臨床標本細菌檢驗課件

六原則避免雜菌污染不同期不同標本用抗生素以前采集病變明顯部位運送注意保存標本必須新鮮一、臨床標本的采集和送檢第一節(jié)概述六原則避免雜菌污染不同期不同標本用抗生素以前采集病變明顯部位認真核對：了解診斷：聯(lián)系臨床：（一）臨床標本的采集：腸道、痰、口咽含涑液、血液、腦脊液、骨髓、糞便、尿液、胸腹水等、認真核對：（一）臨床標本的采集：腸道、痰、口咽含涑液、血液、√1.細菌學檢驗單√1.細菌學檢驗單√√2.標本容器：無菌容器3.采集時間、部位：4.無菌操作：對無菌或有菌標本不同處理（二）臨床標本的送檢1.送檢時間、方法：及時送檢、低溫或保溫保存2.常規(guī)性細菌培養(yǎng)標本：應保存4攝氏度3.厭氧菌培養(yǎng)的標本：厭氧保存4.低溫敏感的細菌（奈瑟菌，流感嗜血桿菌）應立即處理5.任何臨床標本。應專人運送、注意防護6.了解標本的來源和臨床信息2.標本容器：無菌容器（三）臨床標本的處理原則：立即接種、適宜培養(yǎng)1.組織：切碎2.體液：離心3.棉拭子：取多個標本4.糞便：先觀察，再取材5.痰：先觀察，再取材6.厭氧培養(yǎng)標本：早接種，厭氧培養(yǎng)7.血液：立即接種（三）臨床標本的處理原則：立即接種、適宜培養(yǎng)二、細菌學檢驗的基本程序（一）培養(yǎng)基的選擇原則（二）細菌檢驗的基本流程（三）診斷試驗的選擇二、細菌學檢驗的基本程序（一）培養(yǎng)基的選擇原則選擇合適的培基養(yǎng)和培養(yǎng)方法選擇合適的培基養(yǎng)和培養(yǎng)方法臨床標本的檢驗程序標本直接檢查分離培養(yǎng)：選擇培養(yǎng)基BA，SS，MAC可疑菌落藥物敏感試驗鑒定生化，血清學鑒定，補充試驗臨床標本的檢驗程序標本直接檢查分離培養(yǎng)：選擇培養(yǎng)基BA，S診斷試驗選擇原則1.選擇最有鑒定價值的試驗2.選擇簡易、快速、方便的試驗3.綜合考慮試驗的敏感性和特異性診斷試驗選擇原則1.選擇最有鑒定價值的試驗三、細菌學鑒定的方法1.細菌的形態(tài)學檢驗2.生物化學試驗3.血清學試驗4.抑菌試驗5.分子生物學檢測6.噬菌體分型試驗7.動物實驗三、細菌學鑒定的方法1.細菌的形態(tài)學檢驗四、細菌學檢驗報告原則1.初步報告2.細菌鑒定3.藥敏試驗四、細菌學檢驗報告原則1.初步報告（一）血液中常見病原體確診菌血癥和敗血癥金黃色葡萄球菌見癤、癰、膿腫引起的敗血癥革蘭陰性菌見尿路、膽道、胃腸道引起的敗血癥草綠色鏈球菌引起亞急性心內(nèi)膜炎銅綠、金葡引起燒傷后敗血癥（一）血液中常見病原體確診菌血癥和敗血癥第二節(jié)臨床常見標本的細菌學檢驗（一）血液中常見病原體（見表18-2）確診菌血癥和敗血癥金黃色葡萄球菌見癤、癰、膿腫引起的敗血癥革蘭陰性菌見尿路、膽道、胃腸道引起的敗血癥草綠色鏈球菌引起亞急性心內(nèi)膜炎銅綠、金葡引起燒傷后敗血癥一、血液及骨髓標本的細菌學檢驗第二節(jié)臨床常見標本的細菌學檢驗（一）血液中常見病原體（見（三）細菌學檢驗1.檢驗程序：（三）細菌學檢驗1.檢驗程序：2.檢驗方法普通培養(yǎng)：分別做厭氧和需氧培養(yǎng)陽性表現(xiàn)：均勻渾濁，革蘭陰性菌渾濁有綠色，肺炎鏈球菌表面有菌膜有綠色熒光，銅綠假單胞菌下面沉淀，鏈球菌溶血，溶血性鏈球菌渾濁有膠胨，葡萄球菌灰白色菌膜，枯草芽孢桿菌涂片革蘭染色鏡檢，直接藥敏、分離培養(yǎng)報告臨床陰性結(jié)果7天報告

2.檢驗方法普通培養(yǎng)：分別做厭氧和需氧培養(yǎng)特殊培養(yǎng)腦膜炎奈瑟菌培養(yǎng)：37℃加5-10%CO2

傷寒或其它沙門菌：接種葡萄糖膽汁肉湯或膽鹽肉湯草綠色鏈球菌：胰酶酪蛋白大豆肉湯，同時做需要、CO2和厭氧培養(yǎng)L型細菌：高滲液體培養(yǎng)基，“油煎蛋”菌落厭氧培養(yǎng)：真菌培養(yǎng)：特殊培養(yǎng)二、腦脊液標本的細菌學檢驗（二）標本采集醫(yī)師以最嚴格的無菌技術(shù)做腰椎穿刺。氣溫較低時，應保溫送檢或床邊接種后，立即孵育（一）腦脊液中常見病原體（表18-3）二、腦脊液標本的細菌學檢驗（二）標本采集（一）腦脊液中常見病（三）細菌學檢驗2.檢驗方法

-腦脊液外觀：結(jié)核性膜炎常為毛玻璃樣。其它細菌引起化膿性腦膜炎，腦脊液都明顯渾濁。

-涂片鏡檢：混濁或膿樣腦脊液可直接涂片,革蘭染色，鏡檢。無色透明的腦脊液,應以3000r/min離心10-15分鐘,取沉淀物涂片,革蘭染色鏡檢，根據(jù)染色反應及形態(tài)特征，可初步提出感染細菌的種類。1.檢驗程序：見表18-3注意增菌培養(yǎng)（三）細菌學檢驗2.檢驗方法1.檢驗程序：見表18-3注意增（3）分離培養(yǎng)用接種環(huán)挑取混濁腦脊液或離心沉淀物，分別接種于BA或CA平皿上，置35℃5%CO2環(huán)境中培養(yǎng)18-24小時，檢視有無細菌生長。根據(jù)菌落特點及染色后鏡檢的特征，初步判斷細菌種類，并進一步做生化鑒定及血清學檢查加以鑒定，并作出報告。（3）分離培養(yǎng)用接種環(huán)挑取混濁腦脊液或離心沉淀物，分別接種于3.結(jié)果報告細菌性腦膜炎的病原學診斷鑒別診斷病毒性腦膜炎3.結(jié)果報告細菌性腦膜炎的病原學診斷（一）尿液標本中常見的細菌革蘭陽性細菌金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、釀膿鏈球菌、腸球菌、厭氧鏈球菌、結(jié)核分支桿菌革蘭陰性細菌

淋病奈瑟菌大腸埃希菌、變形桿菌、傷寒及副傷寒沙門菌、肺炎克雷白菌、產(chǎn)氣腸桿菌、銅綠假單胞菌、不動桿菌、沙雷菌、厭氧菌其它支原體、衣原體、念珠菌三、尿液的標本的細菌學檢驗（一）尿液標本中常見的細菌革蘭陽性細菌三、尿液的標本的細菌（二）標本采集標本采集：一般培養(yǎng)采用清潔中段尿。采樣前，用肥皂水或清水清洗外陰，排出尿液前段需丟棄，中段和后段尿液10-20ml盛裝于無菌的容器。腎盂尿采集法膀胱穿刺尿采集法結(jié)核菌涂片或培養(yǎng)用24小時尿取沉淀。

（二）標本采集標本采集：(三）細菌學檢驗1.檢驗程序：見圖18-4(三）細菌學檢驗1.檢驗程序：見圖18-42.檢驗方法：直接鏡檢

-離心沉淀涂片革蘭染色

-淋球菌鏡檢假絲酵母鏡檢結(jié)核分枝桿菌鏡檢2.檢驗方法：直接鏡檢檢測方法和報告分離培養(yǎng)

-普通培養(yǎng)：

-淋球菌培養(yǎng)：

-厭氧菌培養(yǎng)：

-真菌培養(yǎng)：檢測方法和報告分離培養(yǎng)檢測方法和報告菌落計數(shù)傾注平皿法：尿液稀釋成1：10、1：100、1：1000，取此液1ml放入直徑9cm滅菌平皿內(nèi)，同時加入已熔化并冷至50℃的培養(yǎng)基與尿混合，待凝固后置35℃培養(yǎng)。定量接種環(huán)涂抹法：使用1ul的定量接種環(huán)沾滿尿液，在分離培養(yǎng)基分離培養(yǎng)。生長的菌落數(shù)乘以1000，等于每毫升尿中的菌數(shù)。報告：革蘭陰性菌>105cfu/ml，

革蘭陽性菌>104cfu/ml有臨床意義陰性報告為“48h培養(yǎng)無菌生長”檢測方法和報告菌落計數(shù)四糞便標本的細菌學檢驗（一）糞便中常見病原體正常人的腸道內(nèi)存在大量正常菌群糞便中常見病原體見表18-5四糞便標本的細菌學檢驗（一）糞便中常見病原體（二）標本的采集自然排便法：挑取膿血、黏液的糞便2-3g于無菌的紙盒中，或放置于增菌液中送檢直腸肛拭子法：直接送檢或放入運送培養(yǎng)基中送檢（二）標本的采集自然排便法：挑取膿血、黏液的糞便2-3g于無（三）細菌學檢驗1.檢驗程序（三）細菌學檢驗1.檢驗程序2.檢驗方法針對特殊細菌，如霍亂弧菌、結(jié)核、真菌等

-霍亂弧菌：魚群樣排列的革蘭陰性菌，動力陽性

-葡萄球菌：金葡菌引起的假膜性腸炎

-結(jié)核分枝桿菌：

-艱難梭菌：革蘭陽性粗大桿菌，無莢膜、有芽孢

-空腸彎曲桿菌：細小、弧形、S形或螺旋形革蘭陰性（1）直接鏡檢2.檢驗方法針對特殊細菌，如霍亂弧菌、結(jié)核、真菌等（1）直接

（2）分離培養(yǎng)

-沙門菌及志賀菌：增菌培養(yǎng)或直接接種于SS和MAC、CB，37℃18-24h培養(yǎng)，挑取可疑菌落接種KIA/MIU，進一步做生化和血清凝集試驗

-霍亂弧菌：堿性蛋白胨水37℃增菌6h，挑取菌膜接種TCBS平板，37℃培養(yǎng)16-20h，挑選可疑菌落氧化酶陽性，多價“O”診斷血清凝集試驗

-大腸桿菌培養(yǎng)：挑取膿血、黏液的糞便接種于MAC或EMB，37℃培養(yǎng)18-24h，挑取可疑菌落接種KIA/MIU，進一步做生化和血清凝集試驗

-金黃色葡萄球菌培養(yǎng)：接種于高鹽甘露醇瓊脂，37℃培養(yǎng)18-24小時

-副溶血弧菌培養(yǎng)：增菌后接種與弧菌選擇性培養(yǎng)基與SS培養(yǎng)基。

（2）分離培養(yǎng)-沙門菌及志賀菌：增菌培養(yǎng)或直接接種于S3.結(jié)果報告（1）涂片鏡檢（2）分離培養(yǎng)檢測引起腹瀉、食物中毒的腸道菌致病菌檢測腸道正常菌群，預防菌群失調(diào)（3）陰性結(jié)果：未檢出**菌3.結(jié)果報告（1）涂片鏡檢五、（痰）呼吸道標本（一）痰液中常見病原體（見表18-6）呼吸道標本有正常菌群用于檢測呼吸系統(tǒng)，鼻咽部的感染。與臨床聯(lián)系，找到病原菌五、（痰）呼吸道標本（一）痰液中常見病原體（見表18-6）（二）標本采集：咽拭子采集法：自然咯痰法：小兒取痰法：氣管鏡采集法：胃內(nèi)采痰法：氣管穿刺法：（二）標本采集：（三）細菌學檢驗1.檢驗程序（三）細菌學檢驗1.檢驗程序2.檢驗方法

顯微鏡檢查直接鏡檢：觀察痰液質(zhì)量染色鏡檢：觀察細菌或分枝桿菌2.檢驗方法顯微鏡檢查分離培養(yǎng)培養(yǎng)前處理：均質(zhì)化：凈化：普通培養(yǎng)：接種于BA，10%CO237℃培養(yǎng)18-24小時，挑取可疑菌落涂片、染色，進一步做生化鑒定。結(jié)核桿菌培養(yǎng)：分離培養(yǎng)培養(yǎng)前處理：分離培養(yǎng)厭氧菌培養(yǎng)：接種兩個BA，同時做厭氧與需氧培養(yǎng)真菌培養(yǎng)：接種SA，37℃或22℃培養(yǎng)48小時白喉棒狀桿菌：接種亞碲酸鹽培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)48小時，典型菌落做生化、毒力試驗百日咳鮑特菌：接種BG培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)2-5天，挑取可疑菌落涂片、血清學試驗分離培養(yǎng)厭氧菌培養(yǎng)：接種兩個BA，同時做厭氧與需氧培養(yǎng)六、膿液及創(chuàng)傷分泌物（二）標本采集封閉性膿腫：注射器抽取開放性膿腫：燒傷創(chuàng)面：（一）膿液中常見病原體見表18-7六、膿液及創(chuàng)傷分泌物（二）標本采集（一）膿液中常見病原體見表（三）細菌學檢驗2.檢驗方法（1）涂片鏡檢：革蘭染色鏡檢放線菌挑取硫磺顆粒鏡檢1.檢驗程序（見表18-7）（三）細菌學檢驗2.檢驗方法1.檢驗程序（見表18-7）（2）分離培養(yǎng)-普通細菌培養(yǎng)：分別接種于BA或EMB平皿上，置37℃培養(yǎng)18-24小時，檢視有無細菌生長。根據(jù)菌落特