偶氮氯膦與殼聚糖的相互作用

偶氮氯膦與殼聚糖的相互作用

地殼聚糖（cts）是甲基物質(zhì)氮脫離酶的產(chǎn)物。這是自然界唯一不必要的堿性糖。它具有很好的吸附性、成膜性、通透性、成纖性、吸濕性、保濕性。因此,殼聚糖在紡織印染、造紙、食品、化妝品、污水處理、醫(yī)用材料等工業(yè)中有著很廣泛的應(yīng)用。同時(shí),殼聚糖及其衍生物還是很重要的生物活性物質(zhì),具有抗腫瘤、抗凝血、抗血栓、降血脂和增強(qiáng)免疫力等功能。此外,殼聚糖在分析化學(xué)的應(yīng)用也很廣泛。所以建立測(cè)定殼聚糖的方法就顯得特別重要。已有利用茜素紅S,鋅試劑等光度法測(cè)定殼聚糖的報(bào)道,但采用電化學(xué)法測(cè)定殼聚糖的報(bào)道甚少。文中利用殼聚糖與偶氮氯膦Ⅲ生成非電活性復(fù)合物這一特征,建立了測(cè)定殼聚糖的電化學(xué)方法。1試驗(yàn)部分1.1工作電極的制備JP-303型極譜分析儀(成都儀器廠(chǎng));三電極系統(tǒng):滴汞電極為工作電極,飽和甘汞電極(SCE)為參比電極,鉑絲為對(duì)電極;CV-50W電化學(xué)分析儀(美國(guó)BAS公司);JM-1型懸汞電極(江蘇電分析儀器廠(chǎng))為工作電極;pHS-25型酸度計(jì)(上海雷磁儀器廠(chǎng));UV-2501紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本,島津公司)。殼聚糖(CTS,脫乙酸度85%,相對(duì)分子質(zhì)量以5×105計(jì),Sigma公司):1000mg/L。稱(chēng)取殼聚糖0.100g溶于100mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%HAC溶液作為貯液,移取貯液12.5mL定容至250mL作為工作液(50mg/L)。偶氮氯膦Ⅲ,5.0×10-4mol/L。六次甲基四胺緩沖液,1.0mol/L。所用試劑均為分析純,實(shí)驗(yàn)用水為3次蒸餾水。1.2電化學(xué)和光譜分析在10mL的比色管中,依次加入2.0mL1.0mol/LpH5.0六次甲基四胺緩沖液、2.0mL5.0×10-4mol/L偶氮氯膦Ⅲ和不同濃度的CTS,用水定容,搖勻后靜置5min用電化學(xué)方法和光譜法進(jìn)行研究和測(cè)定。2結(jié)果與討論2.1偶氮氯膦與cts發(fā)生的反應(yīng)在pH為5.0的六次甲基四胺緩沖液中,偶氮氯膦Ⅲ在574nm處有一吸收峰,當(dāng)向溶液中加入CTS后,該處的吸收峰明顯降低(見(jiàn)圖1),這表明偶氮氯膦Ⅲ與CTS發(fā)生了反應(yīng)生成了復(fù)合物,因而引起了吸收峰的降低。2.2cts含量的測(cè)定在pH5.0的六次甲基四胺緩沖液中,用線(xiàn)性?huà)呙瓒A導(dǎo)數(shù)極譜法對(duì)體系進(jìn)行測(cè)定,偶氮氯膦Ⅲ在-0.158V處和-0.404V處分別有2個(gè)靈敏的二階導(dǎo)數(shù)還原極譜波(見(jiàn)圖2),加入一定量的CTS后,2處的峰電位均保持不變,-0.404V處的還原波的峰電流變化不明顯,而-0.158V處還原波的峰電流卻明顯降低,并且峰電流的降低值與加入的CTS量在一定范圍內(nèi)呈線(xiàn)性關(guān)系,因此可用于CTS含量的測(cè)定。2.3ph值對(duì)峰電流的影響固定偶氮氯膦Ⅲ和CTS的濃度,實(shí)驗(yàn)了鄰苯二甲酸氫鉀、B-R緩沖液、HAc-NaAc、六次甲基四胺等緩沖液,發(fā)現(xiàn)在六次甲基四胺緩沖液中波形良好,峰電流穩(wěn)定,并且峰降明顯,同時(shí)測(cè)定了pH值的變化對(duì)峰電流的影響,結(jié)果表明,隨著pH增大峰電位負(fù)移,在pH5.0時(shí)峰電流降低值△ip最大(見(jiàn)圖3),所以本實(shí)驗(yàn)采用pH5.0的六次甲基四胺緩沖液控制體系的酸度。2.4不同緩沖液對(duì)峰電流降低值的影響固定偶氮氯膦Ⅲ和CTS的量,改變緩沖液的用量。結(jié)果表明,當(dāng)緩沖液取2.0mL時(shí),峰電流降低值△ip最大(見(jiàn)圖4)。所以選pH5.0的六次甲基四胺緩沖液2.0mL為最佳用量。2.5偶氮氯膦濃度在pH5.0的六次甲基四胺緩沖介質(zhì)中,固定CTS的濃度為7.5mg/L,考察偶氮氯膦Ⅲ濃度變化對(duì)測(cè)定影響,發(fā)現(xiàn)當(dāng)偶氮氯膦Ⅲ濃度較大時(shí)峰電流不會(huì)降低反而增大,影響測(cè)定。當(dāng)偶氮氯膦Ⅲ濃度為1.0×10-4mol/L時(shí),峰電流穩(wěn)定且峰電流差值△ip最大(見(jiàn)圖5),所以本實(shí)驗(yàn)選擇偶氮氯膦Ⅲ的最佳用量為1.0×10-4mol/L。2.6穩(wěn)定實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)表明,反應(yīng)5min后體系的峰電流穩(wěn)定,并至少可穩(wěn)定1h以上。本實(shí)驗(yàn)選取反應(yīng)時(shí)間為5min。2.7標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)及檢出限在選定的最佳條件下,測(cè)CTS的線(xiàn)性范圍為2.5～30mg/L,回歸方程為:ip(nA)=-193.1+62.40CCTS(mg/L),檢出限為0.5mg/L,對(duì)7.5mg/L的CTS溶液平行進(jìn)行11次測(cè)定,其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.8%。2.8峰電流及峰電流在反應(yīng)體系中(1.0×10-4mol/L偶氮氯膦Ⅲ+7.5mg/LCTS):添加不同試劑考察峰電流的變化。牛血清白蛋白(BSA)(7.5mg/L)對(duì)體系無(wú)影響,低濃度NaCl(質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1%)對(duì)體系影響不大,而較高濃度的NaCl(質(zhì)量分?jǐn)?shù)1.0%)和十二烷基苯磺酸鈉(SDS,5.0g/L)以及曲通X-100(質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%)對(duì)反應(yīng)體系影響很大。2.9偶氮氯膦+cts的關(guān)系當(dāng)掃速在100～500mV/s內(nèi)變化時(shí),偶氮氯膦Ⅲ(1.0×10-4mol/L)與偶氮氯膦Ⅲ(1.0×10-4mol/L)+CTS(7.5mg/L)的Ip與掃速v均呈線(xiàn)性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)分別為0.9992,0.9993(見(jiàn)圖6)。說(shuō)明極譜波性質(zhì)為典型的吸附波。2.10偶氮氯膦在電極上的吸附性能從電毛細(xì)管曲線(xiàn)可看出(見(jiàn)圖7),在緩沖介質(zhì)中加入偶氮氯膦Ⅲ后,曲線(xiàn)明顯下降(見(jiàn)曲線(xiàn)2),說(shuō)明偶氮氯膦Ⅲ在電極上有強(qiáng)烈的吸附性,當(dāng)繼續(xù)加入CTS時(shí)得到曲線(xiàn)3,曲線(xiàn)3明顯比曲線(xiàn)2上升,體系的吸附作用減弱,說(shuō)明偶氮氯膦Ⅲ-CTS復(fù)合物在電極上的吸附性比游離態(tài)偶氮氯膦Ⅲ的弱得多,并且絡(luò)合物的存在對(duì)游離態(tài)偶氮氯膦Ⅲ的在電極上的吸附作用影響很小。3加標(biāo)回收率的測(cè)定根據(jù)文獻(xiàn),將新鮮的蝦殼,蟹殼內(nèi)的肉質(zhì),污物盡可能剔除干凈,烘干。準(zhǔn)確稱(chēng)取一定量干燥的蝦殼、蟹殼,經(jīng)過(guò)浸酸,堿煮,氧化脫色,還原,脫乙酰基等步驟處理后獲得殼聚糖粗制品(脫乙酰度80%),分別準(zhǔn)確稱(chēng)取0.05g該殼聚糖粗制品溶于50mL1%HAC溶液中,作為待檢樣品溶液。取一定量的處理好的樣品溶液,按1.2試驗(yàn)方法配制溶液,用線(xiàn)性?huà)?/p>