新疆部分地區(qū)牛支原體抗體檢測(cè)與分析

新疆部分地區(qū)牛支原體抗體檢測(cè)與分析

新疆位于歐洲和亞洲的大陸上。其獨(dú)特的自然地理環(huán)境和未經(jīng)處理的有機(jī)牧場(chǎng)資源，使新疆成為中國(guó)傳統(tǒng)的五個(gè)牧區(qū)之一，也是中國(guó)養(yǎng)牛業(yè)的主要地區(qū)。隨著養(yǎng)牛業(yè)的日益發(fā)展,各種疫病對(duì)養(yǎng)牛業(yè)造成的威脅也日趨嚴(yán)重,其中,牛呼吸道疾病給養(yǎng)牛業(yè)造成的經(jīng)濟(jì)損失不容忽視。而在感染呼吸道疾病的牛中,至少有1/4~1/3是由牛支原體引起的。牛支原體是存在于健康牛和肺炎牛上、下呼吸道的常見寄生菌,主要引起牛的肺炎、關(guān)節(jié)炎、乳房炎、角膜炎、結(jié)膜炎等多種疾病。該病原于1961年首次在美國(guó)患有乳房炎的病牛中分離得到,辛九慶等在2008年報(bào)道國(guó)內(nèi)首次從患肺炎的犢牛肺臟中分離到了牛支原體。自2010年7月以來(lái),新疆石河子、奎屯等地區(qū)某些規(guī)模化養(yǎng)牛場(chǎng)部分牛陸續(xù)發(fā)生一種以高熱、呼吸道癥狀、胸膜肺炎和膝關(guān)節(jié)腫大為特征的疾病,發(fā)病率較高,通過(guò)對(duì)采集樣品進(jìn)行病原分離培養(yǎng)、特異性抗體ELISA檢測(cè)和PCR鑒定,結(jié)果證實(shí),牛支原體是引起該病(牛肺炎及關(guān)節(jié)炎)的病原之一。為了解支原體的感染情況,對(duì)新疆伊犁及塔城地區(qū)部分縣市103頭牛隨機(jī)采血,采用雙抗原夾心ELISA方法,進(jìn)行了牛支原體病的抗體監(jiān)測(cè)。自2011年首次證實(shí)牛支原體已在新疆流行以來(lái),還沒(méi)有關(guān)于牛支原體肺炎大面積發(fā)病的報(bào)道,因此,通過(guò)該次血清學(xué)調(diào)查,初步了解牛支原體在調(diào)查地區(qū)的流行情況,以期為開展后續(xù)的防疫工作和制定綜合防控措施積累資料。1材料和方法1.1材料表面1.1.1血清檢查對(duì)新疆伊犁育肥場(chǎng)14頭牛、繁育場(chǎng)56頭牛以及新疆塔城33頭牛隨機(jī)采血,分離血清,于-20℃條件下保存?zhèn)溆谩?.1.2測(cè)試試劑1.1.3設(shè)備1.2方法1.2.1?？贵w抗體的制備該試劑盒用雙抗原夾心ELISA法測(cè)定標(biāo)本中牛支原體抗體水平。用純化的牛支原體抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被單抗的微孔中依次加入支原體抗體,再與HRP標(biāo)記的牛支原體抗原結(jié)合,形成抗原—抗體—酶標(biāo)抗原復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中的牛支原體抗體呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)。1.2.2空白對(duì)照對(duì)檢測(cè)在包被好抗原的酶標(biāo)板上先加樣品稀釋液40μL,然后再加待測(cè)樣品10μL,每板設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性對(duì)照2孔(各50μL)和空白對(duì)照1孔。用封板膜封板,37℃溫育30min。1.2.3清潔板1.2.4酶標(biāo)記抗體1.2.5清潔板1.2.6顯色1.2.7完成后1.2.8測(cè)量以空白對(duì)照調(diào)零,于酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)下讀取各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15min以內(nèi)進(jìn)行。1.2.9抗體陰性判定成立條件:陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00;陰性對(duì)照平均值≤0.10。臨界值計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15。陰性判定:樣品OD值<臨界值者,為支原體抗體陰性。陽(yáng)性判定:樣品OD值≥臨界值者,為支原體抗體陽(yáng)性。2結(jié)果與分析2.1結(jié)果該次試驗(yàn)采用ELISA方法共檢測(cè)了103份牛血清樣品,檢出30份陽(yáng)性血清,陽(yáng)性率為29.1%,結(jié)果見表1。2.2?？贵w病感染情況結(jié)合試驗(yàn)結(jié)果可以看出,隨機(jī)采集的103份牛血清的陽(yáng)性率為29.1%,說(shuō)明調(diào)查地牛支原體病的感染率較高。其中,伊犁和塔城2個(gè)地區(qū)相比,塔城地區(qū)牛支原體病的感染率較高,陽(yáng)性率為36.4%;伊犁地區(qū)的繁育場(chǎng)與育肥場(chǎng)相比,繁育場(chǎng)支原體感染率較高,陽(yáng)性率為26.8%,而育肥場(chǎng)支原體感染率相對(duì)較低,陽(yáng)性率為21.4%。3討論3.1牛肉中的常見藥物治療從該次血清學(xué)調(diào)查結(jié)果來(lái)看,該病在調(diào)查地區(qū)存在,且感染率高,應(yīng)引起有關(guān)部門和養(yǎng)殖戶的高度重視。牛支原體既可以導(dǎo)致牛的急性呼吸系統(tǒng)疾病,還可以導(dǎo)致持續(xù)感染,常與細(xì)菌、病毒協(xié)同作用,環(huán)境因子如天氣惡劣、通風(fēng)不良、過(guò)度擁擠、運(yùn)輸?shù)瓤梢约觿〔∏?臨床上多種抗生素對(duì)該病的治療效果均較差。病牛可通過(guò)鼻腔分泌物排出牛支原體,健康?？赏ㄟ^(guò)近距離接觸病牛而感染發(fā)病,牛一旦感染支原體,可持續(xù)帶菌而成為傳染源。3.2伊、伊、塔城等地牛最終呈應(yīng)激在采樣的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)塔城地區(qū)的養(yǎng)殖戶生活水平相對(duì)較低,養(yǎng)牛場(chǎng)基礎(chǔ)設(shè)施條件較差,大部分以散養(yǎng)為主,飼草料品種單一,基本上都是以草為主,使得牛只營(yíng)養(yǎng)不足,抗病能力減弱;塔城地區(qū)的養(yǎng)牛戶大多年齡偏大,飼養(yǎng)技術(shù)水平參差不齊,缺乏科學(xué)的養(yǎng)畜知識(shí),幾乎不為牛體刷毛,牛糞堆積處理意識(shí)不強(qiáng),在牛場(chǎng)隨處可見牛糞,甚至有些牛體都是滿身糞便,這樣就加大了牛支原體、細(xì)菌、病毒侵入牛體的機(jī)會(huì)。而在伊犁地區(qū),大多數(shù)養(yǎng)牛戶都有自己的全封閉式的牛舍,雖然面積不大,基本上都有活動(dòng)場(chǎng)地。伊犁地區(qū)的繁育牛基本上都是當(dāng)?shù)仞B(yǎng)牛戶自繁自養(yǎng)的,但沒(méi)有將牛群分群飼養(yǎng),存在產(chǎn)犢母牛與牛犢不分離的現(xiàn)象,糞便處理不及時(shí),存在支原體病原的隱性感染;有時(shí),需要從其他地區(qū)買入種牛,在運(yùn)輸過(guò)程中,由于發(fā)生應(yīng)激,種牛會(huì)出現(xiàn)各種不良反應(yīng),到達(dá)牛場(chǎng)后,最明顯的不良反應(yīng)就是食欲不振,這會(huì)導(dǎo)致種牛的抵抗力下降,為牛支原體和其他病菌入侵提供了機(jī)會(huì)。而對(duì)于育肥牛,可能是因?yàn)殛P(guān)系到經(jīng)濟(jì)收入,伊犁地區(qū)的養(yǎng)牛戶在飼養(yǎng)管理和環(huán)境衛(wèi)生等方面相對(duì)注意一些,但極少對(duì)牛常發(fā)病進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查,依舊還是在牛發(fā)病后,根據(jù)病牛出現(xiàn)的癥狀進(jìn)行診療和處置,缺乏全面系統(tǒng)的處理程序。由該次調(diào)查結(jié)果得知,伊犁和塔城2個(gè)地區(qū)相比,塔城地區(qū)牛支原體感染率較高,陽(yáng)性率為36.4%;在伊犁地區(qū),繁育場(chǎng)牛支原體感染率較高,陽(yáng)性率為26.8%,而育肥場(chǎng)支原體感染率相對(duì)較低,陽(yáng)性率為21.4%,這與筆者調(diào)查了解到的塔城地區(qū)和伊犁地區(qū)養(yǎng)牛戶的飼養(yǎng)管理情況基本符合。3.3加強(qiáng)對(duì)病牛的檢測(cè)牛支原體對(duì)外界環(huán)境各種因素的抵抗力不是很強(qiáng),因此預(yù)防該病最根本的辦法就是加強(qiáng)平時(shí)的飼養(yǎng)管理,以預(yù)防為主。相關(guān)部門要加強(qiáng)宣傳工作,使養(yǎng)牛戶充分了解和認(rèn)識(shí)該病對(duì)養(yǎng)牛業(yè)的危害,從而提高對(duì)該病的防控意識(shí),在平時(shí)的飼養(yǎng)管理中,應(yīng)當(dāng)保持牛舍通風(fēng)良好、清潔、干燥,牛群不要過(guò)度擁擠,不同年齡的牛分開飼養(yǎng),定期消毒牛舍,及時(shí)發(fā)現(xiàn)并隔離病牛,嚴(yán)格檢疫,以減少不必要的損失。在購(gòu)買新牛時(shí),進(jìn)行一些常規(guī)檢查,避免購(gòu)入病牛;做好對(duì)運(yùn)輸車輛的消毒,買入新牛后,首先要進(jìn)行隔離觀察,確保無(wú)病后方可與健康?；烊猴曫B(yǎng);育肥牛采取全進(jìn)全出制度,在空欄期對(duì)牛舍進(jìn)行全面徹底的消毒。4elisa檢測(cè)?？贵w病牛支原體病在調(diào)查地區(qū)存在,感染率較高,應(yīng)引起重視,相關(guān)部門應(yīng)加強(qiáng)宣傳,使得養(yǎng)殖戶充分了解和認(rèn)識(shí)該病對(duì)畜牧業(yè)的危害。在該次血清學(xué)調(diào)查之后,筆者將在病原分離培養(yǎng)、基因組提取及種型鑒定等方面對(duì)牛支原體病進(jìn)行系統(tǒng)研究,了解這些地區(qū)牛支原體病的發(fā)生和流行情況,為防控該病提供參考數(shù)據(jù)。牛支原體抗體ELISA檢測(cè)試劑盒,購(gòu)自北京永輝生物科技有限公司。酶標(biāo)儀、微量加樣器和