各省PCR上崗證考試題庫文檔資料

各省PCR上崗證考試題庫?、選擇題（共20題，每題2分）

1、PCR技術(shù)擴增DNA，需要的條件是(A)①?目的基因②引物③四種脫氧核苷酸④DNA聚合酶等⑤mRNA⑥核糖體A、①②③④B、②③④⑤C、①③④⑤D、①②③⑥

2、鎂離子在DNA或RNA體外擴增反應(yīng)的濃度一般為（D）A、0.3-1mmol/LB、0.5-1mmol/LC、0.3-2mmol/LD、0.5-2mmol/L

3、多重PCR需要的引物對為（D）A、一對引物B、半對引物C、兩對引物D、多對引物

4、PCR是在引物、模板和4種脫氧核糖核苷酸存在的條件下依賴于DNA聚合酶的酶促合成反應(yīng)，其特異性決定因素為（B）A、模板B、引物C、dNTP

5、在PCR反應(yīng)中，下列哪項可以引起?靶序列的擴增的擴增(C)A、TaqDNA聚合酶加量過多B、引物加量過多C、A、B都可D、緩沖液中鎂離?含量過?

6、PCR技術(shù)的發(fā)明?是（A）A、MullisB、史蒂文.沙夫C、蘭德爾.才木

7、PCR產(chǎn)物短期存放可在（A）保存。A、4℃B、常溫C、-80℃D、高溫

8、PCR產(chǎn)物長期儲存最好置于（D）。A、4℃B、常溫C、16℃D、-20℃

9、PCR的基本反應(yīng)過程包括（A）A、變性、退火、延伸B、變性、延伸C、變性、退火

10、在實際工作中，基因擴增實驗室污染類型包括(D)A、擴增產(chǎn)物的污染B、天然基因組DNA的污染C、試劑污染和標(biāo)本間交叉污染D、A、B、C都可能

11、PCR技術(shù)于哪?年發(fā)明（A）A、1983B、1971C、1987D、1993

12、TaqDNA聚合酶酶促反應(yīng)最快最適溫度為（C）A、30-45℃B、50-55℃C、70-75℃D、80-85℃

13、以下哪種物質(zhì)在PCR反應(yīng)中不需要（D）A、TaqDNA聚合酶B、dNTPsC、鎂離子D、RNA酶

14、PCR檢測中，經(jīng)過n個循環(huán)的擴增，拷貝數(shù)將增加（C）A、nB、2nC、2nD、n2

15、PCR基因擴增儀最關(guān)鍵的部分是（A）A、溫度控制系統(tǒng)B、熒光檢測系統(tǒng)C、軟件系統(tǒng)D、熱蓋

16、以下哪項不是臨床PCR實驗室設(shè)計的一般原則（A）A、各區(qū)合并B、注意風(fēng)向C、因地制宜D、方便工作

17、PCR實驗室一般包括(D)A、試劑準(zhǔn)備區(qū)B、標(biāo)本制備區(qū)C、擴增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)D、A、B、C都含

18、PCR技術(shù)不僅為遺傳病的診斷帶來了便利，而且改進(jìn)了檢測細(xì)菌和病毒的方法。若要檢測一個人是否感染了艾滋病病毒，你認(rèn)為可以用PCR擴增血液中的（D）。A、白細(xì)胞DNAB、病毒蛋白質(zhì)C、血漿抗體D、病毒核酸

19、如果反應(yīng)體系中加入模板DNA分子100個，則經(jīng)過30個循環(huán)后，DNA分子的數(shù)量將達(dá)到（D）個。A、100×30B、100×30×2C、100×302D、100×23o

20、PCR擴增產(chǎn)物的分析方法主要有（D）A、凝膠電泳分析法B、點雜交法C、熒光探針定量PCR法D、A、B、C都是

二、判斷題（共20題，每題2分）

1、PCR引物設(shè)計的目的是在擴增特異性和擴增效率間間取得平衡。（√）

2、在PCR反應(yīng)中，dATP在DNA擴增中可以提供能量，同時作為DNA合成的原料。（√）

3、DNA擴增過程未加解旋酶，可以通過先適當(dāng)加溫的?法破壞氫鍵，使模板DNA解旋。（√）

4、PCR反應(yīng)中，復(fù)性過程中引物與DNA模板鏈的結(jié)合是依靠堿基互補配對原則完成。（√）

5、PCR與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制相?所需要酶的最適溫度較?。（√）

6、PCR技術(shù)可用于基因診斷，判斷親緣關(guān)系等。（√）

7、PCR技術(shù)需在體內(nèi)進(jìn)行。（×）

8、PCR反應(yīng)體系中的緩沖液相當(dāng)于細(xì)胞中的體液。（√）

9、核酸的復(fù)制是由5＇——→3＇方向進(jìn)行的。（√）

10、配對的堿基總是A與T和G與C。（√）

11、HBsAg轉(zhuǎn)陰性后一段時間才出現(xiàn)可檢測的HBsAb，此段間隔期稱之為“窗口期”。（√）

12、市面上多數(shù)試劑用淬滅基團(tuán)Q基團(tuán)和報告基團(tuán)R基團(tuán)來標(biāo)記熒光定量PCR（√）

13、PCR反應(yīng)體系中Mg2+的作用是促進(jìn)TaqDNA聚合酶活性。（√）

14、若標(biāo)本中含有蛋?變性劑（如甲醛），PH、離?強度、Mg2+等有較?改變都會影響Taq酶活性。（√）

15、每個子代DNA分子中均保留?條親代DNA鏈和一條新合成的DNA鏈，這種復(fù)制方式稱之為半保留復(fù)制。（√）

16、發(fā)生溶血的標(biāo)本對PCR結(jié)果沒影響。（×）

17、“平臺效應(yīng)”是描述PCR后期循環(huán)產(chǎn)物對數(shù)累積趨于飽和。（√）

18、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（reversetranscription-PCR，RT-PCR）就是在應(yīng)用PCR方法檢測RNA病毒時，以RNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下形成cDNA鏈，然后以cDNA為模板進(jìn)行正常的PCR循環(huán)擴增。（√）

19、在定量PCR中，72℃這一步對熒光探針的結(jié)合有影響，故去除，實際上55℃仍可充分延伸，完成擴增復(fù)制。（√）

20、PCR可應(yīng)用于遺傳病、腫瘤及病原體檢測三大方面（√）

三、簡答(共兩題，每題10分)

1、PCR技術(shù)

答：PCR技術(shù)是??對寡聚核苷酸作為引物（要點1：2分），通過?溫變性、低溫退?、中溫延伸（要點2：5分）這?周期的多次循環(huán)，使特異的DNA?段數(shù)量指數(shù)倍數(shù)增加（要點3：3分）。

2、簡述定量PCR檢測操作的全過程。

答：標(biāo)本的采集，保存（2分）——→樣品前處理（2分）——→待樣品充分裂解后點樣上機反應(yīng)（2分）——→反應(yīng)結(jié)束后觀察結(jié)果（2分）——→發(fā)報告（2分）

PCR上崗證培訓(xùn)——歷年考試知識點匯總在我國新冠病毒疫情防控進(jìn)入常態(tài)化的今天，核酸檢測也越來越普及越來越重要。6月8日，國家衛(wèi)健委發(fā)布了《關(guān)于加快推進(jìn)新冠病毒核酸檢測的實施意見》，文件提出：二級以上醫(yī)院應(yīng)具備開展新冠病毒核酸檢測能力。這就意味著全國大量醫(yī)療機構(gòu)需建設(shè)PCR實驗室。那么建設(shè)PCR實驗室過程中最主要一點就是人員資質(zhì)培訓(xùn)，實驗室成員必須經(jīng)過相關(guān)培訓(xùn)并通過考核?，F(xiàn)將歷年理論考試知識點總結(jié)如下，供大家參考。Q

PCR實驗室建設(shè)、認(rèn)證審核依據(jù)：A《醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)〔2010〕194號）、《醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室工作導(dǎo)則》Q

臨床基因擴增檢驗實驗室技術(shù)審核流程包括：A申報、資料審核、現(xiàn)場驗收、整改、通知審核結(jié)果。Q

臨床基因擴增實驗中質(zhì)量保證：A室內(nèi)質(zhì)控（重復(fù)性）和室間質(zhì)評（準(zhǔn)確度）。Q

PCR技術(shù)的發(fā)明人是：AKaryMullis。Q

核酸包括兩種類型：A脫氧核糖核酸（ATCG）和核糖核酸（AUCG）。Q

根據(jù)遺傳中心法則，遺傳信息的流動方向為ADNA?RNA?蛋白質(zhì)。Q

臨床基因擴增檢驗實驗室一般包括四個分區(qū)：A試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)。Q

核酸樣品含量可根據(jù)（

）處波長的吸光度算出。A260nmQ

核酸樣品純度可根據(jù)（

）處波長的吸光度比值算出。A260/280nmQ

cfDNA是指A細(xì)胞游離DNA，ctDNA是指循環(huán)腫瘤DNA。Q:PCR檢測用的試劑應(yīng)當(dāng)

A:經(jīng)國家藥監(jiān)局批準(zhǔn)。Q:醫(yī)療廢物垃圾袋結(jié)扎采用

A:“鵝口頸”套扎結(jié)扎。Q:銳器盒容積達(dá)到總體積的（

）時需要更換。

A:3/4Q:PCR中，全血樣本采集一般

A:使用EDTA或枸櫞酸鹽抗凝，不使用肝素抗凝。Q:Taqman探針兩端標(biāo)記有

A:熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)。Q:新冠病毒核酸檢測應(yīng)該

A:在Ⅱ級生物安全實驗室開展，同時采用生物安全Ⅲ級實驗室的個人防護(hù)。Q:PCR基本反應(yīng)過程包括

A:變性、退火、延伸。Q:核酸的基本結(jié)構(gòu)單位是：

A:核苷酸，其組成包括堿基、核糖或脫氧核糖和磷酸。Q:DNA雙鏈中

A:堿基A-T之間以兩個氫鍵相連，G-C以三個氫鍵相連。Q:PCR試劑盒中

A:加入尿苷糖基酶（UNG）具有防“污染”作用。

DNA變性是指在物理或化學(xué)因素的作用下，導(dǎo)致兩條DNA鏈之間的氫鍵斷裂，而核酸分子中其他共價鍵不受影響。

自制室內(nèi)質(zhì)控品時，應(yīng)對質(zhì)控品的均勻性和穩(wěn)定性進(jìn)行評價。

PCR的測定點在PCR的指數(shù)擴增期，非平臺期。

臨床檢驗中的隨機誤差通常表現(xiàn)為質(zhì)控物測定結(jié)果的SD增大。

核酸溶于水，不溶于乙醇等有機溶劑。

核酸的解鏈溫度（Tm）與G+C含量有關(guān)，G+C含量愈大，Tm愈高。

以次氯酸為主要成分的清潔劑在配制后24小時內(nèi)使用。

質(zhì)量管理體系要素包括質(zhì)量方針、質(zhì)量目標(biāo)和質(zhì)量指標(biāo)。

核酸的復(fù)制是由5’-3’方向進(jìn)行。

DNA變性的本質(zhì)是雙鏈間氫鍵的斷裂。

Q:核酸提取純化中，RNase潛在污染源是：

A:實驗室環(huán)境、實驗用品如吸頭、離心管等、實驗人員的手。

Q:生物安全水平的級別共分為

A:四個等級。

Q:PCR出現(xiàn)基線漂移的可能原因有：

A:蒸發(fā)、探針?biāo)?、相鄰熒光通道干擾等。

Q:常用RNase抑制劑是

A:DEPC（焦碳酸二乙酯）。

Q:Sanger測序體系與PCR反應(yīng)體系的主要區(qū)別是

A:前者含有：ddNTP

Q:mRNA約占總RNA的

A:5%

Q:核酸檢測對標(biāo)本采集容器的要求是：

A:密閉、一次性、無DNase和RNase、無菌。

Q:肝素是TaqDNA聚合酶活性的

A:強抑制劑。

Q:PCR采用內(nèi)標(biāo)可識別擴增檢測的

A:假陰性、假陽性。

Q:Taqman熒光探針常用的熒光基團(tuán)是：

A:FAM,TET,VIC,HEX。

Q

新檢測系統(tǒng)（

）情況下應(yīng)進(jìn)行性能驗證。A常規(guī)應(yīng)用前、常規(guī)使用期間（定期）、更換試劑、儀器、校準(zhǔn)品溯源性改變、儀器搬遷、設(shè)施、環(huán)境嚴(yán)重失控等Q

PCR室內(nèi)質(zhì)控品的濃度設(shè)置：A弱陽性質(zhì)控（濃度為檢測限2-4倍），陽性質(zhì)控，陰性質(zhì)控品。Q

生物安全柜、超凈工作臺、通風(fēng)櫥三者的區(qū)別：AQ

陽性室內(nèi)質(zhì)控品出現(xiàn)假陰性失控的常見原因分析：A（1）核酸提取中的隨機誤差，如核酸提取中的丟失，有機溶劑的去除不徹底，標(biāo)本中擴增抑制物的殘留，所用耗材如離心管有PCR抑制物等。（2）儀器的問題，如擴增儀孔間溫度的不一致性，孔內(nèi)溫度與所示溫度的不一致性等。

（3）試劑的問