D二聚體檢測膠乳凝集法-檢驗(yàn)科免疫室作業(yè)指導(dǎo)書

D二聚體檢測膠乳凝集法原理用D-二聚體的單克隆抗體致敏膠乳顆粒，當(dāng)血漿中 D-二聚體濃度升高，膠乳顆粒將發(fā)生凝集。2.標(biāo)本米集：2.1標(biāo)本米集前病人準(zhǔn)備：受檢者應(yīng)空腹。2.2標(biāo)本種類：血漿2.3標(biāo)本要求：采集靜脈血2ml，枸櫞酸鈉抗凝（藍(lán)色蓋子的抗凝管）,分離血漿備用。3?標(biāo)本儲存：待測血漿室溫下儲存不超過 4小時，4C不超過8小時，-20C不超過一個月。4.標(biāo)本運(yùn)輸：室溫運(yùn)輸。5?標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)：凝集、溶血、脂血和細(xì)菌污染標(biāo)本不能作測定。6試劑6.1試劑名稱：D二聚體檢測試劑盒6.2試劑生產(chǎn)廠家：美國Fisher科技有限公司包裝規(guī)格：80Test/kit6.4試劑組成：致敏膠乳試劑---LatexReagent陽性對照---PositiveControl陰性對照---NegativeControl樣品稀釋液---SalineSolution645實(shí)驗(yàn)板646攪棒6.5試劑儲存條件及有效期：保存于2~8C,有效期1年。7?操作步驟：7.1定性檢測：7.1.1用前將所有試劑回復(fù)至室溫。7.1.2按下表在實(shí)驗(yàn)板#1,#2,#3區(qū)域滴加試劑。實(shí)驗(yàn)板區(qū)域#1#2#3陰性對照陽性對照標(biāo)本對照50卩l(xiāng)50卩l(xiāng)標(biāo)本50□l膠乳試劑50卩l(xiāng)50卩l(xiāng)50卩l(xiāng)用攪拌棒攪勻，旋轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)板，在2分鐘內(nèi)于直射光源下觀察結(jié)果7.2半定量檢測7.2.1用前將所有試劑恢復(fù)至室溫7.2.2用樣品稀釋液稀釋標(biāo)本：稀釋比例未稀釋1：21：41：8未稀釋標(biāo)本中所含D-二聚體([1g/ml)0.250.51.02.0稀釋后標(biāo)本5011501150115011膠乳試劑50卩l(xiāng)50卩l(xiāng)50卩l(xiāng)50卩l(xiāng)用攪拌棒攪勻，旋轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)板，在2分鐘內(nèi)于直射光源下觀察結(jié)果8?結(jié)果判斷：陰性：呈現(xiàn)圓滑均勻的乳狀懸液。陽性：呈現(xiàn)凝集顆粒。半定量測定：濃度為出現(xiàn)陽性結(jié)果的最高稀釋度X 0.25卩g/ml9?參考范圍：陰性或＜0.25卩g/ml質(zhì)量控制：每次試驗(yàn)均應(yīng)設(shè)陰性和陽性對照，其結(jié)果應(yīng)與預(yù)期相符。臨床意義：11.1高凝狀態(tài)，血栓性疾病和DIC時，血漿D-二聚體明顯升高，是診斷DIC的重要依據(jù)。11.2D-二聚體在繼發(fā)性纖溶癥時升高，而在原發(fā)性纖溶癥時正常，這是鑒別兩者的重要依據(jù)。操作性能：快捷簡便、靈敏度 0.225卩g/ml重復(fù)性好，特異性高。方法局限性：13.1D-二聚體陰性不能完全排除栓塞的存在。13.2正常水平的D-二聚體偶爾會出現(xiàn)非特異性凝集。13.3EDTA抗凝血儲存超過4個小時，將會出現(xiàn)非特異性凝集。注意事項(xiàng)：14.1脂血或者有微生物污染都有可能造成非特異性凝集。14.22分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。14.3試劑和對照中含疊氮鈉，勿觸及皮膚和粘膜。參考文獻(xiàn)：15.1Elms ， M.J ， etal ，(1986)Rapiddetectionofcross-linkedfibrindegradationproductsinplasmausingmonoclonalantibodycoatedlatexparticles.J.Path.85360-36415.2Ballegaeer ， V ，etal.(1987)FibrinolyticresponsetovesousocclusionandfibrinfragmentD-di