北方經(jīng)濟(jì)樹種枝藥用菌蜜環(huán)菌菌材培養(yǎng)的初步研究

北方經(jīng)濟(jì)樹種枝藥用菌蜜環(huán)菌菌材培養(yǎng)的初步研究

蜂蜜環(huán)菌是一種重要的經(jīng)濟(jì)因素。它嘗起來很甜，含有大量的絲狀細(xì)菌，用于子實(shí)體、細(xì)菌和蘑菇。它具有很高的藥用價(jià)值。一些中藥產(chǎn)品，如腦心舒、銀蜜片等，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于臨床治療中。蜂蜜環(huán)菌是中醫(yī)學(xué)天麻和豬苓栽培中不可或缺的共生菌。當(dāng)植物的索狀體進(jìn)入天麻或豬苓菌的體內(nèi)，后者被消化，成為其獨(dú)特的營(yíng)養(yǎng)源。換句話說，蜂蜜環(huán)菌會(huì)分解木質(zhì)素，并向天麻或豬苓提供營(yíng)養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)。近年來天麻栽培生產(chǎn)發(fā)展迅速,培養(yǎng)蜜環(huán)菌菌材一般常用的樹種為柞樹。北方經(jīng)濟(jì)樹種豐富,是蘋果、山楂、棗、榛子的主要產(chǎn)區(qū),每年修剪及輪伐的枝丫材數(shù)量驚人,為了更好的利用這些枝丫材,實(shí)現(xiàn)高效益林業(yè)循環(huán)經(jīng)濟(jì),本試驗(yàn)選用這四種經(jīng)濟(jì)樹種的枝丫材為蜜環(huán)菌菌材的培養(yǎng)材料,以常用的柞樹枝條為對(duì)照,探討不同枝丫材對(duì)蜜環(huán)菌菌索生長(zhǎng)的影響,為實(shí)現(xiàn)北方經(jīng)濟(jì)樹種枝丫材循環(huán)利用,擴(kuò)大蜜環(huán)菌菌材種類提供參考。1材料和方法1.1林木生長(zhǎng)分布山楂樹枝蘋和果樹枝采自沈陽山楂國家野外觀測(cè)研究站、棗樹枝采自己遼寧朝陽、榛子樹枝采自北京海淀區(qū)上莊鎮(zhèn)、柞樹枝(CK)采自遼寧撫順。1.2蜂蜜環(huán)菌的菌株吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食藥用菌工程中心提供。1.3蜜環(huán)菌的制備分別取各樹種的枝條(直徑1.0cm左右),截成5cm長(zhǎng),分裝于750ml罐頭瓶?jī)?nèi),加水剛好到瓶口,121℃高壓滅菌2h,冷卻后接入蜜環(huán)菌菌種,25℃避光培養(yǎng),每處理10瓶。1.4環(huán)境細(xì)菌生長(zhǎng)量測(cè)量每隔3d用直尺在瓶壁上劃線,標(biāo)記蜜環(huán)菌菌索生長(zhǎng)最前端,取平均值。1.5酶活力測(cè)定及計(jì)算每隔8d取菌液,10000r/min,4℃離心10min,取上清液置冰箱中為待測(cè)粗酶液。以ABTS為底物3ml反應(yīng)總體積中含有0.15mmol/L底物ABTS、0.09mol/LNaAc-HAc緩沖液、pH4.5的適量酶液,于30℃水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)3min,測(cè)定420nm處的吸光值。酶活力計(jì)算以光密度增加0.01為一個(gè)酶活力單位(u/ml)。每處理取3個(gè)樣本,每樣本重復(fù)測(cè)定3次。2結(jié)果與分析2.1培養(yǎng)基菌索生長(zhǎng)情況從表1可以看出,蜜環(huán)菌在棗樹枝培養(yǎng)基中生長(zhǎng)最慢,發(fā)滿菌時(shí)間最長(zhǎng)達(dá)到58d,菌索稀疏、纖細(xì),且分枝少;而蘋果樹枝和榛子樹枝樹培養(yǎng)基菌索生長(zhǎng)速度最快,菌發(fā)滿瓶時(shí)間最短,分別為35d、34d,菌索濃密、纖細(xì),且分枝多,發(fā)菌時(shí)間及菌索生長(zhǎng)狀態(tài)與柞樹對(duì)照相當(dāng);山楂樹枝、柞樹枝培養(yǎng)基菌索生長(zhǎng)速度中等,但山楂樹枝發(fā)滿菌時(shí)間分別為45d,而柞樹枝培養(yǎng)基發(fā)滿菌的時(shí)間36d,二者差異極顯著,且在菌索表觀上也有較大差異,山楂樹枝培養(yǎng)基上蜜環(huán)菌稀疏、粗壯,且分枝少,而柞樹枝培養(yǎng)基上蜜環(huán)菌菌索濃密、纖細(xì),且分枝多。從蜜環(huán)菌菌索的生長(zhǎng)速度和菌索形態(tài)上看,蘋果樹枝、榛子樹枝可替代柞樹枝作為培養(yǎng)蜜環(huán)菌的菌材。2.2培養(yǎng)基內(nèi)漆酶活力變化蜜環(huán)菌胞外漆酶是蜜環(huán)菌次級(jí)生長(zhǎng)代謝階段產(chǎn)生的主要酶類,不同菌材不同培養(yǎng)時(shí)期蜜環(huán)菌胞外漆酶活力比較如圖1所示。從圖1可以看出,在培養(yǎng)8d時(shí),棗樹枝培養(yǎng)基內(nèi)漆酶活性最低,隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng),胞外漆酶活性逐漸升高,培養(yǎng)32d時(shí)棗樹枝培養(yǎng)基內(nèi)漆酶活性最高,達(dá)到209u/ml;山楂樹枝及蘋果樹枝培養(yǎng)蜜環(huán)菌16d時(shí)漆酶活力下降,在培養(yǎng)24d時(shí)漆酶活力提高,而且蘋果樹枝培養(yǎng)基提高更快,此時(shí)已高于對(duì)照的柞樹枝培養(yǎng)基,在培養(yǎng)32d時(shí),二者漆酶活力與對(duì)照基本相當(dāng);而榛子樹枝培養(yǎng)基的蜜環(huán)菌漆酶活力在培養(yǎng)16d時(shí)活力升高,但略低于對(duì)照,隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)漆酶活力提高不顯著,在培養(yǎng)24d和32d時(shí)測(cè)得的漆酶活力與柞樹枝的對(duì)照基本一致。從試驗(yàn)結(jié)果可看出,榛子樹枝與柞樹枝可能在硬度、養(yǎng)分組份含量上最為相似,其次為蘋果樹枝,這與蜜環(huán)菌菌索在不同菌材上的生長(zhǎng)表現(xiàn)相一致。3結(jié)論和討論3.1利用兩種經(jīng)濟(jì)樹種培養(yǎng)從蜜環(huán)菌菌索長(zhǎng)勢(shì)、性狀表現(xiàn)上看,蘋果樹、榛子樹與傳統(tǒng)培養(yǎng)蜜環(huán)菌的柞樹相近,蜜環(huán)菌菌索生長(zhǎng)速度快、分枝多、生長(zhǎng)濃密,可以利用這兩種經(jīng)濟(jì)樹種修剪下的枝丫作為培養(yǎng)蜜環(huán)菌菌材。蜜環(huán)菌生長(zhǎng)良好,在伴栽天麻時(shí)可以節(jié)省菌種、提高產(chǎn)量,因而蘋果樹、榛子樹修剪的枝丫替代柞樹有望擴(kuò)大天麻栽培材料來源,同時(shí)也可實(shí)現(xiàn)經(jīng)濟(jì)樹種修剪枝條的循環(huán)利用。3.2增長(zhǎng)兩組經(jīng)濟(jì)樹種的外漆酶活性蜜環(huán)菌是一種木腐菌,有較強(qiáng)的木質(zhì)素分解能力,與其代謝過程中合成的木質(zhì)素分解酶(如漆酶)有關(guān)。在蜜環(huán)菌發(fā)菌過程中,當(dāng)菌絲體處于快速生長(zhǎng)末期,培養(yǎng)基中可利用碳源含量較低時(shí)才有漆酶產(chǎn)生,用來分解木質(zhì)素進(jìn)行碳代謝。本試驗(yàn)中培養(yǎng)24d后,蘋果樹、榛子樹枝培養(yǎng)基中蜜環(huán)菌胞外漆酶的變化與對(duì)照的柞樹枝培養(yǎng)基相相類似,表明這兩種經(jīng)濟(jì)樹種枝條養(yǎng)分組份含量可能與柞樹相近。試驗(yàn)中沒有添加任何其他營(yíng)養(yǎng)成分,蜜環(huán)菌一