環(huán)鏈棒束孢菌株xs-1對(duì)小菜蛾的防治效果

環(huán)鏈棒束孢菌株xs-1對(duì)小菜蛾的防治效果

扮演著蝗蟲(chóng)屬于節(jié)肢動(dòng)物科。這是一種危害十字花科蔬菜的害蟲(chóng)，在中國(guó)南部和北部廣泛分布。由于小菜蛾具有世代重疊明顯、抗逆性強(qiáng)、繁殖力高、幼蟲(chóng)反應(yīng)敏捷等特點(diǎn),目前對(duì)小菜蛾的防治仍以化學(xué)防治為主,但生產(chǎn)用藥頻繁已導(dǎo)致該蟲(chóng)對(duì)多種殺蟲(chóng)劑產(chǎn)生了不同程度的抗性,給防治帶來(lái)了很大的困難,同時(shí)也造成了環(huán)境污染,甚至危及人體健康。近年來(lái),世界農(nóng)藥正在向高效、高安全性、良好的環(huán)境相容性等綠色農(nóng)藥方向發(fā)展。微生物農(nóng)藥的研究和開(kāi)發(fā),尤其是在利用菌物來(lái)防治有害生物的研究中,蟲(chóng)生真菌的開(kāi)發(fā)利用具有良好的應(yīng)用前景[4~6]。環(huán)鏈棒束孢(Isariacateniannulata)是一種重要的昆蟲(chóng)病原真菌,具有較大的開(kāi)發(fā)潛力。目前相關(guān)的研究主要集中在以探索其固體培養(yǎng)條件、產(chǎn)孢條件、在某些生態(tài)系下的遺傳多樣性等[7~12]為主的生物學(xué)特性方面以及生物防治方面[13~21]。環(huán)鏈棒束孢對(duì)小菜蛾防治的研究已有文獻(xiàn)報(bào)道,其中大多是用孢子感染的方法進(jìn)行防治,利用環(huán)鏈棒束孢代謝產(chǎn)物進(jìn)行防治的研究較少,僅見(jiàn)姚麗娟的報(bào)道,其采用涂抹法測(cè)試環(huán)鏈棒束孢菌株發(fā)酵液對(duì)小菜蛾的防效,結(jié)果表明,菌株代謝產(chǎn)物含有殺蟲(chóng)活性物質(zhì),對(duì)小菜蛾有觸殺作用。在借鑒前人研究的基礎(chǔ)上,筆者等于2013年8月采用噴霧法和飼喂法考查了一株環(huán)鏈棒束孢菌株不同培養(yǎng)基的發(fā)酵液以及菌絲提取液對(duì)小菜蛾幼蟲(chóng)的致死作用,以期為環(huán)鏈棒束孢在生物防治方面的應(yīng)用提供基礎(chǔ)參考資料。1材料和方法1.1試驗(yàn)材料1.1.1蘑菇1.1.2害蟲(chóng)的來(lái)源1.1.3滅菌水制備PDA液體培養(yǎng)基(馬鈴薯200g,切塊,水煮30min,過(guò)濾,濾液加20g蔗糖,補(bǔ)水至1000mL,121℃滅菌30min);沙氏液體培養(yǎng)基(蛋白胨10g,葡萄糖40g,水1000mL,121℃滅菌30min);CMA液體培養(yǎng)基(玉米粉20g,加水1000mL,攪勻,煮1h,過(guò)濾,濾液補(bǔ)水至1000mL,121℃滅菌30min)。1.2發(fā)酵溶液和真菌物質(zhì)的制備1.2.1搖瓶培養(yǎng)養(yǎng)基將供試菌種活化后,分別接種到裝有3種液體培養(yǎng)基的搖瓶中,置搖床上,于26℃、180r/min條件下培養(yǎng)14d。培養(yǎng)結(jié)束后,按不同培養(yǎng)基分別過(guò)濾培養(yǎng)液,取濾液備用。1.2.2提取乙醇和無(wú)水乙醇收集濾出的菌絲用濾紙吸干水分,平均分為2組,研磨后分別加100mL無(wú)水乙醇和100mL無(wú)菌水提取2h,然后過(guò)濾。水提液直接備用,醇提液則用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮蒸干,將濃縮物加100mL無(wú)菌水溶解后備用。1.3害蟲(chóng)試驗(yàn)和設(shè)計(jì)1.3.1小菜器培養(yǎng)方法試驗(yàn)設(shè)置PDA發(fā)酵液、CMA發(fā)酵液、沙氏發(fā)酵液和空白對(duì)照(CK)4個(gè)處理(表1),每個(gè)處理3次重復(fù)(3瓶)。選取生長(zhǎng)相似的3~4齡小菜蛾幼蟲(chóng)(每瓶15頭)投入廣口玻璃瓶中,以紗布封口。取新鮮甘藍(lán)葉片,用噴霧器分別將PDA發(fā)酵液、CMA發(fā)酵液和沙氏發(fā)酵液噴灑于葉片兩面,然后將葉片置通氣處吹干,再次噴灑,如此重復(fù)處理5次后,將處理的葉片分別投入對(duì)應(yīng)的處理瓶中飼喂小菜蛾幼蟲(chóng);對(duì)照處理直接飼喂未經(jīng)處理的甘藍(lán)葉片。各處理在室溫自然光下培養(yǎng),每隔24h觀察記錄1次試蟲(chóng)死亡情況,直至其全部死亡或化蛹。1.3.2試蟲(chóng)的處理試驗(yàn)設(shè)置分PDA發(fā)酵液、CMA發(fā)酵液、沙氏發(fā)酵液、無(wú)菌水和空白對(duì)照(CK)5個(gè)處理(表1),每個(gè)處理3次重復(fù)(3瓶)。選取生長(zhǎng)相似的3~4齡小菜蛾幼蟲(chóng)(每瓶15頭),用噴霧器分別將PDA發(fā)酵液、CMA發(fā)酵液、沙氏發(fā)酵液和無(wú)菌水噴灑于試蟲(chóng)體表,待試蟲(chóng)體表水分干后再重復(fù)處理1次。將處理好的試蟲(chóng)分別投入廣口玻璃瓶中,以紗布封口,取新鮮甘藍(lán)葉片飼喂,對(duì)照處理的試蟲(chóng)不經(jīng)噴灑處理,直接飼喂。各處理在室溫自然光下培養(yǎng),每隔24h觀察記錄1次試蟲(chóng)死亡情況,直至其全部死亡或化蛹。1.3.3試蟲(chóng)的處理試驗(yàn)設(shè)置醇提液、水提液、無(wú)菌水和空白對(duì)照(CK)4個(gè)處理(表1),每個(gè)處理3次重復(fù)(3瓶)。選取生長(zhǎng)相似的3~4齡小菜蛾幼蟲(chóng)(每瓶10頭),用噴霧器分別將菌絲醇提液、菌絲水提液和無(wú)菌水噴灑于試蟲(chóng)體表,待試蟲(chóng)體表水分干后再重復(fù)處理1次。將處理好的試蟲(chóng)分別投入廣口玻璃瓶中,以紗布封口,取新鮮甘藍(lán)葉片飼喂,對(duì)照組試蟲(chóng)不經(jīng)噴灑處理。各處理在室溫自然光下培養(yǎng)。每隔24h觀察記錄1次試蟲(chóng)死亡情況,直至其全部死亡或化蛹。1.4數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)和處理采用Spss17軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。2結(jié)果與分析2.1發(fā)酵液噴霧法pda復(fù)綠假設(shè)試驗(yàn)研究,主要有2.(1)發(fā)酵液飼喂法。從圖1可見(jiàn),試驗(yàn)第6天各處理的小菜蛾幼蟲(chóng)全部死亡或化蛹,其間,各處理的試蟲(chóng)未表現(xiàn)出明顯的拒食現(xiàn)象。各處理的防治效果以PDA發(fā)酵液的最好,其最終死亡率為60%,校正死亡率為18.14%。方差分析結(jié)果表明,各處理與對(duì)照之間以及各處理之間無(wú)顯著差異(P>0.05)。(2)發(fā)酵液噴霧法。從圖1可見(jiàn),試驗(yàn)第6天各處理試蟲(chóng)全部死亡或化蛹。各處理的防治效果以PDA發(fā)酵液的最好,其最終死亡率為80%,校正死亡率為57.14%。方差分析結(jié)果表明,無(wú)菌水處理與對(duì)照之間的試蟲(chóng)死亡數(shù)無(wú)顯著差異(P>0.05);PDA發(fā)酵液處理與對(duì)照之間在處理第2天的試蟲(chóng)死亡數(shù)無(wú)顯著差異,除此之外二者間的試蟲(chóng)死亡數(shù)差異均達(dá)顯著水平(P<0.05);PDA發(fā)酵液處理與無(wú)菌水處理之間在第1、3、4天的試蟲(chóng)死亡數(shù)差異顯著(P<0.05);PDA發(fā)酵液處理與沙氏發(fā)酵液、CMA發(fā)酵液處理之間的試蟲(chóng)死亡數(shù)無(wú)顯著差異(P>0.05),但沙氏發(fā)酵液和CMA發(fā)酵液這兩種處理之間以及這兩種處理與無(wú)菌水處理和對(duì)照之間并無(wú)顯著差異(P>0.05)。綜合以上分析,可認(rèn)為環(huán)鏈棒束孢菌株P(guān)DA發(fā)酵液對(duì)小菜蛾試蟲(chóng)致死效果較為明顯。2.2醇提液及水提液對(duì)樣品中死亡率的影響從圖2可見(jiàn),菌絲提取物噴霧處理第5天各處理的小菜蛾幼蟲(chóng)全部死亡或化蛹。各處理的防治效果以菌絲醇提液的最好,其最終死亡率為70%,校正死亡率為47.37%。方差分析結(jié)果表明,醇提液處理與水提液處理和無(wú)菌水處理之間的防治效果差異達(dá)顯著水平(P<0.05),而水提液處理和無(wú)菌水處理與對(duì)照之間無(wú)顯著差異(P>0.05);醇提液處理與對(duì)照之間無(wú)顯著差異,但其P=0.053,結(jié)合圖2的曲線看,可以認(rèn)為醇提液處理對(duì)小菜蛾幼蟲(chóng)有一定的防治作用。3環(huán)鏈棒束孢菌株對(duì)小菜k(1)環(huán)鏈棒束孢菌株P(guān)DA發(fā)酵液與菌絲無(wú)水乙醇提取物對(duì)小菜蛾幼蟲(chóng)有一定的防治效果,尤以PDA發(fā)酵液噴霧法的作用效果較明顯。PDA發(fā)酵液處理第2天其試蟲(chóng)死亡數(shù)平均為7.3頭,第3天達(dá)9.3頭,考慮到試蟲(chóng)化蛹的影響,根據(jù)試驗(yàn)中試蟲(chóng)死亡趨勢(shì)判斷,該處理試蟲(chóng)第2天死亡數(shù)應(yīng)可達(dá)半致死量(7.5頭)。何勁等采用孢子感染的方法研究了四株蟲(chóng)生真菌對(duì)小菜蛾的毒力,其中毒力最強(qiáng)的環(huán)鏈棒束孢菌株在其實(shí)驗(yàn)的最高孢子濃度下(1.6×108個(gè)/mL)的半致死時(shí)間最短,為3.33d,且半致死時(shí)間隨孢子濃度下降而增加,在其實(shí)驗(yàn)的最低孢子濃度下(1.6×105個(gè)/mL),半致死時(shí)間需7.84d。故相較于孢子感染法,發(fā)酵液的半致死時(shí)間相對(duì)要短。另外,采用菌株發(fā)酵液進(jìn)行防治與孢子感染法相比,其制備與操作相對(duì)簡(jiǎn)單,起效時(shí)間相對(duì)較短,且使用受環(huán)境的影響相對(duì)較小。(2)試驗(yàn)為接近實(shí)際環(huán)境條件,選擇在室溫自然光條件下進(jìn)行試驗(yàn),但由于試驗(yàn)過(guò)程