葛根素普通粉及其微粉在beagle犬體內(nèi)生物利用度比較

葛根素普通粉及其微粉在beagle犬體內(nèi)生物利用度比較

葛根是中醫(yī)中常用的一種，其主要有效成分是葛根素（pur）和大豆苷（daidzn）。其中，葛根素是葛根心腦血管活性的主要物質(zhì)基礎(chǔ)[1.2]。臨床上常用于治療冠心病、心絞痛及腦血栓等疾病[3～5]。實(shí)驗(yàn)證明,犬口服葛根素的生物利用度低,其絕對(duì)生物利用度約為3%,大部分以原形從糞便中排出。為了提高葛根素的生物利用度,筆者制備了葛根素微粉。本文旨在采用高效液相色譜法,測(cè)定葛根素普通粉及其微粉在Beagle犬體內(nèi)的生物利用度。葛根素:北京協(xié)和制藥廠(批號(hào):030404)經(jīng)本室HPLC法測(cè)定含量為98%以上。葛根素微粉由濟(jì)南倍力粉體工程中心加工,中心粒徑為2μm左右。乙腈、甲醇,均為HPLC級(jí),水為重蒸餾水。Agillent1100高效液相色譜儀,DAD二極管陣列檢測(cè)器,HP1100色譜工作站;AgillentXDB-C18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm);預(yù)柱為AgillentXDB-C18柱(4.6mm×12.5mm,5μm);梯度洗脫;0min乙腈∶水(10∶90)0.7mL/min;15min乙腈∶水(60∶40)0.7mL/min;20min乙腈∶水(70∶30)0.7mL/min;30min乙腈∶水(100∶0)0.7mL/min;柱溫為室溫;檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm。Rotofix-32型臺(tái)式離心機(jī)(德國(guó)),MS2型旋渦振蕩器(廣州科儀實(shí)驗(yàn)室技術(shù)有限公司),5415D型eppendorf離心機(jī)(德國(guó))。Beagle犬,體重(10±0.1)kg;雌雄兼用,由廣州醫(yī)藥工業(yè)研究院Beagle犬培育中心供應(yīng)。精密吸取0.5mL血清,加入甲醇2.0mL,旋渦振蕩1min,離心15min(3000r/min),上清液用氮?dú)饬鞔蹈?殘?jiān)?.2mL甲醇溶解,離心10min(10000r/min),取上清液進(jìn)樣。(1)色譜條件:葛根素對(duì)照品液、空白血清、含藥血清經(jīng)處理后的溶液的HPLC色譜圖,見(jiàn)圖1、圖2、圖3。由圖可見(jiàn)血清中內(nèi)源性雜質(zhì)對(duì)葛根素的測(cè)定無(wú)干擾,葛根素的保留時(shí)間為8.2min。(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線制備:稱(chēng)取葛根素對(duì)照品適量,用甲醇溶解,制成每mL約含0.1mg的溶液,作為貯備液。精密吸取此貯備液用甲醇稀釋為含葛根素為0.01875、0.0125、0.009375、0.00625、0.003125mg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)液。分別吸取以上標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5mL,加入空白血清0.5mL,按樣品處理方法進(jìn)行處理,得一系列對(duì)照品溶液。分別吸取以上系列對(duì)照品溶液20μL,進(jìn)樣測(cè)定峰面積。以葛根素濃度為橫坐標(biāo),以峰面積為縱坐標(biāo),得葛根素對(duì)照品在血液中的標(biāo)準(zhǔn)曲線,其回歸方程分別為Y=149750X-55.665(r=0.9963),在0.15625μg～0.9375μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。由于回歸方程中b/a>100,因此采用外標(biāo)一點(diǎn)法定量。(3)回收率試驗(yàn):取0.5mL空白血清6份,分別加入不同量的葛根素對(duì)照品溶液,旋渦混合均勻,分別加入甲醇2.0mL,旋渦振蕩1min,離心15min(3000r/min),上清液用氮?dú)饬鞔蹈?殘?jiān)?.2mL甲醇溶解,離心10min(10000r/min),取上清液進(jìn)樣。記錄峰面積,求回收率。結(jié)果見(jiàn)表1,高、中、低濃度的平均回收率為96.58%。結(jié)果表明:回收率在要求范圍內(nèi),該方法合理、可行。(4)方法精密度試驗(yàn):取含葛根素的血清樣品0.5mL,加入甲醇2.0mL,旋渦振蕩1min,離心15min(3000r/min),上清液用氮?dú)饬鞔蹈?殘?jiān)?.2mL甲醇溶解,離心10min(10000r/min),取上清液進(jìn)樣。采用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算,求RSD(%)。結(jié)果,見(jiàn)表2、表3。結(jié)果表明:日內(nèi)及日間精密度均<10%,該方法的精密度良好。(5)數(shù)據(jù)分析:按2.2樣品處理方法項(xiàng)下對(duì)各樣品進(jìn)行處理,進(jìn)樣,采用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算出各樣品的血藥濃度,將測(cè)得的血藥數(shù)據(jù)輸入計(jì)算機(jī),用3P97藥動(dòng)學(xué)統(tǒng)計(jì)程序處理,結(jié)果表明葛根素普通粉及其微粉的體內(nèi)過(guò)程均符合二室開(kāi)放模型。其主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù),見(jiàn)表4。從表中數(shù)據(jù)直觀來(lái)看,葛根素微粉在體內(nèi)血藥濃度與時(shí)間曲線下的面積遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于普通粉,經(jīng)t檢驗(yàn),普通粉與微粉組比較有極顯著性差異(t<0.01)。3葛根素口服微粉的制備葛根素具有毒性小、代謝快的優(yōu)點(diǎn)。犬口服葛根素的生物利用度低,其絕對(duì)生物利用度約3%,大部分以原形從糞便中排出。因此,我們將其粉碎成微粉,旨在通過(guò)改變其粒徑,來(lái)提高葛根素口服給藥在體內(nèi)的吸收。實(shí)驗(yàn)證明,制成微粉后,其達(dá)峰時(shí)間縮短,峰濃度提高,在Beagle犬體內(nèi)血藥濃度與時(shí)間曲線下的面積也大大提高,表明其生物利用度明顯提高,從而為將葛根素微粉進(jìn)一步開(kāi)發(fā)成膠囊劑、片劑及其它劑型提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1實(shí)驗(yàn)材料2方法和結(jié)果1.1藥物和試劑1.2儀器和鉻條件1.3普通粉、葛根素微粉的制備取Beagle犬6只,隨機(jī)分為2組,每組3只,試驗(yàn)前禁食12h,葛根素普通粉、葛根素微粉分別按