一起引起食物中毒的病原菌的分離與鑒定

一起引起食物中毒的病原菌的分離與鑒定

2010年9月14日下午，中心收到市衛(wèi)生監(jiān)督部門的報(bào)告，市醫(yī)院14名患者出現(xiàn)急性腹痛、腹瀉等中毒癥狀。經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查,臨床分析和實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn),證實(shí)為一起因奇異變形桿菌和倫敦沙門菌混合污染食物而引起的急性食物中毒。1病例對(duì)照時(shí)間及臨床癥狀2010年9月13日本市某醫(yī)院職工從老家某市探親返廈帶回當(dāng)?shù)靥禺a(chǎn)鴨脖子,當(dāng)天12時(shí)左右先后分與舍友及科室同事共食,之后所有進(jìn)食鴨脖子的職工陸續(xù)出現(xiàn)不同程度的急性胃腸炎癥狀。首發(fā)病例時(shí)間為9月13日22:00時(shí)左右,發(fā)病高峰出現(xiàn)在9月13日22:00時(shí)-9月14日7:00時(shí),此時(shí)間段共有10人發(fā)病。截至次日18時(shí)共有14人發(fā)病,潛伏期12h～30h,14名發(fā)病者主要臨床癥狀情況為:腹瀉14例、發(fā)熱13例、腹痛12例、頭暈12例、頭痛9例、惡心8例、嘔吐2例,未出現(xiàn)異常神經(jīng)和精神癥狀。腹瀉物性狀以黃色水樣便為主,腹瀉次數(shù)以3～8次/天為主;腹痛主要為上腹部和臍周的絞痛;發(fā)熱者體溫大都集中在38.0℃～39.2℃。經(jīng)本醫(yī)院即時(shí)補(bǔ)液和抗菌治療后發(fā)病者情況均逐步緩解。2材料和方法2.1樣本來源流調(diào)現(xiàn)場(chǎng)采集2份鴨脖子樣品(其中1份為已開袋剩余樣品,另一份為定型包裝未拆封樣品)。1份患者糞便、6份患者肛拭樣品,共9份樣品。2.2菌株及血清診斷試劑所用培養(yǎng)基、生化試劑、E75/15腸桿菌科細(xì)菌鑒定系統(tǒng)均來自北京陸橋技術(shù)責(zé)任有限公司;致瀉性大腸埃希診斷血清由衛(wèi)生部蘭州生物制品研究所提供;沙門菌屬診斷血清、志賀菌屬診斷血清均由寧波天潤(rùn)生物藥業(yè)有限公司提供。均在有效期內(nèi)使用。2.3桿菌、溶血性弧菌根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查及臨床表現(xiàn),主要檢測(cè)沙門菌、志賀菌、致瀉性大腸埃希、變形桿菌、副溶血性弧菌。檢驗(yàn)方法按GB/T4789食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)、WS/T9-1996變形桿菌食物中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則和《衛(wèi)生防疫細(xì)菌檢驗(yàn)》進(jìn)行檢測(cè),同時(shí)采用美國(guó)BDBBLcrystal微生物鑒定系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)菌鑒定。2.4抗病性的分離和鑒定2.4.1選擇性平板制備將采集的樣品直接劃線接種SS平板、MAC平板、伊紅美蘭瓊脂平板、TCBS平板;同時(shí)分別接種亞硒酸鹽胱胺酸、GN、腸道菌增菌肉湯、3%氯化鈉堿性蛋白胨水,18h～24h増菌培養(yǎng)后劃線接種以上選擇性平板。培養(yǎng)后接種的相關(guān)選擇性培養(yǎng)基上未發(fā)現(xiàn)志賀菌、致瀉性大腸埃希、副溶血性弧菌的可疑菌落,但在SS平板、MAC平板、EMB平板上發(fā)現(xiàn)了菌落形態(tài)一致的疑似變形桿菌和沙門菌菌落。2.4.2菌株生長(zhǎng)特性分析在SS平板上呈產(chǎn)H2S而菌落特征不一的兩種優(yōu)勢(shì)菌落:較大的菌落單個(gè)圓形、較扁平、半透明、中心黑色;較小菌落邊緣整齊、凸起、光滑、濕潤(rùn)、透明、中心黑色,但數(shù)量較少。MAC平板上典型菌落呈圓形、光滑、濕潤(rùn)、無色透明;EMB平板上典型菌落無色透明,呈片狀蔓延生長(zhǎng)。分別挑起SS平板上菌落特征不同可疑菌落接種TSI斜面18h～24h培養(yǎng),底層變黑有氣體,斜面變紅,分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣。經(jīng)革蘭氏染色和鏡檢,菌落呈G-,短小無芽胞桿菌。2.4.3菌株的生化反應(yīng)上述兩種優(yōu)勢(shì)菌株純化后分別接種E75/15腸桿菌科細(xì)菌鑒定系統(tǒng)結(jié)果,較大菌落的菌株生化反應(yīng)見表1;較小菌落的生化反應(yīng)見表2。鑒定編碼:57100;查檢索表得鑒定結(jié)果均為:奇異變形桿菌,概率100.00%。鑒定編碼:76054;查檢索表得鑒定結(jié)果均為:沙門某菌屬,概率96.72%。2.4.4生物活性基因檢測(cè)上述分純的兩種優(yōu)勢(shì)菌株同時(shí)也采用BDBBLcrystal微生物鑒定系統(tǒng),鑒定結(jié)果:奇異變形桿菌,可信度0.9882;沙門某菌屬,可信度0.972。2.4.5凝集反應(yīng)及血清凝集檢測(cè)上述較小的沙門菌疑似菌落純化后分別與沙門菌屬診斷血清凝集反應(yīng),結(jié)果均與A-F“O”多價(jià)凝集;與O10因子血清凝集;與H1,v及H6因子血清凝集;其他血清均不凝集,生理鹽水對(duì)照不凝集,因此確定該菌株為倫敦沙門菌。2.5回復(fù)突變株的分離和鑒定將剩余食物、糞便及肛拭樣樣品分離的奇異變形桿菌待試菌株分別接種其中兩株于血平板的兩端,經(jīng)培養(yǎng)后,其自然蔓延生長(zhǎng)的菌苔在中間接壤處相互融合,即Dienes反應(yīng)陰性。提示剩余食物、糞便及肛拭樣分離的奇異變形桿菌菌株為同一類型。3鴨賦總沙門菌城市鴨籠子、糞便及前糞樣中上海沙門菌檢測(cè)根據(jù)分離培養(yǎng)特性、生化試驗(yàn)和血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果:9份樣本中,從2份剩余食物鴨脖子、1份患者糞便及2份患者肛拭樣中檢出倫敦沙門菌。同時(shí)在2份剩余食物鴨脖子、1份患者糞便及1份患者肛拭樣中也檢出同一類型的奇異變形桿菌。4維地震風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的感染因素是適當(dāng)?shù)姆揽乇敬问澄镏卸窘?jīng)流行病學(xué)調(diào)查,結(jié)合臨床癥狀及實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果,首先確認(rèn)是由倫敦沙門菌污染食物引起的。但由于在2份剩余食物鴨脖子1份患者糞便及1份患者肛拭樣同時(shí)也檢出同一類型奇異變形桿菌,結(jié)果仍不排除與奇異變形桿菌有關(guān),因此判定本次食物中毒為一起由奇異變形桿菌和倫敦沙門菌混合污染特產(chǎn)鴨脖子所致。在多數(shù)國(guó)家,尤其是歐美發(fā)達(dá)國(guó)家中,以沙門菌引起食源性疾病占細(xì)菌性食源性疾病的首位。我國(guó)的情況也不例外,尤其是內(nèi)陸地區(qū),各類細(xì)菌性食物中毒中,仍以沙門菌引起的居多。沙門菌污染的食物,主要為家禽肉及其制品、蛋類、鹵類等。據(jù)世界衛(wèi)生組織全球沙門菌監(jiān)測(cè)網(wǎng)數(shù)據(jù)分析顯示,引起食源性疾病的沙門菌最常見血清型一般以腸炎沙門菌、鼠傷寒沙門菌引起的較為多見。但近年來國(guó)內(nèi)外不少罕見血清型包括(史華氏、圣保羅沙門菌、都柏林沙門菌、雷根特沙門菌、布利丹沙門菌、明斯特沙門菌等)引起的食源性疾病報(bào)道也屢見不鮮,本次食物中毒檢驗(yàn)結(jié)果是由倫敦沙門菌污染食物所致,因此提示沙門菌食物中毒血清型變遷的趨勢(shì)應(yīng)值得注意。變形桿菌雖然屬腸桿菌科常見的條件致病菌,但污染食物或與其他病原菌混合污染食物引起的食物中毒卻時(shí)有報(bào)道,并且研究認(rèn)為其致病機(jī)制也與細(xì)菌產(chǎn)毒素有關(guān)。從糞便中和剩余食物中檢出變形桿菌,往往通過定量檢驗(yàn)而判斷變形桿菌的致病意義。但從攝食到腹瀉發(fā)生后采樣檢驗(yàn)常常超過10h的間隔,剩余食物中細(xì)菌種類和數(shù)量很難保持?jǐn)z食時(shí)的狀態(tài)。因此在本次食物中毒檢驗(yàn)中,選擇變形桿菌的Dienes試驗(yàn)方法,從而確認(rèn)從剩余食物、糞便及患者肛拭樣檢出同一類型奇異變形桿菌。該方法操作簡(jiǎn)便,結(jié)果易于觀察,能有效用于判定食物中毒不同樣本中變形桿菌的同源性。衛(wèi)生監(jiān)督人員從提供特產(chǎn)鴨脖子的該醫(yī)院職工了解到,某市特產(chǎn)鴨脖子屬直接入口食品,出售時(shí)呈開放性,零售后現(xiàn)場(chǎng)真空包裝,從業(yè)人員衛(wèi)生防護(hù)不到位,防蠅防塵設(shè)施不完善,包裝中操作工具不衛(wèi)生放置等可能是造成鴨脖子食物受污染的直接原因。因食品一旦受沙門菌污染,尤其在較高氣溫下使食品中細(xì)菌大量繁殖,直接食入人體后極易發(fā)生食物中毒。但也不排除鴨脖子生產(chǎn)加工環(huán)節(jié)攜帶有沙門菌操作人員的交叉污染。因此建議食品安全監(jiān)管部門應(yīng)按照所頒布的《食品安全法》分?jǐn)喙芾淼囊?guī)定監(jiān)督各個(gè)環(huán)節(jié),包括從食品的原材料的生產(chǎn)、加工、銷售、流通等領(lǐng)域,尤其是加強(qiáng)對(duì)現(xiàn)場(chǎng)出售開放性