慢性溫和應(yīng)激對大鼠抑郁行為的影響

慢性溫和應(yīng)激對大鼠抑郁行為的影響

抑郁是一種以情感為突出的心理疾病。在目前被公認(rèn)的抑郁機(jī)制中，適應(yīng)是除遺傳因素外的抑郁機(jī)制。抑郁患者還存在著異常的氧化機(jī)制，以及含有血漿蛋白（hpa）和血液的兒童血漿濃度。此外,5羥色胺(5-HT)功能低下學(xué)說也是被廣泛接受的假說,作為抑郁癥時(shí)機(jī)體內(nèi)的一個(gè)重要的生化改變,5-羥色胺在中樞和外周呈現(xiàn)含量異常。流行病學(xué)調(diào)查顯示,患者中樞5-HT代謝下調(diào),外周循環(huán)血液中5-HT含量也多表現(xiàn)為下降。研究發(fā)現(xiàn),抑郁癥時(shí)5-HT前體血清色氨酸的變化與腦、血漿5-HT含量下降有關(guān)。因此,本研究利用慢性不可預(yù)計(jì)溫和應(yīng)激(chronicunpredictablemildstress,CUMS)建立大鼠抑郁模型,觀察了以上神經(jīng)遞質(zhì)和內(nèi)分泌的改變,旨在進(jìn)一步明確5-HT、其前體色氨酸和應(yīng)激激素的含量變化在慢性溫和應(yīng)激誘發(fā)抑郁時(shí)的作用。1檢測儀器與檢測1.1動(dòng)物分組與處理選用健康雄性Wistar大鼠24只(本所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供),體重180～220g,分為對照組(12只)、慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激(CUMS)抑郁模型組(12只)。實(shí)驗(yàn)前各組之間體重、曠場實(shí)驗(yàn)評分和糖水偏愛性統(tǒng)計(jì)學(xué)上無顯著性差異。對照組動(dòng)物正常飼養(yǎng),每籠6只;模型組動(dòng)物孤養(yǎng),慢性不可預(yù)計(jì)溫和應(yīng)激程式根據(jù)文獻(xiàn)改進(jìn),刺激方式包括制動(dòng)3h、潮濕籠子17h、傾斜籠子17h、通宵照明、禁食24h、禁水16h加1h空瓶刺激、成組飼養(yǎng)17h,以上刺激隨機(jī)安排于一周內(nèi),每日一種,連續(xù)8周,同種刺激不能連續(xù)出現(xiàn)。動(dòng)物斷頭處死前進(jìn)行體重測定、曠場實(shí)驗(yàn)和糖水偏愛實(shí)驗(yàn)。1.2曠場實(shí)驗(yàn)曠場實(shí)驗(yàn)箱由不透明材料制成,底面為100cm×100cm的正方形,周壁高40cm為灰色,底面分為面積相等的25塊。根據(jù)動(dòng)物穿越底面方塊數(shù)作為水平活動(dòng)得分,以直立次數(shù)為垂直活動(dòng)得分,水平和垂直得分總和為總評分,每次測定時(shí)間為3min。1.3糖水偏愛實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)前48h,訓(xùn)練大鼠適應(yīng)含糖飲水,給動(dòng)物雙瓶飲水,一瓶為1%的蔗糖溶液,另一瓶為普通自來水,雙瓶重量一致。20h的禁水禁食后,同時(shí)給予每只大鼠事先定量好的兩瓶水:一瓶1%蔗糖水,一瓶普通自來水,飲水1h,然后通過稱取飲水瓶的重量計(jì)算消耗量并按下式計(jì)算:動(dòng)物對糖水的偏愛性(%)=糖水?dāng)z入(g)/總攝入(g)。1.4血樣采集動(dòng)物斷頭處死前稱重,取2管血,一管肝素抗凝,一管每毫升血漿加入EDTANa2(0.5mg)和偏重硫酸鈉(1.25mg),3000r/min,4℃離心10min,待測樣品于-70℃保存。1.5血漿皮質(zhì)酮測定采用放射性免疫法測定血漿皮質(zhì)醇的含量,125I-皮質(zhì)醇放射免疫測定盒(北京北方公司)。檢測結(jié)果中皮質(zhì)酮含量由皮質(zhì)醇測定值換算得來,換算公式:皮質(zhì)酮濃度=皮質(zhì)醇濃度×50(注:皮質(zhì)酮是嚙齒類動(dòng)物主要的糖皮質(zhì)激素,大鼠血漿皮質(zhì)酮與皮質(zhì)醇含量比恒定,約為50∶1)。1.6血漿單胺類神經(jīng)遞質(zhì)測定血漿兒茶酚胺和血漿5-HT測定根據(jù)文獻(xiàn)。儀器:日本島津LC-6A高效液相色譜儀,L-ECD-6A電化學(xué)檢測器。色譜分析條件:C18色譜柱(天津三維色譜公司);流動(dòng)相(磷酸鹽緩沖液,pH=3.2);流速0.8ml/min。兒茶酚胺的標(biāo)準(zhǔn)品(NE、E)、5-HT及內(nèi)標(biāo)(DHBA)均為美國Sigma產(chǎn)品。1.6大腦單胺類神經(jīng)遞質(zhì)測定大鼠斷頭處死后,在冰上剝離大腦,稱重后加入540μl0.1mol/LHCLO4,超聲勻漿,加入60μlDHBA(0.5mg/L),15000r/min離心15min,取上清液進(jìn)行分析。色譜條件同上。1.7血清氨基酸的測定用HTTACHIL-8800氨基酸分析儀測定血清色氨酸含量。1.8資料統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(ˉx±s)表示,組間比較采用t檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1水依賴性降低與對照組相比,CUMS誘導(dǎo)8周大鼠糖水偏愛性減低(P<0.05);體重和曠場實(shí)驗(yàn)評分也比對照組明顯下降,統(tǒng)計(jì)學(xué)上呈顯著性差異(P<0.05,表1)。2.2含量測定CUMS誘導(dǎo)8周大鼠腦和血漿5-HT含量減低(P<0.05);而血清色氨酸含量與對照組相比則明顯升高,統(tǒng)計(jì)學(xué)上呈顯著性差異(P<0.05,表2)。2.3和腎上腺素含量CUMS誘導(dǎo)8周大鼠血漿去甲腎上腺素和腎上腺素含量明顯升高(P<0.05);血漿皮質(zhì)酮含量與對照組相比統(tǒng)計(jì)學(xué)上無顯著性差異(P>0.05,表3)。3cums的抑郁模型和相關(guān)研究應(yīng)激是機(jī)體應(yīng)對生存環(huán)境中各種不良因素刺激時(shí)一種重要生物學(xué)反應(yīng),是致抑郁發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素,在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中通過特殊的應(yīng)激模式可誘導(dǎo)出模仿人類的抑郁癥狀,依據(jù)以上理論建立了多種抑郁的應(yīng)激模型,其中國內(nèi)外廣泛接受的一類是慢性應(yīng)激抑郁模型。該模型最早被Katz建立,后來Willner等為了更真實(shí)的模仿人類現(xiàn)實(shí)中遇到的“負(fù)性生活事件”,在其基礎(chǔ)上降低了刺激強(qiáng)度,延長了誘導(dǎo)時(shí)間(約2～3月),改進(jìn)后模型多被稱為慢性不可預(yù)計(jì)溫和應(yīng)激模型(CUMS)。研究認(rèn)為,此模型可很好的模擬人類抑郁癥的核心癥狀一快感缺失。對以上模型的評價(jià)目前較公認(rèn)的是糖水偏愛實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,所采用的慢性應(yīng)激程式誘導(dǎo)8周可導(dǎo)致大鼠糖水偏愛百分比下降,提示大鼠出現(xiàn)快感缺失。同時(shí)模型組大鼠還出現(xiàn)體重下降以及反映大鼠自主活動(dòng)和對新鮮環(huán)境好奇程度的曠場實(shí)驗(yàn)評分減低,以上結(jié)果支持實(shí)驗(yàn)中采用的CUMS程式可很好的誘導(dǎo)出大鼠模擬人類的抑郁癥狀,與國內(nèi)外有關(guān)報(bào)道一致。中樞5-HT是由位于腦干中縫核的5-HT能神經(jīng)元合成的一種重要神經(jīng)遞質(zhì),抑郁癥時(shí)中樞5-HT能神經(jīng)遞質(zhì)的低下,患者腦脊液中5-HT代謝產(chǎn)物5-HIAA下降。外周的循環(huán)血液中的5-HT是由腸嗜鉻細(xì)胞合成分泌,與腸功能與心血管活性調(diào)節(jié)有關(guān)。調(diào)查顯示抑郁患者5-HT在外周循環(huán)血液中的含量也下降。本研究觀察到CUMS抑郁模型中大鼠腦、血漿5-HT含量下降,與上述調(diào)查結(jié)果相一致。5-HT生物合成的前體是色氨酸,人群和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究證實(shí),色氨酸急性耗竭可誘導(dǎo)抑郁癥狀,色氨酸的補(bǔ)充可有助于改善抑郁癥狀。為了證實(shí)本研究CUMS模型中5-HT的含量下降是否與其前體含量呈現(xiàn)一致性,我們檢測了血清色氨酸的水平。從結(jié)果來看,CUMS應(yīng)激8周血清色氨酸含量與對照組相比沒有下降,而是升高。以上提示,CUMS可能通過對色氨酸合成5-HT代謝的影響導(dǎo)致大鼠腦、血漿5-HT含量減低,同時(shí)致使色氨酸在外周循環(huán)血液中堆積。而實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示的CUMS8周大鼠血漿兒茶酚胺含量升高可能是該抑郁模型中5-HT代謝異常的重要因素,其具體機(jī)制有待于進(jìn)一步探討。此外,該研究證實(shí),血清色氨酸的升高可能對抗由應(yīng)激誘導(dǎo)的皮質(zhì)醇升高,本實(shí)驗(yàn)CUMS8周未發(fā)