木通中木通酸和木通皂苷sc的提取工藝研究

木通中木通酸和木通皂苷sc的提取工藝研究

木通是木通科植物的一個干燥的例子（通常被稱為五葉木通）。三個木通科植物（tnb.）的結(jié)構(gòu)是干燥的藤本植物。它有苦味、性溫和、心臟火、舒適、排便、經(jīng)絡(luò)下乳房的作用，主要用于胸部興奮、喉嚨麻痹、喉嚨疼痛、尿紅、五淋、水腫、周界疼痛、開胸隔小等癥狀。根據(jù)藥理學(xué)研究，木通具有利尿、抗菌、腫瘤的活性。為了找到三種不同類型的木通的生產(chǎn)性成分（5-葉、3-銀），并確定以不同的間隔對三個不同生產(chǎn)區(qū)進(jìn)行tlc和hplc進(jìn)行識別和檢測的質(zhì)量控制。為了找到三種不同類型的木通的生產(chǎn)性成分（5-葉、3-白），以澄清反應(yīng)后三葉樹的不同生產(chǎn)量和不同生長期的20個樣品，并為標(biāo)準(zhǔn)木材的多指標(biāo)質(zhì)量控制。在本書中，作者識別了三個不同產(chǎn)地（5-葉、3-白）中的不同異質(zhì)異體成分，并確定了具有不同通量產(chǎn)品的質(zhì)量控制。在三個不同生產(chǎn)區(qū)中，對20個樣品進(jìn)行了tlc和hplc的識別。結(jié)果表明，這三種藥物的化學(xué)成分非常不同。除了含有-醇和牛仔布酸的共同成分quinac和木通糖苷（ahybabo生長）。結(jié)構(gòu)三：，24-二羥基-30-脫甲基環(huán)己烯酸十二烷基二醇酸（20-29-二羥基-二羥基-二羧酸）。結(jié)構(gòu)三：三羥基色胺、三羥基色胺和三羥基色胺的三種成分，以及春一致物質(zhì)元-3-o-iii-o-iii-o-iii-o-iii-o-iii-o-iii-o-iii-philo-iii-l-loramol-a.根據(jù)文獻(xiàn)，木通酸僅存在于木通科木材通，是木通的一種特殊成分。為了提高這兩種成分的提取率，作者優(yōu)化了木通酸和木通糊精的提取過程。1實驗儀器和材料WatersAlliance2695高效液相色譜儀(美國Waters公司),包括Waters2695分離系統(tǒng)(四元泵、柱箱及自動進(jìn)樣器)、Waters2996紫外二極管陣列檢測器和Millennium32色譜工作站.乙腈為色譜純(Fisher公司),水為Mill-Q超純水,甲醇、乙醇為優(yōu)級醇(北京化工廠).對照品木通酸和木通皂苷Stc為本實驗室自制,經(jīng)HPLC面積歸一化法測定純度均大于99%.實驗材料系采自安徽銅陵果后期的五葉木通,經(jīng)中國藥品生物制品檢定所張繼副主任藥師鑒定.2方法和結(jié)果2.1提取工藝的正交試驗2.1.1色譜柱的選擇AgilentSB-C18(5μm,4.6mm×250mm)色譜柱;以V(乙腈)∶V(水)=65∶35為流動相;進(jìn)樣量20μL;流速1mL/min;柱溫25℃;檢測波長203nm.2.1.2對照品溶液的制備分別精確稱取30℃減壓干燥之恒重的對照品木通酸(以下稱CK1)5.61mg、木通皂苷Stc(以下稱CK2)6.62mg于10mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,密封置4℃冰箱保存,用時稀釋10倍配成對照品溶液.2.1.3試品溶液的制備精確稱取木通藥材粉末(過4號篩)2g于100mL三角瓶中,加入溶劑后稱重,按正交試驗設(shè)計的工藝進(jìn)行提取.超聲提取后再稱重,補(bǔ)足損失的溶劑.過濾,取續(xù)濾液過0.45μm的微孔濾膜即得試品溶液.2.1.4提取時間a本實驗采用超聲方法提取,設(shè)置3個考查因素:溶劑種類(A)、提取時間(B)、溶劑用量(C),各取3個水平:95%乙醇、80%乙醇、純甲醇;0.5,1.0,1.5h;25,50,75mL,誤差項E.以木通酸和木通皂苷Stc的含量為考查指標(biāo),采用L9(34)正交表進(jìn)行正交試驗.因素和水平見表1,結(jié)果見表2,方差分析見表3.正交試驗結(jié)果中,由極差可知各因素對木通酸和木通皂苷Stc提取工藝的影響.CK1(木通酸):B(0.0153)>A(0.0047)>C(0.0043),即提取時間>溶劑種類>溶劑用量;CK2(木通皂苷Stc):B(0.0067)>C(0.0026)>A(0.0020),即提取時間>溶劑用量>溶劑種類.由因素的各水平平均值可知CK1:A因素ˉⅡ＞ˉⅢ＞ˉⅠ?B因素ˉⅢ＞ˉⅡ＞ˉⅠ?C因素ˉⅠ＞ˉⅢ＞ˉⅡ?故CK1的最佳水平組合為A2B3C1.CK2:A因素ˉⅡ＞ˉⅠ＞ˉⅢ?B因素ˉⅢ＞ˉⅡ＞ˉⅠ?C因素ˉⅡ＞ˉⅠ＞ˉⅢ?故CK2的最佳水平組合為A2B3C2.方差分析表明,CK2:A因素離差平方和SSA=0.000006,其值小于誤差離差平方和SSE=0.000009,故因素A可合并為誤差項,新誤差離差平方和SSE=0.000011.因素B,FB=9.36,大于臨界值F0.05(2,4)=6.94,故因素B影響顯著.因素C,FC=1.73,小于臨界值,故因素C影響不顯著.CK1:因素B,FB=23.53,大于臨界值F0.05(2,2)=19.00,故因素B影響顯著.因素A的FA=2.20和因素C的FC=1.93均小于臨界值,故因素A和C為影響不顯著因素.方差分析的結(jié)果,僅B因素(超聲時間)對CK1和CK2均具有顯著性影響(P<0.05).A(溶劑種類)、C(溶劑用量)因素均為影響不顯著.考慮節(jié)省溶劑,故優(yōu)選出合理的提取工藝:以體積分?jǐn)?shù)為80%的乙醇作溶劑,超聲提取1.5h,溶劑用量50mL(藥材的25倍).2.2方法學(xué)評價2.2.1進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系分別精確移取2.1.2節(jié)中木通酸和木通皂苷Stc對照品溶液2,5,8,12,20,30,50μL進(jìn)樣,按上述色譜條件測定,記錄色譜峰面積.以進(jìn)樣量X(μg)為橫坐標(biāo),峰面積Y為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,考查對照品峰面積Y與對照品含量X(μg)的線性關(guān)系.結(jié)果表明,進(jìn)樣量與峰面積呈良好線性關(guān)系.CK1:線性方程Y=612383X-10183,相關(guān)系數(shù)R2=0.9999;線性范圍:0.112～2.800μg.CK2:Y=329435X+36604,R2=0.9999;線性范圍:0.132～3.300μg.2.2.2儀器精密度試驗和反應(yīng)偏差取同一對照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次,以上述色譜條件測定,記錄峰面積,測得木通酸和木通皂苷Stc峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為0.99%和0.95%,表明儀器的精密度良好.2.2.3重復(fù)性試驗按2.1.3節(jié)中供試品溶液制備方法選擇正交試驗優(yōu)選提取工藝,即用體積分?jǐn)?shù)為80%乙醇溶劑,超聲提取1.5h,溶劑用量25mL進(jìn)行提取,制備樣品溶液5份,按上述色譜條件測試.結(jié)果5份樣品溶液中木通酸和木通皂苷Stc含量的RSD分別為1.69%和1.88%,說明上述試驗具有良好重復(fù)性.2.2.4樣品溶液穩(wěn)定性按供試品溶液制備方法,選擇正交試驗優(yōu)選的合理提取工藝,制備樣品溶液1份,分別在0,6,12,24,48h進(jìn)樣,按上述色譜條件檢測,記錄峰面積.結(jié)果顯示,木通酸和木通皂苷Stc峰面積的RSD分別為0.87%和0.83%,說明處理后的樣品溶液室溫放置48h內(nèi)是穩(wěn)定的.2.2.5樣品的回收率采用加樣回收法,精確稱取五葉木通藥材粉末1g(已知含量),加入適量對照品CK1和CK2(以溶液狀態(tài)加入),以正交試驗優(yōu)選的提取工藝,按2.1.3節(jié)中方法制備樣品溶液,用上述色譜條件進(jìn)行檢測,計算回收率.結(jié)果木通酸的回收率是98.00%(RSD為2.24%),木通皂苷Stc的回收率是98.15%(RSD為3.18%),表明該提取方法具有良好的回收率.2.2.6樣品的提取工藝考察取木通酸和木通皂苷Stc的對照品溶液,以等體積混合進(jìn)樣,測定其峰面積和保留時間.木通皂苷Stc(CK2)在30min出峰,木通酸(CK1)在48min出峰.分別精確稱取木通藥材樣品粉末2g,以正交試驗優(yōu)選的提取工藝,按2.1.3節(jié)中供試品溶液制備方法制備樣品溶液,以上述色譜條件檢測.結(jié)果見圖1和文獻(xiàn).3超聲、回流提取和索氏提取提取工藝比較正交試驗結(jié)果表明,提取時間對木通酸和木通皂苷Stc的提取率均有顯著性影響.木通酸的最佳水平組合為A2B3C1,木通皂苷Stc的最佳水平組合為A2B3C2,兩者的差別在于因素C.方差分析表明,木通皂苷Stc的C因素影響不顯著,因此,為節(jié)省溶劑量,選擇了木通皂苷Stc提取條件與木通酸相同,即體積分?jǐn)?shù)為80%乙醇作溶劑,提取時間1.5h,溶劑用量12.5倍.由于超聲提取與回流提取和索氏提取在溶劑種類(80%乙醇)、溶劑用量(12.5倍)和提取時間(1.5h)相同情況下,對木通酸和木通皂苷Stc的提取