同步熒光法測(cè)量步驟-林美娜

同步熒光光度法測(cè)定混合溶液濃度同步熒光法技術(shù)是由Lloyd首先提出的，它與常用的熒光測(cè)定方法最大的區(qū)別是同時(shí)掃描激發(fā)和發(fā)射兩個(gè)單色器波長(zhǎng)。由測(cè)得的熒光強(qiáng)度信號(hào)與對(duì)應(yīng)的激發(fā)波長(zhǎng)(或發(fā)射波長(zhǎng))構(gòu)成光譜圖，稱為同步熒光光譜。操作過程中，對(duì)激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)的波長(zhǎng)差Delta的設(shè)置最為重要。參數(shù)設(shè)置完畢后，對(duì)混合溶液進(jìn)行掃描，由于每個(gè)混合液濃度均對(duì)應(yīng)一個(gè)熒光強(qiáng)度值，根據(jù)濃度和熒光強(qiáng)度的線性關(guān)系繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，待測(cè)物只需按相同方法掃出其熒光強(qiáng)度，內(nèi)插即可獲得濃度值。具體步驟如下：Delta的選?。刹殚喯嚓P(guān)文獻(xiàn)，也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)獲得）激發(fā)波長(zhǎng)范圍的選取（根據(jù)溶液本身性質(zhì)）掃描，獲得同步熒光光譜圖配置不同濃度混合溶液，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)濃度與各自物質(zhì)特征波長(zhǎng)下的熒光強(qiáng)度值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知濃度進(jìn)行掃描，獲得各個(gè)物質(zhì)特征波長(zhǎng)下的熒光強(qiáng)度，求得混合物中各物質(zhì)濃度。（1）~（3）具體操作如下：點(diǎn)擊桌面文件夾CaryEclipse，雙擊Scan進(jìn)入下面界面點(diǎn)擊Setup，出現(xiàn)以下界面點(diǎn)擊Synchronous，設(shè)置波長(zhǎng)差Delta，激發(fā)波長(zhǎng)范圍start和stop。具體混合物的波長(zhǎng)差可通過實(shí)驗(yàn)獲得，對(duì)于L-色氨酸和L-酪氨酸混合物，Delta通常取70nm，波長(zhǎng)范圍200~350。設(shè)置完畢后點(diǎn)擊OK點(diǎn)擊Start開始掃描獲得混合溶液的熒光光譜曲線，兩個(gè)波峰分別為L(zhǎng)-酪氨酸和L-色氨酸的特征峰，其特征波長(zhǎng)分別為225.93nm，279.07nm。（4）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制配置濃度1~7μmol/L的混合溶液，掃描后獲得波長(zhǎng)為225.93nm和279.07nm處的熒光強(qiáng)度。L-色氨酸和L-酪氨酸濃度各自為1μmol/L時(shí)的光譜圖L-色氨酸和L-酪氨酸濃度各自為2μmol/L時(shí)的光譜圖L-色氨酸和L-酪氨酸濃度各自為3μmol/L時(shí)的光譜圖L-色氨酸和L-酪氨酸濃度各自為4μmol/L時(shí)的光譜圖L-色氨酸和L-酪氨酸濃度各自為5μmol/L時(shí)的光譜圖L-色氨酸和L-酪氨酸濃度各自為6μmol/L時(shí)的光譜圖L-色氨酸和L-酪氨酸濃度各自為7μmol/L時(shí)的光譜圖根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)濃度和225.93nm、279.07nm處的熒光強(qiáng)度關(guān)系繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如下圖。未知濃度的測(cè)量按照上面的方法掃描出未知濃度混合液的熒光光譜圖，讀取其熒光強(qiáng)度值，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲得相應(yīng)濃度值。補(bǔ)充部分：譜圖的處理（1）譜圖的處理（以一階導(dǎo)數(shù)處理為例）如果需對(duì)譜圖數(shù)據(jù)進(jìn)行處理時(shí)，可按如下步驟：選中需要進(jìn)行處理的譜圖，點(diǎn)擊譜圖數(shù)據(jù)處理按鈕（如下橢圓形圖標(biāo)），出現(xiàn)如下界面點(diǎn)擊“SelectedTrace”，即選中所需處理的曲線，在Operation中選取所需處理的方法。處理方法處理方法處理方法選中完畢后，例如一階導(dǎo)數(shù)Derivl，點(diǎn)擊“Apply”，出現(xiàn)如下界面再對(duì)DisplayOptions進(jìn)行選擇，是繪制新譜圖還是跟原數(shù)據(jù)繪制在同一張譜圖上，然后點(diǎn)擊“=”，即出現(xiàn)經(jīng)一階導(dǎo)數(shù)處理后的譜圖。（2）數(shù)據(jù)的獲得點(diǎn)擊Createreport，出現(xiàn)如下界面波長(zhǎng)與特征峰值所