菌種的分離純化技術(shù)平板劃線法課件

平板劃線技術(shù)王偉青平板劃線技術(shù)王偉青1名詞的認(rèn)識(shí)：菌落：由單個(gè)細(xì)菌（或其他微生物）細(xì)胞或一堆同種細(xì)胞在適宜固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長(zhǎng)繁殖到一定程度；形成肉眼可見(jiàn)有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)等特征的子細(xì)胞的群落。當(dāng)樣品被稀釋到一定程度，與培養(yǎng)基混合，在一定培養(yǎng)條件下，每個(gè)能夠生長(zhǎng)繁殖的細(xì)菌細(xì)胞都可以在平板上形成一個(gè)可見(jiàn)的菌落。

菌落總數(shù)就是指在一定條件下（如需氧情況、營(yíng)養(yǎng)條件、pH、培養(yǎng)溫度和時(shí)間等）每克（每毫升）檢樣所生長(zhǎng)出來(lái)的細(xì)菌菌落總數(shù)。

名詞的認(rèn)識(shí)：菌落：由單個(gè)細(xì)菌（或其他微生物）細(xì)胞或一堆同種細(xì)2菌苔：細(xì)菌在固體培養(yǎng)基接種線上由母細(xì)胞繁殖長(zhǎng)成的一片密集的、具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)特征的細(xì)菌群落，是許多菌落連成一片形成的細(xì)菌在斜面培養(yǎng)基接種線上長(zhǎng)成的一片密集的細(xì)菌群落，不同屬種細(xì)菌的菌苔形態(tài)是不同的菌苔：細(xì)菌在固體培養(yǎng)基接種線上由母細(xì)胞繁殖長(zhǎng)成的一片密集的、3菌種的分離純化技術(shù)平板劃線法課件4實(shí)驗(yàn)原理平板劃線分離法是指把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)在平板培養(yǎng)基表面通過(guò)分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨(dú)立分布的單個(gè)細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長(zhǎng)繁殖成單菌落，通常把這種單菌落當(dāng)作待分離微生物的純種。有時(shí)這種單菌落并非都由單個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的，故必須反復(fù)分離多次才可得到純種。其原理是將微生物樣品在固體培養(yǎng)基表面多次作“由點(diǎn)到線”稀釋而達(dá)到分離目的的。劃線的形式有多種，可將一個(gè)平板分成四個(gè)不同面積的小區(qū)進(jìn)行劃線,第一區(qū)(A區(qū))面積最小，作為待分離菌的菌源區(qū)，第二和第三區(qū)(B、C區(qū))是逐級(jí)稀釋的過(guò)渡區(qū)，第四區(qū)(D區(qū))，則是關(guān)鍵區(qū)，使該區(qū)出現(xiàn)大量的單菌落以供挑選純種用。為了得到較多的典型單菌落,平板上四區(qū)面積的分配應(yīng)是D＞C＞B＞A。實(shí)驗(yàn)原理平板劃線分離法是指把混雜在一起的微生物或同一微生物群5菌種的分離純化技術(shù)平板劃線法課件6實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私馄桨鍎澗€分離純種的原理，并熟練掌握該操作法。實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私馄桨鍎澗€分離純種的原理，并熟練掌握該操作法。7實(shí)驗(yàn)器材菌懸液牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基無(wú)菌培養(yǎng)皿，水浴鍋，接種環(huán)等。實(shí)驗(yàn)器材菌懸液8實(shí)驗(yàn)步驟1．融化培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基放入水浴中加熱至融化。2．倒平板：待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右，按無(wú)菌操作法倒2只平板(每皿約15m1)，平置，待凝固。實(shí)驗(yàn)步驟1．融化培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基放入水浴中加熱9右手持盛培養(yǎng)基的試管或三角瓶置火焰旁邊，用左手將試管塞或瓶塞輕輕地?fù)艹?，試管或瓶口保持?duì)著火焰；然后用右手手掌邊緣或小指與無(wú)名指夾住管(瓶)塞(也可將試管塞或瓶塞放在左手邊緣或小指與無(wú)名指之間夾住。如果試管內(nèi)或三角瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基一次用完，管塞或瓶塞則不必夾在手中)。左手拿培養(yǎng)皿并將皿蓋在火焰附近打開(kāi)一縫，迅速例入培養(yǎng)基約15m1，加蓋后輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基均勻分布在培養(yǎng)皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即為平板。倒平板的方法右手持盛培養(yǎng)基的試管或三角瓶置火焰旁邊，用左手將103.劃線方法⑴用接種環(huán)以無(wú)菌操作挑取懸液一環(huán)，先在平板培養(yǎng)基的一邊作第一次平行劃線3-4條，再轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿約70°角，并將接種環(huán)上剩余物燒掉，待冷卻后通過(guò)第一次劃線部分作第二次平行劃線，再用同法通過(guò)第二次平行劃線部分作第三次平行劃線和通過(guò)第三次平行劃線部分作第四次平行劃線A)。劃線完畢后，蓋上皿蓋，倒置于溫室培養(yǎng)。3.劃線方法⑴用接種環(huán)以無(wú)菌操作挑取懸液一環(huán)，先在平板培養(yǎng)基11(2)將挑取有樣品的接種環(huán)在平板培養(yǎng)基上作連續(xù)劃線(圖)。劃線完畢后，蓋上皿蓋，倒置溫室培養(yǎng)。(2)將挑取有樣品的接種環(huán)在平板培養(yǎng)基上作連續(xù)劃線(圖)。劃12(3)其他劃線方法1.斜線法2.曲線法3.方格法4.放射法5.四格法(3)其他劃線方法1.斜線法2.曲線法3.方格法413實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論

1．實(shí)驗(yàn)結(jié)果檢查每個(gè)平板劃線分離的結(jié)果，并繪制菌苔、菌落分布草圖。實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論

1．實(shí)驗(yàn)結(jié)果檢查每個(gè)平板劃線分離的結(jié)果，并繪142．討論針對(duì)實(shí)驗(yàn)原理、步驟、現(xiàn)象進(jìn)行討論。2．討論15通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)?zāi)銓W(xué)到了什么技術(shù)?請(qǐng)列舉出來(lái)并把它的技術(shù)要點(diǎn)寫(xiě)出來(lái).通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)?zāi)銓W(xué)到了什么技術(shù)?