幾種常用的明膠膠結(jié)劑

幾種常用的明膠膠結(jié)劑

這種現(xiàn)象與張居正的性質(zhì)有關(guān)。明膠蛋白分子由3條多肽單鏈組成，形成三維螺旋狀的空間結(jié)構(gòu)。明膠加熱溶解時(shí)，上述螺旋狀體系能量增高，分子向卷曲狀結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變，形成具有一定黏度的溶液。因此明膠能否溶解與其螺旋-卷曲轉(zhuǎn)變密切相關(guān)。作者曾探討了環(huán)境和處方因素對軟膠囊崩解遲緩的影響。本研究以甲醛處理明膠膠片模擬不同交聯(lián)程度，考察了明膠平衡溶脹量(Seq)、蛋白質(zhì)溶出量及氨基酸殘基含量之間的相關(guān)性，以及附加劑對明膠中氨基酸殘基含量的影響，對引起軟膠囊崩解遲緩的可能機(jī)理進(jìn)行探討。1藥物、試劑和試藥752型UV光柵分光光度計(jì)(上海分析儀器總廠)；ZRS-SG型智能溶出實(shí)驗(yàn)儀(天津大學(xué)無線電廠)。明膠(青海明膠股份有限公司)；聚乙二醇(PEG400，中國醫(yī)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑公司)；Folin-酚試液(北京欣經(jīng)科生物技術(shù)公司)；5%三硝基苯磺酸(TNBS)溶液、牛血清白蛋白(純度98%)(Sigma公司)；37.32%甲醛溶液(上海化學(xué)試劑研究所)。2方法和結(jié)果2.1膠片的干燥、浸泡取明膠15g在水30ml中溶脹，50℃恒溫減壓脫氣，至溶液澄清透明無氣泡，趁熱制膠片(2cm×1.5cm×1mm)。將所得膠片置25℃、相對濕度(RH)75%的干燥器中平衡72h(膠片含水量約40%)。取出，室溫下干燥至含水量為10%，于RH25%干燥器中室溫保存?zhèn)溆?。取膠片6片，精密稱重，分別置系列濃度的甲醛溶液200ml中浸泡15min，取出擦干，精密稱重。處理后的膠片于RH25%干燥器中室溫保存。2.2膠片擦干試驗(yàn)取未用甲醛處理的膠片及處理膠片各6片，分別標(biāo)號，精密稱重，置20℃水500ml中溶脹，分別于1、2、2.5、3、3.5和4h取出膠片擦干，精密稱重，按文獻(xiàn)計(jì)算Seq，結(jié)果見表1。2.3測定蛋白質(zhì)含量folin-苯酚法2.3.1牛血清folin-酚、標(biāo)準(zhǔn)蛋白、酸度的配制Folin-酚甲液：取碳酸鈉1g溶于0.1mol/L氫氧化鈉溶液50ml中。另取硫酸銅0.5g溶于1%酒石酸鈉溶液100ml中，取1ml與上述溶液混合得到。1d內(nèi)使用有效。Folin-酚乙液：取濃度為2.6mol/L的Folin-酚試劑稀釋至1mol/L，避光保存。標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液：取一定量牛血清白蛋白，用0.1mol/L氫氧化鈉溶液溶解，加水配成250μg/ml的溶液。樣品溶液：精密稱取明膠0.04g，加熱水少量溶解后，用水稀釋至1000ml，得40μg/ml的明膠溶液。2.3.2folin-酚乙液的制備取Folin-酚甲液5ml置試管中，共6份，分別精密加入標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8和1ml，加水定容至6ml，混勻，室溫放置10min。精密加入Folin-酚乙液5ml，立即搖勻，放置30min。同法制備不含標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液的對照管，于500nm處測定吸收度(A500)，以A500對標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液濃度(C)線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程A500=0.0015C+0.0079,r=0.9989。表明蛋白質(zhì)濃度在2.3～23μg/ml內(nèi)與吸收度線性關(guān)系良好。2.3.3n選取標(biāo)準(zhǔn)取樣品溶液1ml按“2.3.2”項(xiàng)下方法操作，測定吸收度，計(jì)算得明膠中蛋白質(zhì)的平均含量為43.56%(n=10)。取明膠膠片，以水900ml為介質(zhì)，在37℃、100r/min下進(jìn)行溶出試驗(yàn)，于30min時(shí)取樣，過濾，取續(xù)濾液5ml照“2.3.2”項(xiàng)下方法操作，以前述所得平均含量換算出對應(yīng)的明膠溶出量，計(jì)算蛋白質(zhì)溶出量(D)，D=處理明膠膠片溶出量/明膠膠片溶出量×100%，結(jié)果見表1。2.4乙醇萃取l將甲醛處理的明膠膠片粉碎，稱取粉末11mg浸入4%碳酸氫鈉溶液-0.5%TNBS溶液(1∶1)2ml中，40℃保溫4h，加入6mol/L鹽酸3ml，于120℃、1.1kPa下加熱1h，加水5ml稀釋，用乙醚萃取3次(10、10、8ml)。分取水相5ml，置水浴(37℃)中加熱15min，冷至室溫，加水15ml后以空白溶液(制備時(shí)須在加入TNBS溶液前加入鹽酸，其余步驟同)為對照，于346nm處測定吸收度(A346)，按ε-氨基酸殘基含量(Y)=m×A346計(jì)算，其中m為公式簡化常數(shù)，在光通路為1cm、樣品重量為11mg時(shí)取值為1.83×10-4。結(jié)果見表1。2.5氨基酸殘基含量由表1可見，隨甲醛濃度的增大，明膠的平衡溶脹量、溶出量和氨基酸殘基含量均明顯下降。分別以Seq、D和Y對甲醛濃度線性回歸，3個(gè)方程的r均大于0.99;D與Seq、D與Y和Y與Seq之間呈線性關(guān)系，且相關(guān)性良好(r>0.96)。2.6明膠的氨基酸殘留基按“2.1”項(xiàng)下制備含不同附加劑的明膠膠片，在40℃、RH75%下放置3個(gè)月，測定其中氨基酸殘基的含量，結(jié)果見表2。表2所列為軟膠囊中常用的增塑劑和抗氧劑及其常用濃度。結(jié)果顯示，加入這些附加劑的明膠膠片放置3個(gè)月后，氨基酸殘基含量有不同程度的下降，按降幅由小到大排列依次為焦亞硫酸鈉、甘氨酸、丙二醇和山梨醇。后二者與空白明膠相比有顯著性差異，且濃度較高時(shí)氨基酸殘基含量更低；焦亞硫酸鈉和甘氨酸濃度較高時(shí)，氨基酸殘基含量與空白明膠較接近。3明膠交聯(lián)反應(yīng)的程度3.1軟膠囊崩解遲緩主要是由囊殼材料——明膠發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)所致。明膠分子中氨基酸(主要是賴氨酸和精氨酸)所含的側(cè)鏈基團(tuán)在發(fā)生氧化或自氧化反應(yīng)時(shí)形成醛基，促發(fā)交聯(lián)反應(yīng)，阻礙水分子進(jìn)入明膠內(nèi)部，使軟膠囊難以溶解，溶出時(shí)間明顯延長。因此明膠的溶出度、平衡溶脹量和內(nèi)容物含醛量可作為明膠交聯(lián)反應(yīng)的指標(biāo)，而定量測定明膠中氨基酸殘基的含量可從分子水平反映明膠交聯(lián)反應(yīng)的程度。由于交聯(lián)反應(yīng)與醛類物質(zhì)有關(guān)，本研究采用甲醛處理模擬明膠交聯(lián)反應(yīng)，檢驗(yàn)3種指標(biāo)在反映交聯(lián)程度中的變化規(guī)律，發(fā)現(xiàn)三者之間呈良好的線性關(guān)系,具有相似的實(shí)驗(yàn)規(guī)律。3.21分子甲醛可與2分子賴氨酸上的ε-氨基酸殘基發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)，因此可在明膠分子內(nèi)部形成巨大的網(wǎng)狀架橋結(jié)構(gòu)，使明膠分子量顯著增加，水溶性大大下降。由表1可見，氨基酸殘基含量低時(shí)，明膠膠片的平衡溶脹量及溶出量也相應(yīng)較低。3.3軟膠囊中加入附加劑一方面可保證囊殼成形和穩(wěn)定，另一方面也能影響明膠的交聯(lián)。丙二醇