黃酮類化合物-課件

第五章

中藥制劑中各類化學(xué)成分分析第五章

中藥制劑中各類化學(xué)成分分析1第二節(jié)黃酮類成分分析一、概述黃酮類化合物（flavonoids），在植物體內(nèi)大部分與糖結(jié)合成苷，一部分以游離形式存在。黃酮類化合物最集中的是被子植物，類型最全，結(jié)構(gòu)最復(fù)雜，含量也高。由這些中藥參與配伍的中藥制劑也較多見。第二節(jié)黃酮類成分分析一、概述2槲皮素（quercetin）

黃芩苷（baicalin）槲皮素（quercetin）黃芩苷（baicalin）3橙皮苷（hesperidin)葛根素（Puerarin）橙皮苷（hesperidin)葛根素（Puerarin）4淫羊藿苷（Icarin)淫羊藿苷（Icarin)5二、結(jié)構(gòu)特征及理化性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)特征

多數(shù)黃酮結(jié)構(gòu)中存在有桂皮?；氨郊柞；M成的交叉共軛體系，故在200-400nm波長區(qū)域內(nèi)有強(qiáng)烈的吸收帶，此是光譜法及色譜—光譜法分析的基礎(chǔ)。

大多黃酮及其苷類含有游離酚羥基，可與聚酰胺形成氫鍵，可用聚酰胺色譜法進(jìn)行分析。

二、結(jié)構(gòu)特征及理化性質(zhì)62、溶解度游離苷元難溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有機(jī)溶劑及稀堿液中。黃酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇等強(qiáng)極性溶劑中，但難溶或不溶于苯、氯仿等。（二）理化性質(zhì)2、溶解度（二）理化性質(zhì)73、酸堿性

酸性：黃酮類化合物因分子中多有酚羥基，故顯酸性，可溶于堿性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。堿性氧原子的性質(zhì)黃酮類化合物分子中γ-吡喃酮環(huán)上的1-位氧原子，因有未共用的電子對(duì)，故表現(xiàn)出微弱的堿性，可與強(qiáng)無機(jī)酸，如濃硫酸、鹽酸等生成鹽，常表現(xiàn)出特殊的顏色，可用于鑒別。生成的鹽極不穩(wěn)定，加水后即可分解。3、酸堿性84、顯色反應(yīng)還原反應(yīng)：與鹽酸—鎂粉（或鋅粉）反應(yīng)，金屬鹽類試劑的絡(luò)合反應(yīng)：黃酮類化合物分子中多有下列結(jié)構(gòu)，故常可與鋁鹽、鉛鹽、鋯鹽、鎂鹽等試劑反應(yīng)，生成有色絡(luò)合物。

4、顯色反應(yīng)9

鋁鹽：常用試劑為1%三氯化鋁或硝酸鋁溶液。生成的絡(luò)合物多為黃色（λmax=415nm）,并有熒光，可用于定性及定量分析。鉛鹽：常用1%醋酸鉛及堿式醋酸鉛水溶液，可生成黃至紅色沉淀。據(jù)此不僅可用于鑒定，也可用于提取及分離工作。鋯鹽：多用2%二氯氧化鋯甲醇溶液。黃酮類化合物分子中有游離的3-或5-OH存在時(shí)，均可反應(yīng)生成黃色的鋯絡(luò)合物。但兩種鋯絡(luò)合物對(duì)酸的穩(wěn)定性不同，當(dāng)反應(yīng)液中接著加入枸櫞酸后，5-羥基黃酮的黃色溶液顯著褪色，而3-羥基黃酮溶液的呈鮮黃色（鋯—枸櫞酸反應(yīng)）。

鋁鹽：常用試劑為1%三氯化鋁或硝酸鋁溶液。生成的絡(luò)合物多105、紫外光譜特征黃酮類由于具有2-苯基色原酮的基本結(jié)構(gòu)，具有特定的紫外吸收峰，常有兩個(gè)較強(qiáng)的吸收帶，I帶在300—400nm范圍內(nèi)，它是由于B環(huán)桂皮酰基引起的，Ⅱ帶為240—285nm范圍內(nèi)，它是由于A環(huán)上的苯甲?；鸬?。黃酮類化合物當(dāng)加入一些位移試劑如甲醇鈉、醋酸鈉、氯化鋁等，可使最大吸收波長發(fā)生位移，選擇性提高，還可消除雜質(zhì)的干擾，有利于含量測定。5、紫外光譜特征11三、定性鑒別（一）顯色反應(yīng)黃酮類化合物的顏色反應(yīng)多與分子中的酚羥基及γ-吡喃酮環(huán)有關(guān)。常用鹽酸-鎂粉（或鋅粉）反應(yīng)與金屬鹽類試劑的配合反應(yīng)黃酮類化合物分子中有游離的3-OH、5-OH或鄰二酚羥基時(shí)可與Al3+、Zr4+、Pb2+、Sr2+等形成絡(luò)合物，這些絡(luò)合物有的產(chǎn)生熒光或顏色加深（如Al3+、Zr4+），有的產(chǎn)生沉淀（如Pb2+、Sr2+）三、定性鑒別12（二）色譜鑒別吸附劑：硅膠、聚酰胺；硅膠色譜分離弱極性化合物較好；聚酰胺色譜分離含游離酚羥基的黃酮及其苷為佳；纖維素薄層則適用于分離多糖苷混合物；顯色反應(yīng)：采用在紫外光下觀察熒光和噴顯色劑相配合的方法。（二）色譜鑒別13

實(shí)例二陳丸中橙皮苷的鑒別供試品取本品5g，加甲醇30ml，置水浴上加熱回流30分鐘，濾過，濾液濃縮至約5ml，作為供試品溶液。對(duì)照品橙皮苷對(duì)照品，加甲醇制成飽和溶液，為對(duì)照品溶液。展開吸取上述兩種溶液各2μl,分別點(diǎn)于同一用0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-甲酸-水（100：17：13）為展開劑展開，展距約3cm，取出，晾干，再以甲苯-醋酸乙酯-甲酸-水（20：10：1：1）的上層溶液為展開劑，展開，展距約8cm，取出晾干。顯色噴以三氯化鋁試液，置于紫外燈下（365nm）檢視。

實(shí)例二陳丸中橙皮苷的鑒別14黃酮類化合物--課件15

四、黃酮類成分定量分析

總黃酮含量、黃酮類單體成分的含量或二者同時(shí)測定。直接測定:

黃酮類化合物具有特定的紫外吸收峰,含黃酮類化合物的原料藥及部分制劑經(jīng)一定的提取純化后,可直接于最大吸收波長處測定其吸收度,以蘆丁等為對(duì)照品計(jì)算其含量.

顯色測定:

黃酮類化合物顯色以后顯色物與背景最大吸收波長差別較大,可消除背景(即陰性空白)的干擾,以提高本法的選擇性及靈敏度.常用鋁鹽作顯色試劑.四、黃酮類成分定量分析 16（二）黃酮類單體成分的含量測定1、薄層色譜法樣品經(jīng)有機(jī)溶劑或水提取后，可用硅膠、纖維素或聚酰胺進(jìn)行層析，達(dá)到分離目的。層析后可將含有待測組分的色斑刮下，再用適當(dāng)?shù)娜軇┫疵摵?，用紫?可見分光光度法測定。更常用的是薄層掃描儀（單波長或雙波長法）直接在薄層板上掃描測定。

（二）黃酮類單體成分的含量測定172、高效液相色譜法由于黃酮類化合物在紫外區(qū)有較強(qiáng)的吸收，使用HPLC法檢測靈敏度較高，故該法在黃酮類單體成分的定量分析中最常用。黃酮類成分的HPLC條件他為正相和反相色譜兩類，反相色譜應(yīng)用較多。反相色譜測定多有C18鍵合相固定液，流動(dòng)相常用甲醇-水-乙酸（或磷酸緩沖液）及乙腈-水。檢測器主要采用紫外檢測器或熒光檢測器。2、高效液相色譜法18藿香正氣片橙皮苷的測定

HPLCphotogramsofhesperidinA：對(duì)照品溶液；B：陰性樣品溶液；C：供試品溶液對(duì)投料陳皮，依據(jù)《中華人民共和國藥典》陳皮項(xiàng)下要求，以干燥品計(jì)，橙皮苷的含量不得小于3.5%。結(jié)合法定標(biāo)準(zhǔn)和實(shí)際測定值以及上述分析，規(guī)定本品含橙皮苷的限度為不小于0.8mg/片藿香正氣片橙皮苷的測定

HPLCphotogramso191.采用正相HPLC法測定黃酮類成分，固定相選擇A.硅膠B.C18

C.C8

D.氰基鍵合相硅膠E.氨基鍵合相硅膠1.采用正相HPLC法測定黃酮類成分，固定相選擇202.采用光光度法測定總黃酮含量時(shí),常用的顯色劑有A.三氯化鋁B.硝酸鋁C.亞硝酸鈉-硝酸鋁D.醋酸鉀-三氯化鋁E.鹽酸-鎂粉2.采用光光度法測定總黃酮含量時(shí),常用的顯色劑有213.薄層色譜檢識(shí)黃酮類成分時(shí),常用的方法有A.硅膠薄層色譜B.氧化鋁薄層色譜C.聚酰胺薄層色譜D.纖維素薄層色譜E.紙色譜3.薄層色譜檢識(shí)黃酮類成分時(shí),常用的方法有224.黃酮類化合物常用的定性鑒別反應(yīng)有A.鹽酸-鎂粉反應(yīng)B．四氫硼鈉反應(yīng)C.二氯氧鋯反應(yīng)D.三氯化鋁反應(yīng)E.硝酸鋁反應(yīng)4.黃酮類化合物常用的定性鑒別反應(yīng)有235.采用高效液相色譜法測定黃酮類成分含量時(shí),常用檢測器有A.紫外檢測器B.熒光檢測器C.蒸發(fā)光散射檢測器D.示差檢測器E.氫焰離子化檢測器5.采用高效液相色譜法測定黃酮類成分含量時(shí),常用檢測器有241.2000年版《中國藥典》中黃芩以①_____、葛根以②____、淫羊藿以③_____為對(duì)照品進(jìn)行含量測定。2.大多數(shù)黃酮結(jié)構(gòu)中存在有①_____和②____組成的交叉共軛體系，故有③_____吸收。3.中藥制劑中單體黃酮類化合物的含量測定常用的色譜法是①_____和②____。測定時(shí)常隨行已知量的對(duì)照品，該測定方法稱③_____法。1.2000年版《中國藥典》中黃芩以①_____、葛根以②_254.用可見-紫外分光光度法測定中藥制劑中總黃酮類成分含量時(shí)，既可以利用①_____直接于λmax處測定吸收度，也可以利用②____后進(jìn)行測定，常用的對(duì)照品是③_____。5.醋酸鉀-三氯化鋁試劑與黃酮類顯色后其λmax為①____，亞硝酸鈉-硝酸鋁試劑與黃酮類顯色后其λmax為②____。4.用可見-紫外分光光度法測定中藥制劑中總黃酮類成分含量時(shí)，26試述復(fù)方制劑中黃酮類成分的硅膠薄層條件試述復(fù)方制劑中黃酮類成分的硅膠薄層條件27答案：①進(jìn)行二次展開，可有效的增大黃酮類成分在硅膠G板上的分離度；二次展開時(shí)，第一次展開用的展開劑極性強(qiáng)，展開后須將薄層板上的溶劑完全揮干。②三氯化鋁顯色檢識(shí)熒光，有效的增大其檢測的靈敏度；某些黃酮類化合物可與鋁鹽、鉛鹽、鋯鹽、鎂鹽等試劑發(fā)生配合反應(yīng)，生成有色絡(luò)合物。答案：282.一清顆粒中黃芩苷HPLC測定法中系統(tǒng)適用性試驗(yàn)為：用十八烷基鍵合硅膠為填充劑；甲醇-0.2mol/L磷酸二氫鈉緩沖液（用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.7）（42：58）為流動(dòng)相；檢測波長為275nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于5000，與相鄰峰的分離度應(yīng)符合要求。0.5mg/ml黃芩苷對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣（10μl）,峰面積分別為768369、760924、771283、771069、769450。①寫出理論板數(shù)與分離度的計(jì)算式，柱長為25cm，理論板高不低于多少？②計(jì)算重復(fù)進(jìn)樣的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，其值的意義是什么？2.一清顆粒中黃芩苷HPLC測定法中系統(tǒng)適用性試驗(yàn)為：用十八29答案：①n=5.54(tR/ω1/2)2,R=(tR2－tR1)/(ω1+ω2)/2,H=25/5000=0.05mm②RSD%=0.55%答案：30注射用雙黃連中黃芩苷的鑒別及HPLC測定方法要點(diǎn)注射用雙黃連中黃芩苷的鑒別及HPLC測定方法要點(diǎn)311鑒別：供試品溶液的制備：取本品用適量甲醇溶解，作為供試品溶液

對(duì)照品：黃芩苷

薄層色譜條件：聚酰胺薄層板、展開劑：醋酸、顯色劑：紫外燈下檢視。供試品色譜中，在于對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的點(diǎn)。2含量測定：色譜條件：反相C18柱、流動(dòng)相：甲醇-水-冰醋酸，檢測波長：274nm。

供試品溶液的制備：精密量取本品加甲醇使溶解，溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

對(duì)照品溶液：取黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成的溶液，即得。

測定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ1,注入液相色譜儀，測定，即得。1鑒別：供試品溶液的制備：取本品用適量甲醇溶解，作為供試品32第三節(jié)蒽醌類成分分析一、概述中藥中醌類化合物主要有苯醌、萘醌、菲醌和蒽醌四種類型。其中以蒽醌類化合物最為多見，包括蒽醌及其不同還原程度的產(chǎn)物和二聚物，如蒽酚、氧化蒽酚、蒽酮、二蒽酮、二蒽醌等。這些化合物在中藥中可游離存在，也可與糖結(jié)合成苷，稱為蒽苷。第三節(jié)蒽醌類成分分析一、概述331、萘醌類萘醌化合物從結(jié)構(gòu)上考慮可以有α(1,4)、β(1,2)及amphi(2,6)三種類型。但迄今為止從自然界得到的幾乎均為α-萘醌類。

α-（1，4）萘醌β-（1，2）萘醌amphi-(2,6)萘醌二、結(jié)構(gòu)特征及理化性質(zhì)1、萘醌類α-（1，4）萘醌β-（1，234紫草素(shikonin)和異紫草素(alkanin)

紫草素(shikonin)和異紫草素(alkanin)352、菲醌類天然菲醌衍生物包括鄰醌（A）及對(duì)醌（B）兩種類型。

（A）（B）2、菲醌類（A）36丹參酮IIA（tanshinoneIIA）

丹參酮IIA（tanshinoneIIA）

373、蒽醌類蒽醌類成分包括蒽醌衍生物及其不同還原程度的產(chǎn)物，如氧化蒽酚、蒽酚、蒽酮及蒽酮的二聚物等。蒽醌氧化蒽酚蒽酮蒽酚3、蒽醌類蒽醌氧化蒽酚蒽38（sennoside）（sennoside）39理化性質(zhì)1、溶解性苯醌及萘醌多以游離狀態(tài)存在；而蒽醌類則往往結(jié)合成苷存在于植物體中；游離的醌類多具有升華性；小分子的苯醌及萘醌類具有揮發(fā)性，能隨水蒸氣蒸餾，可據(jù)此進(jìn)行提取、精制工作。游離醌類多溶于乙醇、乙醚、苯、氯仿等有機(jī)溶劑，微溶于或不溶于水。結(jié)合成苷后極性增大，易溶于甲醇、乙醇中，在熱水中也可溶解，幾乎不溶于乙醚、苯、氯仿等非極性溶劑中。理化性質(zhì)402、酸堿性蒽醌類化合物分子中多具有酚羥基，故具有一定酸性，在堿性水溶液中易溶，但加酸酸化時(shí)又可重新沉淀析出，所謂堿提取—酸沉淀即是根據(jù)這個(gè)道理進(jìn)行的。根據(jù)以上性質(zhì)，醌類化合物的提取可采用堿提取-酸沉淀法。

2、酸堿性41黃酮類化合物--課件423、顯色反應(yīng)醌類的顏色反應(yīng)主要取決于其氧化還原性質(zhì)以及存在的酚羥基的性質(zhì)。堿性條件下的呈色反應(yīng)：羥基蒽醌類在堿性溶液中會(huì)引起顏色改變并加深。與金屬離子的反應(yīng)：在蒽醌類化合物結(jié)構(gòu)中，如果有α-酚羥基或具有鄰位二酚羥基時(shí)，則可與Pb2+、Mg2+等金屬離子形成絡(luò)合物。與Pb2+形成的絡(luò)合物在一定pH條件下能沉淀析出，故可用于該化合物的精制。與對(duì)亞硝基二甲基苯胺反應(yīng)：9位或10位未取代的羥基蒽酮類化合物，尤其是1，8-二羥基衍生物，酮基對(duì)位的亞甲基上的氫很活潑，可與對(duì)亞硝基二甲基苯胺反應(yīng)，縮合產(chǎn)生各種顏色。3、顯色反應(yīng)43黃酮類化合物--課件44三、定性鑒別1、顯色反應(yīng)將中藥制劑用適當(dāng)方法提取分離，制成供試品液，利用堿性條件下的呈色反應(yīng)或醋酸鎂顯色反應(yīng)等可對(duì)羥基蒽醌類成分進(jìn)行鑒別。三、定性鑒別452、升華法

游離的蒽醌及其他醌類衍生物多具有升華性中藥制劑中如含有這類成分量較大，可采用升華法,得到升華物可見光下觀察或加堿性試液顯色定性,如大黃流浸膏的鑒別。2、升華法游離的蒽醌及其他醌類衍生物多具有升華性46刮去糖衣，研細(xì)取濾液5ml加乙醇10ml，溫?zé)?0分鐘，濾過加鎂粉少量，與鹽酸0.5ml，加熱顯紅色紅色消褪，變?yōu)辄S色加氫氧化鈉試液顯紅色加酸成酸性時(shí)取牛黃解毒片中黃芩和大黃的鑒別刮去糖衣，研細(xì)取濾液5ml加乙醇10ml，溫?zé)?0分鐘，濾過473、薄層鑒別1）吸附劑：多用硅膠2）展開劑：A：乙酸乙酯-甲醇-水（100：16.5：13.5或相近的比例），適于他離蒽醌苷元和蒽醌苷。B：正丙醇-乙酸乙酯-水（4：4：3）和異丙醇-乙酸乙酯-水（9：9：4），適于分離番瀉苷和二蒽酮苷C：不含水或甲醇的混合溶媒適合于他離蒽醌類的苷元。3）顯色方法：主要有噴堿性試劑或醋酸鎂甲醇液、氨氣熏及在紫外燈下觀察熒光，亦可在可見光下直接觀察色斑。3、薄層鑒別48黃酮類化合物--課件49黃酮類化合物--課件50四、含量測定1、游離蒽醌的測定

中藥中含有游離蒽醌的量一般不高，且為脂溶性的，故此部分另用弱極性溶劑如乙醚、氯仿等提取后加堿比色測定。四、含量測定512、結(jié)合蒽醌的測定通常是取游離蒽醌測定項(xiàng)下的藥渣將苷提出，水解成苷元后再測定；將藥渣先行酸水解，然后用非極性溶劑提取苷元后測定取待測樣品先行酸水解，然后用非極性溶劑提取苷元后測定，其結(jié)果為總蒽醌含量，從中減去游離蒽醌含量，即得結(jié)合蒽醌的含量2、結(jié)合蒽醌的測定523、蒽醌類單體成分的測定中藥制劑中蒽醌類單體成分的測定方法主要有薄層掃描法和高效液相色譜法。3、蒽醌類單體成分的測定53薄層掃描法為蒽醌類成分常用定量分析方法，經(jīng)層析分離后，可在可見光、紫外光及熒光下掃描測定。蒽醌類成分在紫外及可見光下均有強(qiáng)吸收，利用高效液相色譜-紫外可見光檢測器測定蒽醌類單體成分，具有靈敏、準(zhǔn)確、簡便等特點(diǎn)。薄層掃描法為蒽醌類成分常用定量分析方法，經(jīng)層析分離后，可在可54黃酮類化合物--課件55黃酮類化合物--課件561.醌類化合物的理化性質(zhì)為A.無色結(jié)晶B.有色固體C.游離醌類多有升華性D.小分子苯醌、苯醌有揮發(fā)性，能隨水蒸氣蒸餾E.游離蒽醌有揮發(fā)性，能隨水蒸氣蒸餾1.醌類化合物的理化性質(zhì)為572.大黃酸對(duì)照品理化性質(zhì)描述正確的是A.易升華B.黃色針狀結(jié)晶體C.易溶于甲醇、乙醇D.幾乎不溶于水E.易溶于堿和吡啶2.大黃酸對(duì)照品理化性質(zhì)描述正確的是583.含蒽醌類化合物制劑的鑒別可用A.升華法B.氫氧化鈉溶液顯色C.薄層色譜法D.硫酸溶液顯色E.三氯化鋁溶液顯色3.含蒽醌類化合物制劑的鑒別可用594.蒽醌類化合物理化性質(zhì)描述正確的為A.多呈黃、橙、棕紅色等B.均有升華性C.羥基蒽醌類在堿性溶液中發(fā)生顏色改變D.大多在堿性水溶液中易溶，加酸重新析出E.易溶于甲醇、氯仿中4.蒽醌類化合物理化性質(zhì)描述正確的為605.專用于檢識(shí)苯醌和萘醌，蒽醌類不發(fā)生反應(yīng)的是A.無色亞甲藍(lán)B.Borntrager反應(yīng)C.醋酸鎂D.Feigel反應(yīng)E.以上均可5.專用于檢識(shí)苯醌和萘醌，蒽醌類不發(fā)生反應(yīng)的是616.制劑中總蒽醌含量測定操作正確的是A.取樣-氯仿提取-混合堿液顯色-測定B.取樣-酸水解-氯仿提取-混合堿液顯色-測定C.取樣-甲醇提取-混合堿液顯色-測定D.取樣-水提取-混合堿液顯色-測定E.取樣-甲醇提取-測定6.制劑中總蒽醌含量測定操作正確的是621.制劑中游離和結(jié)合蒽醌含量測定時(shí)常用的顯色劑為①_____或②_____。2.制劑中游離和結(jié)合蒽醌比色法含量測定時(shí)常用對(duì)照品為_____。3.對(duì)亞硝基二甲苯胺反應(yīng)可用作_____化合物的定性鑒別反應(yīng)。1.制劑中游離和結(jié)合蒽醌含量測定時(shí)常用的顯色劑為①_____63第四節(jié)三萜皂苷類成分分析

一、概述三萜是由30個(gè)碳原子組成的萜類化合物，大多數(shù)三萜化合物均可看作由6個(gè)異戊二烯單位聯(lián)結(jié)而成。

游離三萜類化合物通常多不溶于水，而與糖結(jié)合成苷后，則大多可溶于水，振搖后可生成膠體溶液，并有持久性似肥皂溶液的泡沫，故有三萜皂苷之稱。

第四節(jié)三萜皂苷類成分分析一、概述64三萜皂苷和甾體皂苷柴胡皂苷a黃芪甲苷三萜皂苷和甾體皂苷柴胡皂苷a黃芪甲苷65人參皂苷Rh2

人參皂苷Rh1

人參皂苷Rg3

人參皂苷Rg1

人參皂苷Re

人參皂苷Rh2人參皂苷Rh1人參皂苷Rg3人參皂苷Rg66酸水解產(chǎn)生，20(R)-原人參二醇或20(R)-原人參三醇，然后側(cè)鏈再發(fā)生環(huán)合

酸水解產(chǎn)生，20(R)-原人參二醇或20(R)-原人參三67黃酮類化合物--課件68二、理化性質(zhì)溶解度可溶于水，易溶于熱水、含水稀醇、熱甲醇和熱乙醇中，幾乎不溶于或難溶于乙醚、苯等極性小的有機(jī)溶劑。在含水丁醇或戊醇中溶解度較好，且又能與水分成二相，可利用此性質(zhì)從水溶液中用正丁醇或戊醇提取皂苷，借以與親水性的糖、蛋白質(zhì)等分離。三萜皂苷元能溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿等有機(jī)溶劑，而不溶于水。二、理化性質(zhì)69顯色反應(yīng)醋酐-濃硫酸反應(yīng)（Liebermann-Burchard反應(yīng)）；五氯化銻反應(yīng)(Kahlenberg反應(yīng))；三氯醋酸反應(yīng)(Rosen-Heimer反應(yīng))；冰醋酸-乙酰氯反應(yīng)(Tschugaeff反應(yīng))；氯仿-濃硫酸反應(yīng)(Salkowski反應(yīng))。顯色反應(yīng)70三、定性鑒別：理化鑒別泡沫反應(yīng)：多用于檢驗(yàn)含有皂苷的原料藥；化學(xué)顯色反應(yīng)：僅在組成藥物較少的中藥制劑中使用。薄層色譜法由于皂苷類成分大多無明顯的紫外吸收，故經(jīng)薄層色譜分離，然后選用適當(dāng)?shù)娘@色劑顯色觀察，是皂苷定性鑒別中最常用的方法。三萜皂苷類成分進(jìn)行薄層層析時(shí)通常采用硅膠為吸附劑，也有采用氧化鋁、硅藻土等為吸附劑。薄層層析后，可選用三氯醋酸、氯磺酸-醋酸、50%及10%硫酸乙醇液、三氯化銻、磷鉬酸、濃硫酸-醋酸酐、碘蒸氣等顯色劑進(jìn)行顯色，其中以不同濃度的硫酸乙醇液為最常用。三、定性鑒別：71黃酮類化合物--課件72供試液制備樣品可用甲醇提取后直接進(jìn)樣分析（如重樓）用三氯甲烷脫脂再用水飽和的正丁醇提取，提取液蒸干，殘?jiān)状既芙夂筮M(jìn)樣分析（如人參），甲醇提取，回收甲醇，殘?jiān)盟柡偷恼〈驾腿?，萃取液回收正丁醇，樣品上D101大孔吸附樹脂柱，水洗后再用不同濃度的乙醇溶液洗脫，收集含皂苷部分，回收乙醇，殘?jiān)眉状既芙膺M(jìn)樣分析（如黃芪）供試液制備樣品可用甲醇提取后直接進(jìn)樣分析（如重樓）73黃酮類化合物--課件74

復(fù)方丹參片的薄層色譜圖1，2陰性對(duì)照3，4，5，6三七對(duì)照藥材7三七皂苷對(duì)照品8人參皂苷Rb1對(duì)照品9人參皂苷Rg1對(duì)照品10，11，12，13，14供試品

75取本品5g，加等量硅藻土研勻，用7%硫酸的45%乙醇溶液．充分研磨．提取3次，每次15ml．離心．取上清液，置雛形瓶中置水浴上回流1小時(shí)．冷卻．用石油醚提取3次，每次15ml，合并提取液．加水1Oml洗液，石油醚液揮干．殘?jiān)蛹状既芙猓钩?.5ml．作為供試品溶液。取人參二醇，人參三醇對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的混合溶液．作為對(duì)照品溶液·薄

層

板：硅膠G加0．3%羧甲基纖維素鈉水溶液的自制板：展

開

劑：苯-醋酸乙酯（3：2）顯

色：噴以硫酸乙醇溶液（3-10)．在105℃加熱數(shù)分鐘至斑點(diǎn)顯色清晰后，置紫外光燈（365nm）下檢視取本品5g，加等量硅藻土研勻，用7%硫酸的45%乙醇溶液．充761-4、龜齡集5、人參二醇+人參三醇1-12、一捻金13、人參二醇+人參三醇1-4、定坤丹5、人參二醇+人參三醇1-4、龜齡集5、人參二醇+人參三醇1-12、一捻金177四、三萜皂苷類成分的定量分析中藥制劑中皂苷類成分的定量分析可分為總皂苷測定、皂苷元測定和單體皂苷測定。（一）總皂苷的含量測定

1、提取分離總皂苷的含量測定一般需要用適當(dāng)?shù)娜軇┨崛?。由于皂苷在極性溶劑中溶解度較大，因此提取溶劑可為各種濃度的甲醇（70%-95%）、乙醇、異丙醇、丁醇、戊醇。提取后經(jīng)分離得到總皂苷成分，分離可用有機(jī)溶劑，如水飽和的正丁醇萃取，也可用大孔吸附樹脂處理后溶劑洗脫。四、三萜皂苷類成分的定量分析782、測定方法重量法該方法主要用于含皂苷的原料藥質(zhì)量控制。在中藥制劑中，如處方中藥味含皂苷類成分較多時(shí)，常用正丁醇作溶劑，測定正丁醇浸出物。比色法常用三萜皂苷顯色劑有香草醛-硫酸、香草醛-高氯酸、醋酐-硫酸、高氯酸、濃硫酸以及亞甲藍(lán)等。用比色法測定中藥制劑中總皂苷或總苷元的含量時(shí)，可選用單體皂苷或皂苷元作對(duì)照品，但要注意測定單體皂苷或皂苷元與總皂苷的換算系數(shù)。2、測定方法79（二）皂苷元的含量測定皂苷元的獲得：得到總皂苷后，加酸（如硫酸、鹽酸）加熱水解，得到皂苷元；將樣品先行水解，再用有機(jī)溶劑從水解后的溶液中提取皂苷元。測定方法：主要有薄層色譜法、高效液相色譜法和比色法。（二）皂苷元的含量測定80(三)三萜皂苷類單體成分含量測定1、薄層色譜法樣品經(jīng)適當(dāng)?shù)奶崛?、純化后，用薄層色譜法分離，可排除其他組分的干擾，常用于測定中藥制劑中的皂苷元或單體皂苷，定量方法可采用薄層洗脫—比色法或薄層掃描法。2、高效液相色譜法大多數(shù)三萜皂苷類成分，如人參皂苷、三七皂苷等可利用其在紫外區(qū)的末端吸收來檢測，但靈敏度相對(duì)要低。若中藥制劑中所含三萜皂苷類成分本身具有較強(qiáng)的紫外吸收，如甘草酸、遠(yuǎn)志皂苷等，可用HPLC分離并用紫外檢測器檢測。蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD）用于高效液相色譜法檢測三萜皂苷類成分的應(yīng)用日漸廣泛。

(三)三萜皂苷類單體成分含量測定81甘草酸

甘草酸82黃酮類化合物--課件83三七皂苷R1三七皂苷R184ELSDELSD85色譜柱：ZorbaxSB-C18(250′4.6mm，5.0μm)；柱溫：25℃；流動(dòng)相：A乙腈-醋酸(95:0.5)，B0.5%醋酸；梯度洗脫：29%A(0-10min)，29-46%A(10-25min)，46%A(25-30min)；檢測器：蒸發(fā)光散射檢測器；漂移管溫度：106℃；氮?dú)饬魉伲?.6L/min色譜柱：ZorbaxSB-C18(250′4.6861.皂苷常見顯色反應(yīng)有A.鹽酸-鎂粉反應(yīng)B.中和反應(yīng)C.醋酐-濃硫酸反應(yīng)D.五氯化銻反應(yīng)E.冰醋酸-乙酰氯反應(yīng)1.皂苷常見顯色反應(yīng)有872.有關(guān)三萜皂苷單體成分定量分析描述正確的是A.人參皂苷等在紫外區(qū)有強(qiáng)吸收,HPLC-UV檢測靈敏度高B.三七皂苷等在紫外區(qū)僅有末端吸收,HPLC-UV檢測靈敏度差C.HPLC-ELSD檢測器檢測人參、三七皂苷基線穩(wěn)定、重現(xiàn)性和靈敏度較好D.遠(yuǎn)志皂苷在紫外區(qū)有強(qiáng)吸收,HPLC-UV檢測靈敏度高E.甘草皂