗腫瘤成分2個(gè)方面,并分別從整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)2個(gè)層次來進(jìn)行。2.1不同劑量壁虎粉混懸液對(duì)小鼠s180瘤生長的影響將去除內(nèi)臟的干壁虎粉碎成粉末制備壁虎粉。將干壁虎粉與羧甲基纖維素混合成混懸液,配置不同濃度壁虎粉溶液。劉菲等通過建立小鼠S180肉瘤模型來觀察不同濃度的壁虎粉混懸液對(duì)小鼠腫瘤的生長抑制作用,結(jié)果顯示高、中、低劑量組均可抑制小鼠S180肉瘤生長,抑瘤率分別為49.8%,52.8%,43.1%;將上述不同濃度的干壁虎混懸液給大鼠灌胃,取其血清用血清藥理學(xué)方法來研究其體外對(duì)細(xì)胞增殖抑制作用,結(jié)果顯示干壁虎粉含藥血清可抑制食管癌細(xì)胞的生長。2.2壁虎醇提物對(duì)小鼠體內(nèi)腫瘤活性的影響王曉蘭等使用醇沉法制備壁虎醇提物,通過建立S180實(shí)體瘤模型和體外對(duì)食管癌EC9706細(xì)胞的增殖抑制作用來觀察其抗腫瘤活性,體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示壁虎醇提物高、中、低劑量組均可抑制S180肉瘤在昆明小鼠體內(nèi)生長,抑瘤率分別為44.88%,63.94%,69.53%。壁虎醇提物體外能顯著抑制EC9706細(xì)胞生長,呈一定的劑量和時(shí)間依賴性。宋佳玉等在研究壁虎醇提物對(duì)小鼠腎包膜下移植S180肉瘤和體外對(duì)人食管癌EC-109細(xì)胞增殖的抑制作用中表明其體內(nèi)體外均具有抗腫瘤活性。2.3第二,根據(jù)不同的干、鮮壁虎的使用,對(duì)移植性小鼠s180細(xì)胞增殖抑制率,一般可作用于地面治療的抑制藥操作以見表1有學(xué)者使用反復(fù)凍融、低溫離心的方法制備干、鮮壁虎水提物凍干粉。楊金霞等采用昆明小鼠H22移植瘤模型觀察干、鮮壁虎凍干粉體內(nèi)抑瘤活性,結(jié)果顯示干、鮮壁虎凍干粉低、中、高3個(gè)劑量組的抑瘤率分別為25.6%,40.0%,48.5%和20.7%,28.1%,51.1%,體內(nèi)具有抑瘤活性。其含藥血清在體外能夠明顯抑制H22細(xì)胞的增殖,干、鮮壁虎低、中、高含藥血清組的增殖抑制率為17.4%,21.0%,34.5%和16.4%,26.3%,43.2%,體外對(duì)H22細(xì)胞具有殺傷活性。干、鮮壁虎凍干粉對(duì)移植性小鼠S180肉瘤的抑制作用顯示不同濃度的干、鮮壁虎凍干粉灌服荷瘤小鼠10d后,均可抑制小鼠S180肉瘤的生長,且抑瘤作用相近。鮮藥在干制過程中,化學(xué)成分會(huì)發(fā)生變化,從而使藥物的藥效優(yōu)于或有別于干品。然而,有學(xué)者對(duì)壁虎鮮品和炮制品對(duì)小鼠H22肝癌細(xì)胞體內(nèi)外抗腫瘤活性進(jìn)行比較研究,發(fā)現(xiàn)二者體內(nèi)外均能抑制H22細(xì)胞增殖,無顯著性差異。2.4壁虎內(nèi)臟提取液用清水洗凈鮮壁虎,將壁虎分成皮膚、頭部、肌肉骨骼、內(nèi)臟、尾部五部分。另取若干只壁虎,分成內(nèi)臟和去除內(nèi)臟兩部分,以及全壁虎若干,粉碎勻漿凍融低溫離心取上清制備不同部位提取液。楊麗華等研究了該提取液對(duì)培養(yǎng)的H22肝癌細(xì)胞體外抑制增殖作用和對(duì)H22實(shí)體型移植瘤小鼠的體內(nèi)抑制作用,體外結(jié)果顯示,壁虎內(nèi)臟提取液高劑量組可顯著抑制H22細(xì)胞的增殖,抑制率為61.6%。體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn)顯示壁虎提取液對(duì)小鼠腫瘤生長均有一定的抑制作用,其中以全壁虎液抗腫瘤效果明顯,低、高劑量抑瘤率分別為31.6%,52.1%。2.5壁虎多糖對(duì)h2細(xì)胞增殖的抑制率吳雄志等首次在國內(nèi)成功地從壁虎中分離提取抗腫瘤活性成分守宮硫酸多糖。楊麗華等用MTT法檢測(cè)不同濃度的壁虎多糖對(duì)H22肝癌細(xì)胞體外殺傷作用,結(jié)果顯示不同濃度的壁虎多糖均可抑制H22細(xì)胞的增殖,其高劑量組抑制率達(dá)79.1%。但是通過采用昆明小鼠H22移植瘤模型觀察壁虎多糖高、低劑量組的體內(nèi)抑瘤活性,結(jié)果顯示壁虎多糖各組均無明顯抗腫瘤作用,高劑量組的抑瘤率僅為8.8%。2.6mtt法測(cè)體外生長活性采用旋轉(zhuǎn)薄膜分散-超聲法制備鮮無蹼壁虎抗腫瘤活性成分生物堿脂質(zhì)體,該脂質(zhì)體有利于抗癌成分到達(dá)靶部位,提高生物利用度?？到üΦ润w外用MTT法測(cè)定CT-26腫瘤細(xì)胞株的生長活性;體內(nèi)實(shí)驗(yàn)通過建立CT-26荷瘤小鼠模型觀察其體內(nèi)抑瘤活性,結(jié)果顯示鮮無蹼壁虎抗腫瘤活性成分及其脂質(zhì)體體內(nèi)外呈時(shí)間和劑量依賴性抑制腫瘤細(xì)胞增殖,但抗腫瘤活性成分脂質(zhì)體更為明顯。2.7不同的抑制率李欽青等將干壁虎細(xì)粉勻漿后使用胃蛋白酶、胰蛋白酶、仿生酶酶解液得到相對(duì)分子質(zhì)量<3000的小肽進(jìn)行抗腫瘤研究,發(fā)現(xiàn)小分子肽對(duì)S180肉瘤、H22肝癌的抑制率為27.3%,30.1%,32.9%和26.7%,32.1%,34.0%,明顯高于原粉與水煎煮液。李耀輝等對(duì)壁虎中抗腫瘤成分進(jìn)行分離純化并對(duì)其抗腫瘤效果進(jìn)行研究,結(jié)果顯示硅膠柱色譜所得樣品對(duì)CT-26腫瘤細(xì)胞的抑制率45.50%上升為Al2O3柱色譜所得樣品對(duì)HepG2肝癌腫瘤細(xì)胞的60.33%,同時(shí)對(duì)小鼠CT-26腫瘤造模的體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn)中抑制率高達(dá)67.24%,實(shí)驗(yàn)表明壁虎提取物具有較好的抗腫瘤效果。3腫瘤作用機(jī)制的研究壁虎可通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤新生血管形成、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化以及通過免疫調(diào)節(jié)來抑制腫瘤生長。3.1壁虎醇提物誘導(dǎo)工程細(xì)胞凋亡是由基因所調(diào)控的一種細(xì)胞主動(dòng)死亡方式。誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡是目前許多抗腫瘤藥物作用的主要機(jī)制。宋萍等采用血清藥理學(xué)探討鮮壁虎凍干粉對(duì)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡的影響,結(jié)果形態(tài)學(xué)、流式細(xì)胞儀和TUNEL法結(jié)果均證實(shí)含鮮壁虎血清能夠誘導(dǎo)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞,其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的機(jī)制可能與上調(diào)Bax基因有關(guān)。宋佳玉等把Fas和Caspase-3作為了解壁虎醇提物誘導(dǎo)食管癌細(xì)胞凋亡分子機(jī)制的切入點(diǎn),發(fā)現(xiàn)Fas和Caspase-3蛋白的表達(dá)隨著藥物濃度的增加而增強(qiáng),推測(cè)壁虎醇提物體外誘導(dǎo)細(xì)胞EC-109凋亡可能和死亡受體介導(dǎo)的信號(hào)通路相關(guān)。王曉蘭等在壁虎醇提物對(duì)EC9706細(xì)胞增殖抑制作用基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討了其作用機(jī)制,發(fā)現(xiàn)其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制可能與其能調(diào)控腫瘤細(xì)胞中凋亡蛋白Bax的蛋白表達(dá),升高Bax/Bcl-2有關(guān)。提示死亡受體途徑和線粒體途徑均可能在壁虎醇提物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過程中發(fā)揮作用。3.2sp免疫組化法檢測(cè)微血管密度和血管內(nèi)皮生長因子腫瘤新生血管的形成是腫瘤生長、侵襲和轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ),抑制或破壞腫瘤新生血管的形成及生長,切斷腫瘤賴以生存的“生命線”,可達(dá)到抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的目的。采用Weider方法檢測(cè)腫瘤組織的微血管密度,SP免疫組化法檢測(cè)血管內(nèi)皮生長因子(VEGF),堿性成纖維細(xì)胞因子(bFGF)的蛋白表達(dá)來探討鮮壁虎凍干粉對(duì)H22肝細(xì)胞癌血管生成機(jī)制,發(fā)現(xiàn)其抑制H22小鼠腫瘤生長及血管生成的機(jī)制可能是通過降低腫瘤組織內(nèi)bFGF,VEGF蛋白的表達(dá)而達(dá)到抗腫瘤作用。劉菲等在干壁虎粉對(duì)S180荷瘤小鼠的抑制作用中也表明干壁虎粉抑制小鼠肉瘤S180生長可能與降低腫瘤組織bFGF,VEGF蛋白的表達(dá)有關(guān)。3.3虎誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化誘導(dǎo)分化是指惡性腫瘤細(xì)胞在體內(nèi)外分化誘導(dǎo)劑的作用下,向正常分化方向逆轉(zhuǎn)的現(xiàn)象。目前,壁虎誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化僅局限于肝癌細(xì)胞,主要從細(xì)胞形態(tài)、生化指標(biāo)及細(xì)胞周期的改變來判定肝癌細(xì)胞分化。吳雄志等在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)守宮硫酸多糖具有誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞分化的作用,肝癌細(xì)胞形態(tài)由多變形變?yōu)榧忓N形,且甲胎蛋白分泌量減少,轉(zhuǎn)氨酶分泌量增多,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞被阻滯于G/M期。3.4免疫抑節(jié)作用4活性成分的分離純化和作用機(jī)制壁虎中含有高活性、低毒的抗腫瘤成分,但目前對(duì)其研究存在諸多問題,基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究尚處在粗體物水平,其抑瘤作用主要由一種成分起作用還是由多種成分協(xié)同起作用尚不清楚;對(duì)很多有效成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)尚不清楚,尚未找到完全單一的活性成分;分離純化壁虎中抗腫瘤有效成分存在難題,如蛋白質(zhì)或多肽活性成分分離難,其一是易受溫度、酸堿度等的影響而變性,其二是活性成分不穩(wěn)定易降解等;抗腫瘤作用的靶點(diǎn)和