一種抑制煙草馬鈴薯Y病毒活性菌株的篩選方法與流程

一種抑制煙草馬鈴薯Y病毒活性菌株的篩選方法與流程引言煙草馬鈴薯Y病毒（PotatovirusY，Pvy）是引起馬鈴薯產(chǎn)量下降的一種病毒性疾病。目前，已經(jīng)有一些抗Pvy的馬鈴薯品種被開(kāi)發(fā)出來(lái)，但是病毒仍然沒(méi)有被完全控制。因此，需要尋找一種更有效的方法抑制Pvy的活性菌株。本文將介紹一種篩選方法和流程，用于抑制煙草馬鈴薯Y病毒活性菌株。方法步驟一：材料的準(zhǔn)備采集煙草馬鈴薯Y病毒的標(biāo)準(zhǔn)菌株。制備含有10%煙草馬鈴薯提取物的馬鈴薯蛋白質(zhì)培養(yǎng)基。采集自然界環(huán)境中的細(xì)菌，包括：喜見(jiàn)長(zhǎng)在寒冷環(huán)境中的細(xì)菌，如嗜冷菌（Psychrophilicbacteria）和嗜寒菌（Psychrotrophicbacteria）；喜歡生活在鹽度高的環(huán)境中的細(xì)菌，如鹽單胞菌（Halophilicbacteria）和耐鹽菌（osmotolerantbacteria）；喜歡生長(zhǎng)在高壓環(huán)境中的細(xì)菌，如高壓菌（Barophilicbacteria）和深海細(xì)菌（Deepseabacteria）。步驟二：細(xì)菌的篩選把以上菌株挑選出來(lái)，篩選出具有抑制Pvy活性的細(xì)菌。對(duì)于篩選出來(lái)的細(xì)菌，進(jìn)行二次篩選，即進(jìn)行抑制Pvy活性的再生產(chǎn)評(píng)估。以具有活性的細(xì)菌為孵化體系，通過(guò)菌落PCR或者病毒特異性反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）鑒定篩選出的細(xì)菌菌株是否能夠抑制Pvy的活性菌株。步驟三：細(xì)菌的培養(yǎng)選取上述篩選出的細(xì)菌菌株，將其移植到蛋白質(zhì)培養(yǎng)基中，并經(jīng)常搖動(dòng)。然后培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，用1000r/min離心，將上清液采取加熱殺菌的方法，得到菌液樣品。步驟四：測(cè)試菌液測(cè)定菌液樣品的PH值、溫度、接種量、菌液稀釋倍數(shù)等參數(shù)。分別取一定量的煙草馬鈴薯標(biāo)準(zhǔn)菌株及篩選出的活性細(xì)菌，進(jìn)行混合培養(yǎng)，評(píng)估菌液是否能夠抑制Pvy的活性菌株。步驟五：病毒的檢測(cè)選取Pvy標(biāo)準(zhǔn)菌株，進(jìn)行篩選，以驗(yàn)證菌液對(duì)Pvy標(biāo)準(zhǔn)菌株的抑制是否與對(duì)Pvy活性菌株的抑制有相似的作用。采用逆轉(zhuǎn)錄PCR法，在菌液樣品中檢測(cè)Pvy病毒的存在。流程展示材料的準(zhǔn)備采集煙草馬鈴薯Y病毒的標(biāo)準(zhǔn)菌株制備含有10%煙草馬鈴薯提取物的馬鈴薯蛋白質(zhì)培養(yǎng)基采集自然界環(huán)境中的細(xì)菌細(xì)菌的篩選篩選出具有抑制Pvy活性的細(xì)菌進(jìn)行二次篩選，即進(jìn)行抑制Pvy活性的再生產(chǎn)評(píng)估以具有活性的細(xì)菌為孵化體系，通過(guò)菌落PCR或者RT-PCR鑒定篩選出的細(xì)菌菌株能否抑制Pvy的活性菌株細(xì)菌的培養(yǎng)選取篩選出的具有抑制Pvy活性的細(xì)菌菌株將其移植到蛋白質(zhì)培養(yǎng)基中，并經(jīng)常搖動(dòng)培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，用1000r/min離心，將上清液采取加熱殺菌的方法，得到菌液樣品測(cè)試菌液測(cè)定菌液樣品的PH值、溫度、接種量、菌液稀釋倍數(shù)等參數(shù)分別取一定量的煙草馬鈴薯標(biāo)準(zhǔn)菌株及篩選出的活性細(xì)菌，進(jìn)行混合培養(yǎng)，評(píng)估菌液是否能夠抑制Pvy的活性菌株病毒的檢測(cè)選取Pvy標(biāo)準(zhǔn)菌株，進(jìn)行篩選，以驗(yàn)證菌液對(duì)Pvy標(biāo)準(zhǔn)菌株的抑制是否與對(duì)Pvy活性菌株的抑制有相似的作用采用逆轉(zhuǎn)錄PCR法，在菌液樣品中檢測(cè)Pvy病毒的存在結(jié)論本文介紹了一種通過(guò)篩