老年多器官衰竭幻燈(第五稿)08-課件

老年多器官衰竭及“肺啟動”機制

老年多器官衰竭及“肺啟動”機制有關英文縮略詞全稱

簡稱英文全稱中文全稱MOFMultipleOrganFailure多器官衰竭MOFEMultipleOrganFailure老年多器官衰竭intheElderlyPICProinflammatoryCytokines促炎癥細胞因子SARSSevereAcuteRespiratory嚴重急性呼吸Sydrome綜合征有關英文縮略詞全稱簡稱英文全稱第一部分

人體主要器官老化的大體

及組織學改變

第一部分

人體主要器官老化的大體

及組織學改變心臟改變心臟增大：80歲時左心室比30歲時增厚約30%，脂褐素沉積，心肌橫紋消失，纖維化乃至淀粉樣變心臟對應激反應性降低。80歲心輸出量較30歲減少40%老年人興奮性、自律性、傳導性和收縮性均降低心瓣膜有退行性變以及鈣化，可波及室間隔影響傳導束心臟起博和傳導系統(tǒng)退行性變，竇房結P細胞減少，纖維化；房室結、房室束和束支都有不同程度結締組織增生和纖維化，易致房室傳導阻滯心臟改變心臟增大：80歲時左心室比30歲時增厚約30%老化的心肌細胞核內染色質可聚集成塊、縮小、破碎，核內包涵體增多線粒體數量減少，并出現(xiàn)膨脹。高爾基復合體破碎，并可見溶酶體膜的破壞等膠原結構發(fā)生明顯改變，膠原的交聯(lián)增高，并發(fā)生硬化。I型膠原和纖維粘連蛋白濃度隨衰老而增加。常見小的鈣化灶心臟改變老化的心肌細胞核內染色質可聚集成塊、縮小、破碎，核內包涵體增結構改變：肺泡數減少而肺泡和呼吸性細支氣管擴大。肺泡壁變薄，肺組織重量減輕。呈藍黑色肺泡毛細血管床減少、硬化，血流量減少，肺內膠原纖維交聯(lián)增多，彈性降低70~80歲時肺活量僅為17歲時的25%老年肺容量和PaO2隨增齡下降，80歲較20歲時PaO2降低10~15%，SaO2減少5%肺臟改變結構改變：肺泡數減少而肺泡和呼吸性細支氣管擴大。肺肺臟改變老年多器官衰竭幻燈(第五稿)08_課件老年多器官衰竭幻燈(第五稿)08_課件胃腸道老化改變胃粘膜萎縮，數量減少。老年人小腸絨毛增寬而短，結腸粘膜萎縮，結締組織增多，肌層增厚，易產生憩室胰腺管增生，胰腺細胞退行性變，脂褐素及淀粉樣物質沉積胃腸道老化改變胃粘膜萎縮，數量減少。老年人小腸絨毛增寬而短，肝臟改變重量由正常成人平均1550g左右降至老年人的1340g左右，占體重比例由2.5%降為1.6%細胞數量減少，胞核與核質比例隨增齡而增大，出現(xiàn)巨大、深染、不規(guī)則的異型核。巨大核中有多個核仁，核內有包涵體。糖原含量少，脂肪及脂核素增加。藥物代謝酶和呼吸酶減少，水解酶增加。線粒體數隨增齡而減少和變大。內質網膨脹、空泡化，多見囊狀內質網肝臟改變重量由正常成人平均1550g左右降至老年人的1內分泌系統(tǒng)老化改變垂體：減輕，血管減少，結締組織增多，鏡下見有纖維化和細胞浸潤。血漿中垂體激素均無改變腎上腺：皮質內結節(jié)形成，結締組織與色素增多，脂質減少，血管擴張或出血性腺：男、女均隨增齡而萎縮甲狀腺：功能隨增齡而有所降低胰：增齡對空腹血糖影響不大，但糖耐量逐漸降低，胰島細胞對血糖的反應減低內分泌系統(tǒng)老化改變垂體：減輕，血管減少，結締組織增多，鏡下見

第二部分

七五、八五期間MOFE臨床與

基礎研究回顧

第二部分

七五、八五期間MOFE臨床與

基礎研究回顧前言我們在七五期間流行病學調查基礎上觀察到一個現(xiàn)象：老年人在肺臟發(fā)生病變后極易影響其它重要器官的功能，甚至造成多臟器功能衰竭。這種現(xiàn)象給了我們一個啟示：肺臟可能在MOFE的發(fā)生中起著很重要的始動作用。在此思想指導下，隨后的時間里我們做了大量的臨床和實驗研究印證了這個設想。前言我們在七五期間流行病學調查基礎MOF和MOFE的簡要概念多器官衰竭

（MOF）：由創(chuàng)傷、大手術、敗血癥等誘因誘發(fā)，在短時間內出現(xiàn)2個或2個以上器官序貫或同時衰竭的臨床綜合征，多見于中青年人老年多器官衰竭（MOFE）：指老年人在器官老化、功能低下和患有多種慢性疾患的基礎上，由肺部感染等誘因誘發(fā)，在短時間內出現(xiàn)2個或2個以上器官序貫或同時衰竭的臨床綜合征

MOF和MOFE的簡要概念多器官衰竭（MOF）：由創(chuàng)傷、大

表1MOFE與MOF的區(qū)別

MOFEMOF年齡≥65歲多為中青年誘因肺部感染等創(chuàng)傷、大手術等生理功能器官老化、功能下降正?；A疾病常有2–3種，最多13種較少免疫功能低下正常病程遷延較長可反復發(fā)作急、短,多迅速愈或亡器官衰竭順序心、肺、腎、腦肺、肝、腦、心病死率

總病死率高較低>4器官衰竭器官衰竭數目分型分期部分可救治存活教多三型三期國外報道死亡率近100%較少兩型四期或三級表1MOMOFE流行病學特點調查之一9089名≥60歲老年人MOFE調查調查項目調查結果MOFE患病率7.27MOFE發(fā)病率6.38MOFE病死率62.12MOFE死亡率4.40

MOFE流行病學特點調查之一9MOFE流行病學特點調查之二MOFE呼吸系統(tǒng)為發(fā)病誘因的臨床調查病例數呼吸為誘因者百分率1987-19891002例74674.51997-19991605例117373.12000-2003705例51673.1MOFE流行病學特點調查之二MOMOFE流行病學特點調查之三

1605例MOFE患者主要基礎疾病基礎疾病例次百分率（%）

慢性阻塞性肺疾患126879.0冠心病高血壓病89946556.029.0糖尿病32220.1慢性肝炎和肝硬化32120.0腫瘤30519.0腦血管疾病25716.0MOFE流行病學特點調查之三

MOFE流行病學特點調查之四

1605例MOFE發(fā)病誘因統(tǒng)計

誘發(fā)因素

例次百分率（%）感染133583.2

肺部感染1173

73.1

其他部位感染16210.1心血管急癥如AMI等905.6腦血管意外462.9其他如晚期肝硬化等134

8.3

MOFE流行病學特點調查之四

MOFE流行病學特點調查之五1605例MOFE首發(fā)衰竭器官的頻率和OR值首衰器官首衰次數構成比（%）OR值肺72745.32.43心40125.01.23肝臟885.51.20腎臟1408.70.89腦1569.70.80血液140.90.71胃腸714.40.62MOFE流行病學特點調查之五首衰器官首衰MOFE病例的病理學研究我們對120例因MOFE死亡患者的心、肺、肝、腎、腦等到重要器官的病理改變進行電鏡觀察，發(fā)現(xiàn)MOFE有其獨特的病理改變：

1肺臟：MOFE發(fā)生時，I型肺泡上皮細胞最早出現(xiàn)病理損傷，鏡下可見II型上皮細胞的增生。呼衰時肺泡壁水腫、肺泡腔積液，含有肺泡表面活性物質的下層加厚抬高，肺泡內稠厚的蛋白液體與壞死細胞碎片、纖維素凝聚成膜狀結構，襯覆于肺泡表面形成透明膜。MOFE病例的病理學研究我們對120例因2心臟：表現(xiàn)為心肌肌節(jié)紊亂、Z線變形邊界消失，線粒體消失、空泡化，閏盤皺折，肌原纖維破壞。3腎臟：腎單位代償肥大。腎小球臟層上皮細胞足突融合消失。腎小管上皮壞死。紅細胞、白細胞、纖維蛋白滲出到腎小球囊腔，造成鏡下看到的球、囊擴張，蛋白蓄積。原尿中蛋白在腎小管中濃縮、酸化，凝固在遠曲小管、集合管，在集合管內形成管型。MOFE病例的病理學研究2心臟：表現(xiàn)為心肌肌節(jié)紊亂、Z線變形邊界消失，線粒體消失、4肝臟：在MOFE早期肝細胞即有大量線粒體、高爾基體的損害，表現(xiàn)為肝細胞的細胞器空泡變性。由于肝臟是機體最大的器官，有豐富的儲備功能，在臨床上肝衰癥狀出現(xiàn)較晚。5胃腸：MOFE時腸壁水腫，胃粘膜多發(fā)淺表潰瘍、糜爛出血，小腸淺表粘膜彌散性斑塊狀壞死，超微結構見腸絨毛消失，線粒體空泡化。MOFE病例的病理學研究4肝臟：在MOFE早期肝細胞即有大量線粒體、高爾基體的損害，成年和老年大鼠形成多器官衰竭

重要器官嚴重程度病理（積分）變化時間（小時）248成年大鼠組（總積分）050390心01090腎010120肺0060肝02090腸道01030老齡大鼠組（總積分）07201190心0220300腎0220230肺0140360肝070200腸道070100成年和老年大鼠形成多器官衰竭

重要器官嚴重程度病理（積分）變建立了各種衰老模型

自然衰老 臭氧損傷致衰老 γ射線輻射法 D-半乳糖致衰老 細胞傳代法 建立了各種衰老模型

自然衰老 MOFE的主要動物模型

酵母多糖模型 內毒素或脂多糖模型 急性肺損傷模型 低血流灌注模型 二次打擊模型（多種）

MOFE的主要動物模型 酵母多糖模型MOFE的生化及敏感預警指標總酮體血清纖維結合素乙酰乙酸T細胞功能：

-羥丁酸分裂原反應性酮體比率細胞免疫功能：肝線粒體氧化還原電位ATPase心肌抑制因子ALPase血氨基酸總量ACPase支鏈氨基酸血清過敏毒素C5a芳香族氨基酸血中TNF、IL-1、IL-6血內中分子量物質MOFE的生化及敏感預警指標總酮體MOFE實驗研究結果1.老年人隨年齡增長糖皮質激素受體逐漸減少，至60歲明顯著降低，并伴效應指標改變，表明糖皮質激素受體改變具有生理學意義，呼衰患者外周血糖皮質激素受體數目明顯低于正常人2.證實外周血細胞存在性激素受體，并建立了測定方法3.MOFE患者血漿中TNF、IL-1、IL-6水平均明顯高于正常人，而MOFE死亡組病人的三種細胞因子水平高于存活組，隨病情加重，以上三種因子水平增高。臨終時血漿IL-1、TNF突然降至極低，而IL-6繼續(xù)升高。病情好轉時三種因子水平逐漸下降[七五、八五期間完成]MOFE實驗研究結果1.老年人隨年齡增長糖皮質激素受體逐漸減進行了老年多器官衰竭抗感染治療單克隆抗體的制備和應用研究：1.制備出廣譜交叉反應性單克隆抗體，包括抗E.

ColiJ5.LPS單克隆抗體22株和抗S.MinnesotaR595單克隆抗體8株2.用上述單抗株對常見G–菌進行體外血清學交叉反應實驗，證明了有交叉反應存在3.動物MOFE模型表明，E.

ColiJ5.LPS和S.MinnesotaR595單抗中均有較好保護效果的克隆株存在。MOFE實驗研究結果[七五、八五期間完成]進行了老年多器官衰竭抗感染治療單克隆抗體的制備和應用研究：MOFE的臨床分型MOFE的分型是我們首次提出的，是對MOFE認識的深化，通過對臨床病例的觀察分析，按照病程的發(fā)生發(fā)展和轉歸情況我們將MOFE的臨床經過分為三型。MOFE的臨床分型MOFE的分型是我們首次提出的Ⅰ型單相速發(fā)型（Single-phase，RapidPattern）Ⅱ型雙相速發(fā)型（Two-phase，RapidPattern）Ⅲ型多相反復型（Multiple-phase，RecurentPattern）老年多器官衰竭分型相對穩(wěn)定期死亡痊愈肺部感染等肺、心等衰竭肺、心等衰竭肺部感染等周而復始死亡痊愈

死亡痊愈肺部感染等肺、心、肝等衰竭肺、心等衰竭肺、心等衰竭相對穩(wěn)定期Ⅰ型單相速發(fā)型（Single-phase，RapidMOFE分型的意義

MOFE第III型的提出對預見MOFE再發(fā)生和及時救治有指導意義。老年人初患心肺二器官衰竭多數可救治存活，但并不是MOFE的完結，仍有再次發(fā)生的可能，而且危險性增大。故對此類患者應提高警惕，嚴密隨訪，一旦誘因發(fā)生即采取積極措施防止反復。掌握了分型的特點，對指導臨床救治成功有重要意義。我們曾成功地搶救了多例反復多衰的MOFE患者，其中最多九次。MOFE分型的意義MOFE第III型的提出對預見MOF老年多器官衰竭的分期此外，我們對MOFE首次進行了分期：

Ⅰ期MOFE衰竭前期Ⅱ期MOFE衰竭代償期Ⅲ期MOFE衰竭失代償期老年多器官衰竭的分期此外，我們對MOF

MOFE分期之一Ⅰ期MOFE衰竭前期：有關器官在老化和慢性疾病基礎上已有功能和結構改變，一些反映器官功能的敏感指標已介于正常和異常之間。MOFE分期Ⅱ期MOFE衰竭代償期：有關器官已不能維持其正常功能，但病程進展尚不嚴重，有相當的代償能力，對治療反應較好，應不失時機的進行器官功能支持治療

MOFE分期之二Ⅱ期MOFE衰竭代償期：有關器官已不能維Ⅲ期MOFE衰竭失代償期：有關器官的功能已明顯衰竭，對一般藥物和治療措施反應差，但如果能及時采取強有力的治療措施如使用呼吸機、血液凈化療法、代謝支持治療等，仍可能救治恢復，如治療不及時或措施不當，則器官衰竭進入不可逆階段，患者將死亡MOFE分期之三Ⅲ期MOFE衰竭失代償期：有關器官的功能救治MOFE時的十大矛盾1MOFE應用抗生素抗感染與抗生素致肝腎功能不全之間的矛盾2MOFE需營養(yǎng)代謝支持與胃腸功能紊亂之間的矛盾3MOFE呼吸衰竭機械通氣與心功能下降和器官低灌注之間的矛盾4MOFE用糖皮質激素治療與誘發(fā)胃腸道出血之間的矛盾5MOFE致凝血機能障礙與血液凈化療法時使用肝素之間的矛盾6MOFE時抗生素抗感染與腸道菌群失調之間的矛盾7MOFE使用糖皮質激素與感染擴散之間的矛盾8MOFE糾正低血容量與加重心力衰竭之間的矛盾9MOFE合并嚴重心律失常時應用抗心律失常藥物與致心律失常之間的矛盾10MOFE合并出血性疾病時采用止血療法與誘發(fā)心腦血管閉塞性疾病之間的矛盾救治MOFE時的十大矛盾1MOFE應用抗生素抗感染與抗生救治MOFE的成功率逐年提高90

94

9594.894.3自開診以來共收治各類老年心血管病及危急重癥患者2600例，總體搶救成功率94%左右。搶救4個以上超多器官衰竭患者的成功率約為60%，文獻報道國外搶救4個以上器官衰竭的老年患者成功率幾乎為0。救治MOFE的成功率逐年提高90949594.8小結七五、八五期間的臨床研究發(fā)現(xiàn)肺在諸器官衰竭中是最易受損及最早發(fā)病的器官（肺部感染是MOFE最常見的誘因，占73.1%，肺是首衰器官中最多見的器官，占45.3%）。動物模型中，也初步得出肺是最易受損、最早發(fā)病的器官之一。在臨床上對老年人上呼吸道感染或肺炎的積極控制是阻斷發(fā)展成MOFE的重要途徑。這時，我們已經形成肺在MOFE中起關鍵作用的初步概念，直至九五、十五期間動物實驗和臨床調研的進一步開展。逐漸形成了MOFE的“肺啟動”機制的明確概念小結七五、八五第三部分

九五、十五逐漸深化的研究第三部分

九五、十五逐漸深化的研究各種衰老模型

分類 優(yōu)點 缺點自然衰老 易飼養(yǎng)、符合自然規(guī)律周期太長、成本高臭氧損傷致衰老 簡便容易周期短 大動物難，不是自然衰老γ射線輻射法 同上 同上D-半乳糖致衰老 簡便、可靠、成本低同上快速老化動物 部分系統(tǒng)近似自然 不易得,自然性待評價細胞衰老模型D-半乳糖致衰老方便易得，穩(wěn)定 不是自然老化細胞傳代法 自然老化 方法難各種衰老模型

分類正常成年大鼠（3月）人工老化大鼠（3月）自然老化大鼠（20月）大鼠老化模型正常成年大鼠（3月）人工老化大鼠（3月）自然老化大鼠（20月正常成年(A，2-4月)和D-半乳糖處理小鼠(B)AB自然老化小鼠（18月）小鼠老化模型正常成年(A，2-4月)和D-半乳糖處理小鼠(B)AB自然老多種MOFE動物模型中各臟器衰竭順序

模型種類方法臟器發(fā)生順序酵母多糖0.5mg/kg腹腔注射肺 內毒素或脂多糖腹腔注射內毒素5mg/kg肺、心、肝、胃腸 油酸急性肺損傷油酸0.06ml/kg肺、心、肝、胃腸 低血流灌注放血使血壓降至<40mmHg肺-肝-腎-胃腸 二次打擊（多種）放血使血壓降至<50mmHg，比較復雜，主要是肺腹腔注射內毒素5mg/kg

由上可見不同動物模型造成MOFE的結果提出肺首先衰竭多種MOFE動物模型中各臟器衰竭順序模型種類一、MOFE動物模型的制備

之一

低血流灌注致老齡大鼠MOFE模型以低血流灌注造成老齡大鼠MOFE模型，發(fā)生器官衰竭的順序是：肺、肝、腎及胃腸。提示肺部感染或受損可能為首要的誘發(fā)因素

內毒素引起老齡大鼠MOFE模型內毒素靜脈注射老齡大鼠后，肺部明顯受損，2小時發(fā)生肺部衰竭，24小時衰竭明顯加重，形成MOFE*

[*張青等.

三軍醫(yī)大呼吸病研究所.中國危重病急救醫(yī)學.2001;13(9):523-526]

一、MOFE動物模型的制備之一一、MOFE動物模型的制備之二

油酸可引起大鼠肺部損傷，小劑量內毒素不引起明顯的動物病理和功能的變化，但在油酸引起肺損傷基礎上，小劑量內毒素可誘發(fā)MOFE。結果提示在肺部受損的背景下易誘發(fā)MOFE*

[*張青等.三軍醫(yī)大呼吸病研究所.重慶醫(yī)學.2001;30(5):388-389]

一、MOFE動物模型的制備之二一、MOFE動物模型的制備之三供氧障礙對MOFE的發(fā)生和發(fā)展的影響低血流灌注形成MOFE的大鼠模型中，最早的變化是血氧明顯下降，而且其它器官的病理變化也首先是缺氧、缺血性的病理變化，繼而出現(xiàn)不可逆性的病理變化。提示肺部受損，供氧障礙可能誘發(fā)、加速MOFE的發(fā)生和發(fā)展*

[*王士雯等.解放軍總醫(yī)院老年心血管病研究所.]一、MOFE動物模型的制備之三供

在酵母多糖復制的大鼠多器官功能衰竭模型中，老年大鼠模型的全身炎癥反應大于年輕大鼠模型，這很可能是老年大鼠在相同致病強度下容易發(fā)生多器官功能衰竭的原因*

[*王士雯等.解放軍總醫(yī)院老年心血管病研究所.2003]一、MOFE動物模型的制備之四在酵母多糖復制的大鼠多器官功能衰竭模型中，老在不同來源細胞中建立D-半乳糖人工催老細胞模型的方法：肺微血管內皮細胞(RPMVECs)：建立了大鼠RPMVECs的分離、培養(yǎng)、鑒定、D-半乳糖致老細胞模型等系列方法大鼠的心肌細胞：通過多次傳代培養(yǎng)、D-半乳糖刺激，制作并觀察了大鼠的心肌細胞老化模型的一些特點人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）：觀察了D-半乳糖對HUVEC促老化作用肺動脈平滑肌細胞：對比觀察了成年、老齡和經D－半乳糖處理的成年大鼠肺動脈平滑肌細胞的生長特性人肺二倍體細胞：建立了人肺二倍體細胞的培養(yǎng)系統(tǒng)，正在進行老化指標觀察細胞模型在不同來源細胞中建立D-半乳糖人工催老細胞模型的方法：細胞在內毒素引起的老齡大鼠MOFE模型中，肺部受損、衰竭發(fā)生早。在內毒素引起肺損傷時，TNF-α是早期表達的致炎細胞因子，而IL-6對炎癥進一步發(fā)展起一定促進作用。NF-IL6對損傷早期的TNF-α轉錄并不起主要作用，但對IL-6表達增高有調控作用*

[*張青等.三軍醫(yī)大呼吸病研究所.重慶醫(yī)學.2001;30(5):388-389]

二、生化學和炎癥介質等改變之一在內毒素引起的老齡大鼠MOFE模型中，肺部受損在酵母多糖致大鼠MOFE模型中，體外培養(yǎng)的肺泡巨噬細胞合成和分泌TNF-α和IL-10的水平在老年和青年大鼠模型中無明顯差別，但TNF-α和IL-10比值降低說明在酵母多糖刺激24小時后，巨噬細胞可能以產生抗炎介質為主，機體已啟動代償性抗炎反應*

[*王士雯等.解放軍總醫(yī)院心研所。2003]二、生化學和炎癥介質等改變之二在酵母多糖致大鼠MOFE模型中，體外老年多器官衰竭幻燈(第五稿)08_課件小鼠臟器核轉錄因子NF-κB活性老化小鼠的各臟器中，NF-κB的表達量及活性均有不同程度的增加，尤以肺臟的改變最為顯著。推測NF-κB可能是老化及肺啟動的老年多器官功能不全過程中的一個非常關鍵的轉錄因子*。而抗脂多糖蛋白抗體對NF-κB活化以及對TNF-α和IL-6生成有抑制作用**

[*鮑國強等.軍事醫(yī)科院輸血研究所.中華老年多器官疾病雜志.2002;1(3):200-203][**李永旺等.三軍醫(yī)全軍呼吸病研究所.]二、生化學和炎癥介質等改變之一小鼠臟器核轉錄因子NF-κB活NF-κB的DNA結合活性在老化小鼠臟器中升高率NF-κB的DNA結合活性在老化小鼠臟器中升高率三、MOFE小鼠臟器中胞間

粘附分子-1表達改變在正常小鼠，胞間粘附分子-1蛋白和mRNA的表達依次是肺、脾、腎和腸，在肝臟和心臟中未能檢出脂多糖腹腔注射后6ｈ可誘導小鼠發(fā)生內毒素休克，此時，胞間粘附分子-1蛋白表達仍以在肺中最多，在肝、脾、心、腎和腸依次減少；其中在肺、腎和脾分別比正常時增加45、30和15倍。臟器胞間粘附分子-1表達上調的差異可能帶來內毒素休克時臟器的不同易損傷性，抑制其表達可能對由內毒素所致的MOFE有重要意義

[閆文生等.第一軍醫(yī)大全軍休克微循環(huán)實驗室.生理學報.2002;54(1):71～74]三、MOFE小鼠臟器中胞間

粘附分子-1表達老齡和青年大鼠肺泡巨噬細胞凋亡用酵母多糖腹腔注射復制老年和青年大鼠多衰模型，通過支氣管肺泡灌洗和細胞貼壁的方法獲取巨噬細胞，體外培養(yǎng)20h后收獲細胞，結果提示MOF模型組中老年組巨噬細胞凋亡率明顯高于青年組；隨著制模酵母多糖刺激濃度的增加，巨噬細胞凋亡率和巨噬細胞的胞內游離鈣濃度增加*四、MOFE時的細胞生物學研究[*錢小順等.解放軍總醫(yī)院老年心血管病研究所.2003]老齡和青年大鼠肺泡巨噬細胞凋亡四、MO老年大鼠和青年大鼠肺泡巨噬細胞凋亡率（APO%）的比較老年大鼠和青年大鼠肺泡巨噬細胞凋亡率（APO%）的比較

青年對照青年模型老年對照老年模型PI染色流式細胞儀檢測肺泡巨噬細胞凋亡熒光直方圖

PI染色流式細胞儀檢測肺泡巨噬細胞凋亡熒光直方圖青年對照青年模型老年對照老年模型用Hoechst33342染色后，在熒光顯微鏡下可見老年和青年模型組巨噬細胞有較多的凋亡前期改變和凋亡小體的形成青年對照

成年及老齡大鼠慢性心功能不全模型建立成功后，除對照組及模型組外，其他存活大鼠氣管注入脂多糖誘發(fā)肺損傷，對照組氣管注入同等劑量生理鹽水，觀察肺損傷24小時、48小時、72小時左心室內血流動力學參數改變五、肺損傷與其他器官功能不全的相關性研究[馬路等.解放軍總醫(yī)院老年心血管病研究所.2003]成年及老齡大鼠慢性心功能不全模型建立成功后，除對照組及模正常成年大鼠心肌老齡心肌肥厚大鼠心肌老齡心肌肥厚合并肺部 感染，心肌有灶性出血心肌肥厚大鼠腎臟老齡心肌肥厚合并肺部感染大鼠腎臟，有管型正常成年大鼠心肌老齡心肌肥厚大鼠心肌心肌：123456iNOS： 130KD

ICAM-1： 80KDβ-actin：

1正常老年對照組2老年心衰組3老年肺損傷后72小時組4正常成年對照組5成年心衰組6成年肺損傷后24小時組

心肌組織中ICAM-1及iNOS蛋白的Westenblotting結果心?。?23

Toll樣受體4是新近發(fā)現(xiàn)的重要脂多糖受體。以Toll樣受體4（TRL4)基因突變型小鼠C3H/HeJ及野生型小鼠BALB/C為實驗對象，腹腔內注射脂多糖（1mg/kg）或生理鹽水。用RT-PCR方法，對注射脂多糖前后兩組小鼠心肌Toll樣受體4、TNF-α和IL-1βmRNA表達進行半定量檢測。結果表明：TLR4在心肌表達，并且介導了脂多糖刺激下小鼠心肌局部TNF-α和IL-1β的基因表達。

六、Toll樣受體4在脂多糖誘導小鼠心肌

TNF-α及IL-1β的基因表達中的作用六、Toll樣受體4在脂多糖誘導小鼠心肌

腹腔注射LPS后，C3H/HeJ及BALB/C小鼠心肌TLR4mRNA表達

A.C3H/HeJ小鼠；B.BALB/C小鼠；C.內參照GAPDH；M.DNA分子量標準

腹腔注射LPS后，C3H/HeJ及BALB/C小鼠心對C3H/HeJ和BALB/C小鼠TLR4PCR產物測序并證明C3H/HeJ小鼠TLR4編碼區(qū)基因存在點突變

對C3H/HeJ和BALB/C小鼠TLR4PCR產物測序并BALB/CC3H/HeJ

處理LPSLPSNS腹腔注射LPS后，BALB/C及C3H/HeJ小鼠心肌TNF-α和IL-1βmRNA的

表達

BALB/CC3

七、MOFE模型生化指標改變之一

與正常對照組相比，D-半乳糖致衰老和自然衰老組小鼠血清、心、腦、肝、肺、腎等組織的丙二醛含量增加，血清谷胱甘肽過氧化物酶活性以及血清、腦、肝、肺、腎等臟器的SOD活性降低；自然衰老組小鼠血清一氧化氮（NO）含量、一氧化氮合酶（NOS）活性以及心臟超氧化物歧化酶（SOD）活性降低，而藥物致衰老組血清NO含量及NOS和心臟SOD活性無明顯變化*。說明D-半乳糖致衰老小鼠氧化水平增加，抗氧化能力下降，但和自然衰老小鼠相比，還存在一定程度差異[*朱慶磊等.解放軍總醫(yī)院老年心血管病研究所.2002]七、MOFE模型生化指標改變之一從靜注脂多糖后形成的大鼠急性肺損傷模型發(fā)現(xiàn)血中乳酸、一氧化氮、內皮素-1、腫瘤壞死因子-α含量及血乳酸脫氫酶活性均有顯著升高，預先給予銀杏葉提取物可顯著緩解上述變化。并且，銀杏葉提取物對衰老大鼠急性肺損傷誘導肝功能受損有保護作用

[張宏等.中國醫(yī)科院基礎醫(yī)學研究所.基礎醫(yī)學與臨床.2002;22(2):155-158[

七、MOFE模型生化指標改變之二

從靜注脂多糖后形成的大鼠急性肺損傷模型發(fā)現(xiàn)血中

血紅素氧合酶-1（HO-1）、肌醇磷脂4-激酶（PI4-K）、蛋白激酶-C（PKC）是應激反應信號通路重要組成成分。結果表明它們在老年大鼠肺組織中的表達最高。推測：衰老過程可能誘導產生了應激反應。我們的研究結果結合臨床實驗研究結果說明，老年肺臟內氧化壓力最高，HO-1、PI4-K、PKC應激水平升高可能是導致老齡動物易于發(fā)生多器官功能不全的原因之一八、應激蛋白的隨齡改變[丁秀云.解放軍總醫(yī)院老年心血管病研究所.2003.]血紅素氧合酶-1（HO-1）、肌醇磷脂4-激酶（P心肌肺乳鼠青年大鼠老齡大鼠血紅素氧合酶-1在不同年齡大鼠心臟和肺組織中的表達

心肌乳鼠通過差異蛋白質組學方法研究發(fā)現(xiàn)老齡與成年小鼠肺組織中蛋白組的差異，發(fā)現(xiàn)了3種可能與小鼠衰老有關聯(lián)的蛋白質九、老齡與成年小鼠肺組織蛋白組學研究[鮑國強等.軍事醫(yī)學科學院.2003.]九、老齡與成年小鼠肺組織蛋白組學研究[鮑國強等.軍事醫(yī)學科學小鼠的肺臟蛋白2D電泳圖老齡鼠成年鼠小鼠的肺臟蛋白2D電泳圖老齡鼠成年鼠差異蛋白分析8711101392465差異蛋白分析8711101392465差異蛋白的質譜分析結果差異蛋白質譜峰值2D-1

1727.831884.002163.002202.152273.132520.212542.343132.59

2D-2

1479.611668.711993.712086.682103.672162.812239.732272.882446.802510.872548.862648.152828.112845.102874.002890.02

2D-31910.061924.761986.982001.83

2D-4

1306.651382.691467.641625.701869.861939.792095.932280.972373.052563.222815.25

2D-51971.062679.123571.503651.263712.603727.574297.72

2D-6

1628.841638.791993.842094.972398.912501.132705.002831.032872.233052.463264.38

2D-7

1151.721163.681179.741209.841340.801639.151689.071701.121969.391978.401984.381994.352012.362028.352150.422289.492373.562384.352445.452501.632509.512705.472989.693034.753265.823312.503766.834355.744483.63

2D-81487.691653.791812.981982.012136.972163.102263.082273.172595.262760.443472.78

2D-9

1295.811339.651849.211888.871904.841947.972142.202162.992273.162289.12

2D-10

1050.051066.001081.972062.002074.002091.052588.302604.312671.282964.393290.353572.423712.573727.493773.473942.493958.563974.504296.514297.51

差異蛋白的質譜分析結果差異蛋白質譜峰值2D-1172差異蛋白檢索結果Score2D-1Kitligandprecursor602D-2CarbonicanhydraseII582D-3Ras-relatedproteinRab-8312D-4Hyaluronansynthase2422D-5Numb-bindingprotein2282D