革蘭陽性菌分類生物學(xué)特性及鑒定市公開課一等獎(jiǎng)百校聯(lián)賽優(yōu)質(zhì)課金獎(jiǎng)名師賽課獲獎(jiǎng)?wù)n件

革蘭陽性菌分類生物學(xué)特征及判定1/169內(nèi)容革蘭陽性球菌革蘭陽性桿菌API判定系統(tǒng)2/169細(xì)菌分類工具書《伯杰氏細(xì)菌系統(tǒng)分類學(xué)手冊(cè)》（Bergry’sManualofSystematicBacteriology）—細(xì)菌分類標(biāo)準(zhǔn)Springer-Verlag企業(yè)

年春出版《手冊(cè)》，第二版五卷本是最新版本3/169革蘭陽性球菌新分類BXIII門1目2目第5科第III綱葡萄球菌科

乳桿菌科第2科氣球菌科其它目第1科第4科腸球菌科第5科明串珠菌科第6科鏈球菌科4/169葡萄球菌科葡萄球菌屬（Staphylococcus）孿生球菌屬(Gemella)其它屬5/169乳桿菌科片球菌屬（平面球菌）(Pediococcus)其它屬6/169氣球菌科氣球菌屬(Aerococcus)乏養(yǎng)菌屬(Abiotrophia)狡詐球菌屬(Dolosicoccus)其它屬費(fèi)克藍(lán)姆氏菌屬(Facklamia)球鏈菌屬(Globicatella)7/169腸球菌科

腸球菌屬(Enterococcus)漫游球菌屬(Vagococcus)其它屬四聯(lián)球菌屬(Tetragenococcus)8/169明串珠菌科明串珠菌屬(無色藻菌屬)(Leuconostoc)其它屬9/169鏈球菌科鏈球菌屬(Streptococcus)乳球菌屬(Lactococcus)10/169BXIV門I綱II亞目第I科微球菌屬(Micrococcus)口腔球菌屬(Stomatococcus)其它屬微球菌科11/169革蘭陽性球菌生物學(xué)特征12/169G+球菌觸酶+-微球菌屬鏈球菌屬葡萄球菌屬口腔球菌屬腸球菌屬孿生球菌屬片球菌屬明串珠菌屬氣球菌屬其它屬13/169葡萄球菌屬微球菌屬口腔球菌屬常見觸酶陽性菌屬14/169觸酶陽性常見菌屬判別菌屬GLUO/F氧化酶桿菌肽0.04U/片呋喃唑酮100ug/片葡萄球菌屬發(fā)酵-RS微球菌屬氧化+SR口腔球菌屬-SS15/169葡萄球菌微球菌呋喃唑酮桿菌肽呋喃唑酮16/169葡萄球菌屬17/169分類35個(gè)種、17個(gè)亞種分為凝固酶陽性和陰性葡萄球菌18/169主要判定試驗(yàn)

觸酶血漿凝固酶新生霉素敏感試驗(yàn)

DNA酶

19/169觸酶試驗(yàn)（Catalase）：原理：2H2O2

O2+2H2O20/169CatalasePOSStaphylococcusCatalaseNEG21/169注意事項(xiàng)：

1、細(xì)菌、試劑新鮮

2、血瓊脂上菌落不宜作此試驗(yàn)

3、陰、陽性對(duì)照22/169凝固酶試驗(yàn)（Coagulase）玻片法：結(jié)合凝固酶（凝集因子）纖維蛋白原—纖維蛋白試管法：游離凝固酶凝血酶原—凝血酶類物質(zhì)23/169CoagulaseNEGCoagulasePOSStaphylococcusaureus陽性膠胨狀陰性液體狀24/169DNA酶

原理：DNA酶水解DNA長(zhǎng)鏈，形成數(shù)個(gè)單核苷酸組成單核苷酸鏈。長(zhǎng)鏈DNA被酸沉淀、單核苷酸溶于酸而出現(xiàn)透明環(huán)。25/169操作：將待測(cè)菌點(diǎn)種于DNA瓊脂平板上，35℃培養(yǎng)24-48h，在細(xì)菌生長(zhǎng)物上加試劑（菌落浸沒）試劑：1mol/L鹽酸注意事項(xiàng)：培養(yǎng)基表面凝固水烤干防止細(xì)菌蔓延狀生長(zhǎng)26/169葡萄球菌生物學(xué)特征菌落特點(diǎn)：血平板上中等大小，光滑，凸起,邊緣整齊、金黃色、黃色或白色，溶血或不溶血菌落麥康凱上紅色菌落CLED上黃色菌落中國(guó)蘭上不生長(zhǎng)27/169金黃色葡萄球菌菌落特點(diǎn)：光滑、完整微隆起、半透明，β-溶血，奶黃色、橙黃色、檸檬色、白色，（

脂溶性色素）28/169表皮葡萄球菌菌落特點(diǎn)：菌落相對(duì)較小，2.5～6.0mm，取決于不一樣菌株，通常不產(chǎn)生色素，一些菌株產(chǎn)生黏液性常黏附在瓊脂表面29/169腐生葡萄球菌菌落特點(diǎn)：菌落5～8mm大小，完整，有光澤，不透明、光滑，比前面提到菌種菌落較凸起，約二分之一菌株產(chǎn)色素，奶油、黃-橙色。腐生葡萄球菌30/169頭葡萄球菌31/169孔氏葡萄木糖葡萄32/169鏡下特點(diǎn)：G+C、葡萄狀排列葡萄球菌生物學(xué)特征33/169凝固酶陽性葡萄球菌判別試驗(yàn)菌名凝固酶觸酶溶血硝酸鹽海藻糖半乳糖苷酶金黃色葡菌球菌金黃色亞種+++++-金黃色萄淘球菌厭氧亞種+-+---施氏葡萄球菌聚集亞種++++-ND中間葡萄球菌++d+++海豚葡萄球菌++++-ND水獺葡萄球菌++++++豬葡萄球菌d+-++-34/169凝固酶陰性葡萄球菌判別試驗(yàn)菌名色素溶血堿性磷酸酶吡咯烷酮酶脲酶Β葡萄糖苷酶VP新生霉素多粘菌素B表皮葡萄球菌-(d)+-+(d)+SR溶血葡萄球菌d(+)-+-d+SS里昂葡萄球菌d(+)-+d++Sd腐生葡萄球菌d---+d+RS木糖葡萄球菌d-dd-+dRS頭狀葡萄球菌-(d)----dSS孔氏葡萄球菌-(d)----dRS人葡萄球菌d---+-dSS35/169判定流程菌落觀察：金黃色、黃色或白色，溶血或不溶血涂片染色：G+球菌、單個(gè)、成雙，葡萄狀排列觸酶試驗(yàn)

+

+凝固酶試驗(yàn)

-金葡菌中間葡萄豬葡萄施氏葡萄海豚葡萄水獺葡萄

葡萄糖O/F

CNS微球菌屬+-36/169微球菌屬37/169分類微球菌屬共9個(gè)菌種代表菌為藤黃微球菌38/169微球菌屬生物學(xué)特征菌落特點(diǎn)：血平板上小、圓形、凸起、光滑不透明菌落，可產(chǎn)生黃色、粉紅色菌落。鏡下：GC+、多為四聯(lián)、八疊狀排列39/169藤黃微球菌菌落：BA上菌落小于葡萄球菌，呈圓形、突起、光滑、不透明黃色菌落鏡下：G+球菌體比葡萄球菌大，單個(gè)成雙，四聯(lián)八疊排列、包裹狀不規(guī)則固塊生化反應(yīng)：觸酶+氧化酶+

，膽汁七葉苷精氨酸雙水解酶枸櫞酸鹽硝酸鹽均陰性40/169血瓊脂：Micrococcusluteus

41/169營(yíng)養(yǎng)瓊脂：Micrococcusluteus

42/169革蘭染色：Micrococcusluteus

43/169粘液口腔球菌44/169粘液口腔球菌生物學(xué)特征菌落特點(diǎn)：多為粘液狀，無色至白色，牢靠粘附于瓊脂表面鏡下：G+大球菌，成雙或成對(duì)排列生化反應(yīng)：觸酶大多陰性，少數(shù)弱陽性，氧化酶為陰性、可在含5%NaCl營(yíng)養(yǎng)瓊脂上生長(zhǎng)可形成莢膜45/169革蘭染色：stomatococcusmucilaginosus

46/169觸酶陰性革蘭陽性球菌鏈球菌屬腸球菌屬孿生球菌屬片球菌屬明串珠菌屬氣球菌屬47/169鏈球菌屬48/169Lancefield血清學(xué)分群：A、B、C、D、F、G等18個(gè)群溶血：α、β、γ分類49/169生物學(xué)特征菌落特點(diǎn)：昏暗色、扁平、干燥，溶血或不溶血鏡下形態(tài)：G+球菌，單個(gè)、成雙或短鏈排列50/169鏈球菌屬主要判定試驗(yàn)溶血桿菌肽試驗(yàn)

CAMP試驗(yàn)

Optochin試驗(yàn)

PYR試驗(yàn)血清凝集51/169桿菌肽（Bacitracin）試驗(yàn)操作：K-B法貼桿菌肽紙片（直徑6mm，0.04U/片），常規(guī)培養(yǎng)18-24h結(jié)果判讀：抑菌圈>10mm敏感。52/169CAMP試驗(yàn)：原理：細(xì)菌含有“CAMP”因子，能促進(jìn)葡萄球菌β溶血素活性，使兩種細(xì)菌在劃線處展現(xiàn)箭頭形透明溶血區(qū)。53/169操作：血平板上待測(cè)菌與金葡菌垂直劃線，劃線之間留出0.5-1cm,不能相接。無乳鏈球菌金葡菌54/169Optochin敏感試驗(yàn)

原理：Optochin（乙基氫化去甲奎寧商品名）可干擾肺炎鏈球菌葉酸生物合成，抑制該菌生長(zhǎng)故肺炎鏈球菌對(duì)其敏感，而其它鏈球菌對(duì)其耐藥。結(jié)果判定抑菌圈>14mm為肺炎鏈球菌55/169注意事項(xiàng)1、做敏感試驗(yàn)平板不能在CO2環(huán)境下培養(yǎng)，因其可使抑菌圈縮小。2、同一血瓊脂平板可同時(shí)測(cè)定幾株菌株，但不要超出4株菌。3、紙片可保留于冰箱中，普通可保留9個(gè)月。但假如已知敏感肺炎鏈球菌檢測(cè)為耐藥時(shí)，紙片應(yīng)廢棄。56/169PYR試驗(yàn)原理細(xì)菌產(chǎn)生吡咯烷酮酰肽酶（PEP）、水解L-吡咯烷酮β-萘酚酰胺（PYR）基質(zhì)，釋放β-萘酚酰胺與試劑N，N-二甲氨基肉桂醛反應(yīng)，產(chǎn)生桃紅色為陽性。57/169操作：將被檢菌株接種上述試驗(yàn)平板上，35℃過夜培養(yǎng)后，加入一滴PYR試劑于菌落上，1min后觀察結(jié)果。結(jié)果判斷菌落出現(xiàn)桃紅色為陽性，即水解PYR陽性，若菌落呈黃褐色是陰性。58/169PYR商品化產(chǎn)品59/169血清分群診療：A、B、C、D、F、G60/169A群鏈球菌(化膿鏈球菌)61/169主要判定關(guān)鍵點(diǎn)

β溶血

桿菌肽敏感

PYR試驗(yàn)陽性62/169陰性陽性PYR試驗(yàn)β溶血桿菌肽敏感63/169臨床標(biāo)本培養(yǎng)后混雜在口腔正常菌群中化膿鏈64/169B群鏈球菌（無乳鏈球菌）65/169主要判定關(guān)鍵點(diǎn)

β溶血

CAMP試驗(yàn)陽性馬尿酸鈉試驗(yàn)陽性66/169CAMP試驗(yàn)陽性β溶血67/169

C群鏈球菌（似馬鏈球菌獸疫鏈球菌馬鏈球菌等

）68/169馬尿酸鈉陰性6.5%氯化鈉陰性血清學(xué)分型C群桿菌肽耐藥主要判定關(guān)鍵點(diǎn)69/169馬鏈球菌β溶血70/169

D群鏈球菌

（非腸球菌，牛鏈球菌等）71/169主要判定關(guān)鍵點(diǎn)膽汁七葉苷陽性6.5%氯化鈉陰性72/169牛鏈球菌α溶血73/169C、F、G群鏈球菌判定：常需要血清學(xué)方法74/169肺炎鏈球菌75/169生物學(xué)特征菌落特點(diǎn)：血平板上菌落細(xì)小、α溶血、

圓形、表面光滑、灰白色、邊緣整齊，

開始扁平、以后中心塌陷，呈臍窩狀。鏡下形態(tài)：菌體矛頭狀成雙排列生化反應(yīng)：Optochin敏感，膽汁溶菌試驗(yàn)陽性。76/16977/169肺炎鏈球菌78/169臍窩狀菌落79/169粘液狀菌落80/169肺炎鏈球菌81/169Optochin敏感82/16983/169膽汁溶菌試驗(yàn)陽性2號(hào)清亮陽性1號(hào)渾濁陰性84/169肺炎鏈球菌乳膠凝集試驗(yàn)陽性陰性85/169對(duì)照陽性肺炎鏈球菌干點(diǎn)凝集試驗(yàn)streptococcuspneumoniaeoxoiddryspot86/169草綠色鏈球菌87/169菌群試驗(yàn)a甘露醇山梨醇VP精氨酸七葉苷變異鏈球菌群+++-+唾液鏈球菌群--+-+緩癥鏈球菌群-----咽峽炎鏈球菌群-b-b+b-+

草綠色鏈球菌判定88/169鑒

定

流

程觸酶試驗(yàn)-G+球菌α溶血

β溶血

γ溶血

+Optochin試驗(yàn)

-+膽汁溶菌試驗(yàn)

-肺鏈牛鏈球菌及其它+CAMP試驗(yàn)-

桿菌肽敏感PYR試驗(yàn)陽性血清學(xué)分型

其它鏈球菌無乳鏈化膿鏈89/169腸球菌屬90/169分類正式命名菌種有16個(gè)，分屬在5個(gè)群。91/169生物學(xué)特征菌落特點(diǎn)：血平板上呈灰白、隆起、細(xì)小，α溶血或β溶血。鏡下形態(tài)：G+球菌,單個(gè)、成雙、短鏈。92/169生化反應(yīng)膽汁七葉苷試驗(yàn)（+）6.5％NaCl生長(zhǎng)試驗(yàn)（+）PYR試驗(yàn)（+）血清學(xué)分類屬D群93/16994/169糞腸球菌95/169腸球菌屬分群試驗(yàn)Ⅰ群Ⅱ群Ⅲ群Ⅳ群Ⅴ群甘露醇產(chǎn)酸++--+山梨糖產(chǎn)酸+----精氨酸水解-++--96/169腸球菌屬Ⅰ群菌種關(guān)鍵性試驗(yàn)試驗(yàn)鳥腸球菌淺黃腸球菌病臭腸球菌蒼白腸球菌假鳥腸球菌棉子糖腸球菌解糖腸球菌阿拉伯糖+----+-棉子糖-+++-++丙酮酸鹽+++-++-97/169腸球菌屬Ⅱ群菌種關(guān)鍵性試驗(yàn)a試驗(yàn)糞腸球菌屎腸球菌鉛黃腸球菌鶉雞腸球菌蒙氏腸球菌亞碲酸鹽+--c--動(dòng)力--+c+c-EFRORSRRSMGP-b-++-色素--+-+98/169甲基葡萄糖吡喃糖苷(Methyl廿D-GlucopyranosideMGP)產(chǎn)酸試驗(yàn)1、配制含有10g／LMGP和0．006％溴甲酚紫牛心浸液，分裝試管每管2ml，121℃滅菌10min。2、接種細(xì)菌(血平板上取數(shù)個(gè)菌落或過夜肉湯1滴)，孵育35℃1天，必要時(shí)可孵7天3、肉湯由紫變黃色表示陽性。幾個(gè)關(guān)鍵性試驗(yàn)99/169RapidMGPMedium(5h)Enterococcusgallinarum

(ATCC?49573)MGP+Enterococcusfaecalis(ATCC?29212)MGP--

sensitivity100%specificity96.5%100/169依羅霉素(EfrotomycinEFRO)敏感試驗(yàn)1、溶解100mgEFRO于0.1ml二甲亞砜中，再加蒸餾水9.9ml，取10μl至每1片濾紙片，置室溫暗處5～6h。2、大量接種細(xì)菌于胰酶大豆胨平板，放EFRO紙片，孵育35℃18~24h。3、出現(xiàn)任何抑菌環(huán)表示EFRO敏感。101/169腸球菌屬Ⅲ群菌種關(guān)鍵性試驗(yàn)試驗(yàn)豕腸球菌耐久腸球菌小腸腸球菌殊異腸球菌鼠腸球菌丙酮酸鹽---+-阿拉伯糖-----棉子糖--v+-蔗糖--++-MGP---+-EFRONDSSRND102/169腸球菌屬Ⅳ群菌種關(guān)鍵性試驗(yàn)試驗(yàn)驢腸球菌盲腸腸球菌硫磺色腸球菌山梨醇-+-色素--+丙酮酸鹽-+-MGP--+103/169腸球菌屬Ⅴ群菌種與漫游球菌判別菌種阿拉伯糖棉子糖丙酮酸鹽MGP動(dòng)力鴿腸球菌+++--河流漫游球菌---++104/169觸酶陰性其它屬生物學(xué)特征105/169106/169革蘭陽性球菌臨床分布:Mohnarin-占31.3%;Mohnarin占31.68%;Mohnarin占30.59%;107/169葡萄球菌64%腸球菌24%鏈球菌

10%其它2%年G+菌分布108/169年G+菌分布葡萄球菌63.8%腸球菌22.8%鏈球菌10%其它3.4%109/169革蘭陽性桿菌110/169常見菌屬棒桿菌屬(Corynebacterium)李斯特氏菌屬(Listeria)丹毒絲菌屬(Erysipelothrix)分支桿菌屬(Mycobacterium)奴卡氏菌屬(Nocardia)紅球菌屬(Rhodococcus)111/169產(chǎn)單核李斯特菌112/169生物學(xué)特征菌落特點(diǎn)：BA上小、圓形、灰白色，產(chǎn)生狹窄β溶血環(huán)，營(yíng)養(yǎng)瓊脂上圓形、光滑、透明鏡下形態(tài)：G+短小桿菌，多成雙排列生化反應(yīng)：觸酶+4℃生長(zhǎng)CAMP+

113/169L.monocytogenesβ狹窄溶血環(huán)114/169L.Monocytogenes115/169豬紅斑丹毒絲菌116/169生物學(xué)特征菌落特點(diǎn)：BA上形成兩種菌落，光滑型菌落細(xì)小、圓形、凸起有光澤；粗糙型菌落大，表面顆粒狀、邊緣卷發(fā)狀；延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間可見α溶血鏡下形態(tài)：G+短小桿菌，單個(gè)、短鏈，或長(zhǎng)絲狀生化反應(yīng)：觸酶陰性氧化酶陰性液化明膠

H2S+117/169Erysipelothrixrhusiopathiae118/169Erysipelothrixrhusiopathiae(Gram,culture)119/169快速生長(zhǎng)分支桿菌（非結(jié)核分支桿菌）120/169生物學(xué)特征最常見菌種有：偶發(fā)分支桿菌、膿腫分支桿菌、龜分支桿菌菌落特點(diǎn)：快速生長(zhǎng)分枝桿菌區(qū)分于結(jié)核分枝桿菌，它們?cè)谘桨搴望溈祫P平板上3-7天便可生長(zhǎng)，單個(gè)菌落、菌落分為粗糙型和光滑型鏡下形態(tài)：G+桿菌、直或微彎曲生化反應(yīng)：抗酸染色陽性121/169星型奴卡氏菌122/169生物學(xué)特征菌落特點(diǎn)：BA上菌落粗糙、干燥，黃色或深黃色，有時(shí)帶有“泥土”味道鏡下形態(tài)：G+

絲狀生化反應(yīng)：抗酸染色陽性（1%硫酸脫色）123/16937℃5%CO2條件下，星型奴卡菌在沙保弱或普通培養(yǎng)基，2-6天內(nèi)生長(zhǎng)成肉眼可見黃色或橘黃色菌落124/169革蘭陽性菌，含有弱抗酸性（1%硫酸脫色）是它特點(diǎn)125/169126/169馬紅球菌127/169生物學(xué)特征菌落特點(diǎn)：BA上1-2mm菌落，繼續(xù)培養(yǎng)可見大、粘液樣淡橘紅色到粉紅色菌落鏡下形態(tài)：G+桿菌，多型性生化反應(yīng)：觸酶+，氧化酶-，不分解任何糖類，CAMP+128/169馬紅球菌粘液樣菌落129/169CAMP試驗(yàn)：（中間為金葡菌，兩側(cè)為馬紅球菌，羊血平皿。）

130/169Rhodococcusequi(culture,Gram)

131/169需氧革蘭陽性芽孢桿菌132/169炭疽芽孢桿菌蠟樣芽孢桿菌地衣芽孢桿菌133/169炭疽芽孢桿菌134/169是最大革蘭氏陽性桿菌兩端截平在動(dòng)物或人體標(biāo)本中單個(gè)或短鏈狀排列有顯著莢膜培養(yǎng)后呈長(zhǎng)鏈如竹節(jié)狀無鞭毛在有氧和溫度適宜（25℃

～30℃）環(huán)境下易形成橢圓形芽孢位于菌體中央折光性強(qiáng)生物學(xué)特征135/169需氧或兼性厭氧菌生長(zhǎng)要求不高最適溫度為30℃～35℃普通瓊脂培養(yǎng)基上形成灰色扁平干燥粗糙型菌落邊緣呈卷發(fā)狀血平板上不溶血或弱溶血液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)卷繞成團(tuán)呈絮狀沉淀物液體澄清無菌膜136/169炭疽芽孢桿菌鏡下形態(tài)137/169Bacillusanthracis138/169產(chǎn)毒株在含有0.7%碳酸氫鈉營(yíng)養(yǎng)瓊脂上

5%～7%CO2環(huán)境孵育過夜可產(chǎn)生莢膜形成黏液型菌落無毒株為粗造型139/169能分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、蕈糖有些菌株能遲緩發(fā)酵甘油和水楊素產(chǎn)酸不產(chǎn)氣能分解淀粉不發(fā)酵鼠李糖、半乳糖等能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽明膠液化140/169V-P試驗(yàn)不定不產(chǎn)生吲哚和硫化氫不利用枸櫞酸鹽不分解尿素卵磷脂酶陽性觸酶陽性141/169明膠液化硝酸鹽還原枸櫞酸鹽硫化氫尿酶卵磷脂酶吲哚觸酶鞭毛芽孢形態(tài)位置＋＋－－－＋－＋－橢圓中央葡萄糖麥芽糖海藻糖甘油水楊酸鼠李糖淀粉半乳糖＋＋＋＋w＋w－＋－發(fā)酵糖類產(chǎn)酸不產(chǎn)氣w遲緩炭疽芽孢桿菌生化反應(yīng)142/169炭疽桿菌抗原分為兩類細(xì)菌性抗原包含菌體多糖抗原、莢膜多肽抗原和芽胞抗原炭疽毒素外毒素復(fù)合物143/169人主要傳染源為病畜和死畜主要傳輸路徑為攝入污染食物或皮膚接觸引發(fā)肺皮膚腸炭疽病均可并發(fā)敗血癥和炭疽性腦膜炎被列為生物恐怖武器潛在性病原菌臨床意義炭疽芽孢桿菌是人畜共患急性傳染病——炭疽病病原菌144/169皮膚炭疽145/169蠟樣芽孢桿菌146/169革蘭氏陽性大桿菌生長(zhǎng)6小時(shí)后形成圓形芽胞位于菌體中心或次末端不突出菌體菌體兩端不平整多成鏈狀排列引發(fā)食物中毒菌株多為周毛菌有動(dòng)力不形成莢膜生物學(xué)特征147/169需氧或兼性厭氧營(yíng)養(yǎng)要求不高普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂生長(zhǎng)良好最適溫度為35℃菌落較大灰白色不透明常沿劃線蔓延擴(kuò)展成片如同白蠟血瓊脂平板菌落淺灰色毛玻璃樣伴草綠色溶血或呈β-溶血148/169蠟樣芽孢桿菌鏡下形態(tài)149/169β-溶血顯色平板150/169卵黃培養(yǎng)基上培養(yǎng)3h后還未見細(xì)菌集落但能看到卵磷脂分解形成白色渾濁