通心絡(luò)超微粉對(duì)肥胖型2型糖尿病大鼠血清svcam-1、nf-的影響

通心絡(luò)超微粉對(duì)肥胖型2型糖尿病大鼠血清svcam-1、nf-的影響

糖尿病血管病變的早期病理特征是內(nèi)部損傷，其中腫瘤壞死因子（tnf）和以其上方為代表的可溶性血管細(xì)胞（svcam-1）的作用更為突出。研究發(fā)現(xiàn)高表達(dá)的內(nèi)皮黏附分子可能在加速糖尿病大血管病變方面起潛在的作用,腫瘤壞死因子(TNF-α)能促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)分泌VCAM-1等黏附分子,介導(dǎo)炎癥細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附,而且這一作用在晚期糖基化終產(chǎn)物(AGEs)的協(xié)同作用下尤為突出。激活的白細(xì)胞將釋放酶類、細(xì)胞毒性物質(zhì)及大量的細(xì)胞因子,并可進(jìn)一步刺激黏附分子的表達(dá),形成惡性循環(huán)。已往的實(shí)驗(yàn)證明通心絡(luò)超微粉具有抑制蛋白質(zhì)非酶糖化的作用。本實(shí)驗(yàn)試圖從內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)黏附分子、白細(xì)胞等與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附及有害炎癥因子的表達(dá)變化的角度,探討中藥通心絡(luò)超微粉對(duì)T2DM大血管病變保護(hù)作用的部分機(jī)制。1材料表面1.1動(dòng)物中心模型SPF級(jí)雄性Wistar大鼠,體重:(240±20)g,由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。許可證號(hào):SCXK津2005-0001。1.2北京可以藥通心絡(luò)超微粉由河北以嶺藥業(yè)集團(tuán)有限公司提供;鹽酸二甲雙胍,250mg/片,北京協(xié)和藥廠,京衛(wèi)藥準(zhǔn)字(1996)第122002號(hào)。鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ),Sigma公司產(chǎn)品;大鼠TNF-α、sVCAM-1定量EIA試劑盒,尚柏生物醫(yī)學(xué)技術(shù)(北京)有限公司。1.3美國(guó)熱電公司的用電設(shè)備Multiskan-mk3酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀,美國(guó)熱電公司;DNP-9272型電熱恒溫培養(yǎng)箱,上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;LD5-2A,北京醫(yī)用離心機(jī)廠制造。2方法2.1脂肪乳的配制豬油占20g,甲基硫氧嘧啶1g,膽固醇8g,谷氨酸鈉1g,蔗糖5g,果糖5g,吐溫-8020mL,丙二醇30mL,加水定容至100mL,配成脂肪乳。2.2血糖及血糖檢測(cè)Wistar大鼠,雄性,體重:(240±20)g,每日灌胃自制的脂肪乳1mL/100g,灌胃3周后,眶靜脈取血,離心血清,放免法檢測(cè)血清胰島素(Ins),全自動(dòng)生化檢測(cè)儀檢測(cè)血脂:總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL),尾靜脈取血,強(qiáng)生血糖儀檢測(cè)血糖。挑選TC、TG、LDL增高,胰島素敏感指數(shù)下降的肥胖大鼠,空腹6h,尾靜脈快速注射STZ30mg/kg,1周后取尾靜脈血用強(qiáng)生血糖儀檢測(cè)血糖高于16.7mmol/L的大鼠作為T2DM模型大鼠,于成模后3周及6周觀察胸主動(dòng)脈弓的病理改變:動(dòng)脈血管電鏡下見內(nèi)皮細(xì)胞局部損傷嚴(yán)重;內(nèi)皮細(xì)胞與內(nèi)彈力板連接處空隙增加等,證實(shí)T2DM大血管損傷模型復(fù)制成功。2.3動(dòng)物分組及給藥T2DM大血管病變大鼠按血糖結(jié)合體重分層隨機(jī)分為5組:模型組、二甲雙胍治療組、通心絡(luò)超微粉高、中、低劑量(1.20、0.60、0.30g/kg)治療組,另取8只大鼠作為正常對(duì)照組。各組動(dòng)物每日灌胃給藥1次,正常對(duì)照組和T2DM組灌胃等劑量自來水,連續(xù)給藥4周。實(shí)驗(yàn)期間除正常對(duì)照組給予普通飼料外,其余各組均給予高脂高熱量飼料。4周后大鼠用30mg/kg戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉,股動(dòng)脈取血,取15μL血清待測(cè)sVCAM-1,100μL血漿待測(cè)TNF-α。2.4統(tǒng)計(jì)方法計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(xˉ±sxˉ±s)表示,組間比較采用單因素方差分析,應(yīng)用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。3大鼠svcam-1、血漿tnf-含量STZ復(fù)合脂肪乳及高脂高熱量飼料誘導(dǎo)的T2DM模型大鼠糖尿血清sVCAM-1、血漿TNF-α含量明顯升高,而通心絡(luò)超微粉大、中劑量及鹽酸二甲雙胍均能顯著降低血清sVCAM-1、血漿TNF-α含量,見表1。4糖基化終末產(chǎn)物tnf-的表達(dá)VCAM-1是血管內(nèi)皮細(xì)胞等細(xì)胞表面的黏附分子,屬于免疫球蛋白超家族,對(duì)細(xì)胞間的相互作用具有重要作用。其膜外段裂解和廓清形成sVCAM-1。研究表明2型糖尿病患者不管有無大血管病變其血清sVCAM-1含量均高于健康對(duì)照者,表明2型糖尿病患者體內(nèi)存在血管內(nèi)皮功能的紊亂和白細(xì)胞的激活。2型糖尿病中有大血管病變患者血清sVCAM-1又高于無大血管病變者,且反映動(dòng)脈粥樣硬化的早期客觀指標(biāo)頸動(dòng)脈IMT與血清sVCAM-1呈正相關(guān),說明可溶性黏附分子參與了2型糖尿病大血管病變的病理過程,并可作為糖尿病大血管病變的血清學(xué)標(biāo)志。2型糖尿病引起血清sVCAM-1升高及其參與大血管病變的機(jī)制:一般認(rèn)為糖尿病患者體內(nèi)氧化應(yīng)激使自由基增加,增加的自由基、血栓素A2及高血糖所引起的糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞導(dǎo)致黏附分子表達(dá)增加,而高表達(dá)的黏附分子促使單核細(xì)胞黏附到血管內(nèi)皮并遷移到內(nèi)皮下間隙,這些單核細(xì)胞再吞噬氧化或糖化的低密度脂蛋白膽固醇形成泡沫細(xì)胞從而導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生與發(fā)展。由此可見,sVCAM-1可作為觀測(cè)DM血管病變的重要指標(biāo),抑制其表達(dá)已成為防治DM血管并發(fā)癥、降低病死率的重要措施。腫瘤壞死因子α(tumornecrosisfactoralpha,TNF-α)是一種具有多效生物學(xué)效應(yīng)的細(xì)胞因子,由巨噬細(xì)胞/單核細(xì)胞活化產(chǎn)生。能抑制機(jī)體抗凝,促進(jìn)血栓形成,引起c-fos,c-jun早期反應(yīng)基因的高表達(dá)。TNF是細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)因素之一。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)其抑制Bc1-2的表達(dá),FasmRNA的表達(dá)明顯增強(qiáng),多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白,如FADD(Fasassociateddeathdomain),capase3,capase8表達(dá)均增強(qiáng)。DM時(shí),TNFmRNA水平隨病程的延長(zhǎng)而升高,來源主要是單核-巨噬細(xì)胞。AGEs刺激其過量表達(dá)。TNF還能提高靶細(xì)胞對(duì)其它細(xì)胞生長(zhǎng)因子的反應(yīng)性;通過激活促凝血酶原,抑制抗凝蛋白C旁路及合成纖溶激活劑抑制物等作用,刺激血小板和內(nèi)皮細(xì)胞釋放血小板源生長(zhǎng)因子樣有絲分裂原,甚至血小板源生長(zhǎng)因子。總之,TNF-α的高表達(dá),引起血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷,在糖尿病血管并發(fā)癥的形成和發(fā)展中起著重要作用。一定濃度的TNF-α在體外能誘導(dǎo)VCAM的高表達(dá),而AGEs(糖基化終末產(chǎn)物)則能同步刺激TNF-α、VCAM兩者的高表達(dá)。由此我們可以推斷,在糖尿病血管并發(fā)癥的形成中,AGEs的產(chǎn)生是一較早期的關(guān)鍵的病變過程,它的形成及其受體后效應(yīng)爆發(fā)了一系列后續(xù)的細(xì)胞因子及血管活性物質(zhì)的異常表達(dá),引起廣泛的病理損害。通心絡(luò)超微粉(通心絡(luò))藥物組成:人參、水蛭、全蝎、土鱉蟲、赤芍、蜈蚣、檀香、降香等,具有益氣活血、化瘀通絡(luò)之功效。前期研究已經(jīng)證實(shí):通心絡(luò)能降低T2DM患者的空腹血糖,提高周圍組織對(duì)胰島素的敏感性,調(diào)節(jié)異常的脂質(zhì)代謝,降低糖化血紅蛋白(HbAlc)含量,抑制冠心病患者sICAM-1的過度表達(dá),減輕動(dòng)脈血管壁炎癥反應(yīng),保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞。其對(duì)糖尿病及其IR并發(fā)的冠心病(CHD)患者具有確切的治療作用。本實(shí)驗(yàn)中通心絡(luò)超微粉能顯著降低糖尿病大鼠血管并發(fā)癥模型血清sVCAM-1、血漿TNF-α含量,其機(jī)理可能