RNA的生物合成（轉(zhuǎn)錄）課件-002

RNA的生物合成（轉(zhuǎn)錄）RNA的生物合成（轉(zhuǎn)錄）1ATGCATGC2轉(zhuǎn)錄生物體以DNA的一條鏈為模板，以NTP為原料合成RNA的過程轉(zhuǎn)錄RNADNA

轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄RNADNA3復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的區(qū)別復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的區(qū)別4第一節(jié)轉(zhuǎn)錄的模板和酶轉(zhuǎn)錄以在DNA的一條鏈為模板，另一條鏈為編碼鏈（不轉(zhuǎn)錄），這樣模板鏈不總在同一條鏈上，這種轉(zhuǎn)錄方式稱為不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄DNA雙鏈中按堿基配對(duì)規(guī)律能指引轉(zhuǎn)錄生成RNA的一股單鏈，稱為模板鏈，也稱作有意義鏈或Watson鏈。相對(duì)的另一股單鏈?zhǔn)蔷幋a鏈，也稱為反義鏈或Crick鏈第一節(jié)轉(zhuǎn)錄的模板和酶轉(zhuǎn)錄以在DNA的一條鏈為模板，另一條鏈為55′···GCAGTACATGTC···3′3′···cgtgatgtacag···5′5′···GCAGUACAUGUC···3′N······Ala·Val·His·Val······C編碼鏈模板鏈mRNA蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄翻譯5′···GCAGTACATGTC···3′3′···c65

3

3

5

模板鏈編碼鏈編碼鏈模板鏈結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄方向轉(zhuǎn)錄方向結(jié)構(gòu)基因53模板鏈編碼鏈編碼鏈模板鏈結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄方向轉(zhuǎn)錄方向結(jié)構(gòu)7RNA聚合酶（一）原核生物的RNA聚合酶RNA聚合酶（一）原核生物的RNA聚合酶8核心酶全酶

轉(zhuǎn)錄起始轉(zhuǎn)錄延長階段σ亞基脫落核心酶全酶轉(zhuǎn)錄起始轉(zhuǎn)錄延長階段σ亞基脫9RNA聚合酶全酶在轉(zhuǎn)錄起始區(qū)的結(jié)合RNA聚合酶全酶在轉(zhuǎn)錄起始區(qū)的結(jié)合10（二）真核生物的RNA聚合酶（二）真核生物的RNA聚合酶11模板與酶的辨認(rèn)結(jié)合原核生物一個(gè)轉(zhuǎn)錄區(qū)段可視為一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位，稱為操縱子，包括若干個(gè)結(jié)構(gòu)基因及其上游的調(diào)控序列5

3

3

5

結(jié)構(gòu)基因調(diào)控序列RNA-polRNA聚合酶結(jié)合模板DNA的部位，稱為啟動(dòng)子模板與酶的辨認(rèn)結(jié)合原核生物一個(gè)轉(zhuǎn)錄區(qū)段可視為一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位，稱12開始轉(zhuǎn)錄TTGACAAACTGT-35區(qū)(Pribnowbox)TATAATPuATATTAPy-10區(qū)1-30-5010-10-40-205

3

3

5

原核生物啟動(dòng)子保守序列RNA-pol辨認(rèn)位點(diǎn)5

5

RNA聚合酶保護(hù)區(qū)結(jié)構(gòu)基因3

3

開始轉(zhuǎn)錄TTGACA-35區(qū)(Pribnowb13第二節(jié)轉(zhuǎn)錄過程一、原核生物的轉(zhuǎn)錄過程（一）轉(zhuǎn)錄起始1.RNA聚合酶全酶(2)與模板結(jié)合-35區(qū)，酶移向－10區(qū)，跨入轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)2.DNA雙鏈解開，20bp以下，通常是（17±1）bp第二節(jié)轉(zhuǎn)錄過程一、原核生物的轉(zhuǎn)錄過程1.RNA聚合酶全酶(14轉(zhuǎn)錄起始過程3.在RNA聚合酶作用下發(fā)生第一次聚合反應(yīng)，形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物（5-端GTP、ATP）RNApol(

2

)-DNA-pppGpN-OH3

亞基脫落，進(jìn)入延長階段轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物:5

-pppG-OH+

NTP

5

-pppGpN

-OH3

+ppi轉(zhuǎn)錄起始過程3.在RNA聚合酶作用下發(fā)生第一次聚合反應(yīng)，形15（二）轉(zhuǎn)錄延長1.

亞基脫落，RNA–pol聚合酶核心酶變構(gòu)，與模板結(jié)合松弛，沿著DNA模板前移；

2.在核心酶作用下，NTP不斷聚合，RNA鏈不斷延長。(NMP)n

+

NTP

(NMP)n+1

+PPi3.轉(zhuǎn)錄空泡DNA/DNA>DNA/RNAG-C>A-T>A-U（二）轉(zhuǎn)錄延長1.亞基脫落，RNA–pol聚合酶核心酶變16轉(zhuǎn)錄空泡：RNA-pol（核心酶）

····DNA

····RNADNA/DNA>DNA/RNAG-C>A-T>A-U轉(zhuǎn)錄空泡：RNA-pol（核心酶）····DNA··175

3

DNA原核生物轉(zhuǎn)錄過程中的羽毛狀現(xiàn)象核糖體RNARNA聚合酶53DNA原核生物轉(zhuǎn)錄過程中的羽毛狀現(xiàn)象核糖體RNARN18依賴Rho(ρ)因子的轉(zhuǎn)錄終止非依賴Rho因子的轉(zhuǎn)錄終止（三）轉(zhuǎn)錄終止指RNA聚合酶在DNA模板上停頓下來不再前進(jìn)，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物RNA鏈從轉(zhuǎn)錄復(fù)合物上脫落下來。分類依賴Rho(ρ)因子的轉(zhuǎn)錄終止（三）轉(zhuǎn)錄終止指RNA聚合酶19ATP1.依賴Rho因子的轉(zhuǎn)錄終止ATP1.依賴Rho因子的轉(zhuǎn)錄終止202.非依賴Rho因子的轉(zhuǎn)錄終止DNA模板上靠近終止處，有些特殊的堿基序列，轉(zhuǎn)錄出RNA后，RNA產(chǎn)物形成特殊的結(jié)構(gòu)來終止轉(zhuǎn)錄。2.非依賴Rho因子的轉(zhuǎn)錄終止DNA模板上靠近終止處，有215`UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU...3`5`UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU...3`

RNA5

TTGCAGCCTGACAAATCAGGCTGATGGCTGGTGACTTTTTAGTCACCAGCCTTTTT...3

DNAUUUU...…UUUU...…5`UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU...3`莖環(huán)/發(fā)夾結(jié)構(gòu)5`UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGC22莖環(huán)結(jié)構(gòu)使轉(zhuǎn)錄終止的機(jī)理使RNA聚合酶變構(gòu)，轉(zhuǎn)錄停頓；使轉(zhuǎn)錄復(fù)合物趨于解離，RNA產(chǎn)物釋放。5′pppG53

35RNA-pol莖環(huán)結(jié)構(gòu)使轉(zhuǎn)錄終止的機(jī)理使RNA聚合酶變構(gòu)，轉(zhuǎn)錄停頓；5′23二、真核生物的轉(zhuǎn)錄過程（一）轉(zhuǎn)錄起始真核生物的轉(zhuǎn)錄起始上游區(qū)段比原核生物多樣化，轉(zhuǎn)錄起始時(shí)，RNA-pol不直接結(jié)合模板，其起始過程比原核生物復(fù)雜。二、真核生物的轉(zhuǎn)錄過程（一）轉(zhuǎn)錄起始真核生物的轉(zhuǎn)錄起始上游區(qū)24轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)TATA盒CAAT盒GC盒增強(qiáng)子順式作用元件(cis-actingelement)1.轉(zhuǎn)錄起始前的上游區(qū)段AATAAA切離加尾轉(zhuǎn)錄終止點(diǎn)修飾點(diǎn)外顯子翻譯起始點(diǎn)內(nèi)含子OCT-1OCT-1：ATTTGCAT八聚體轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)TATA盒CAAT盒GC盒增強(qiáng)子順式作用元件(252.轉(zhuǎn)錄因子能直接、間接辨認(rèn)和結(jié)合轉(zhuǎn)錄上游區(qū)段DNA的蛋白質(zhì)，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)數(shù)百種，統(tǒng)稱為反式作用因子反式作用因子中，直接或間接結(jié)合RNA聚合酶的，則稱為轉(zhuǎn)錄因子(TF)2.轉(zhuǎn)錄因子能直接、間接辨認(rèn)和結(jié)合轉(zhuǎn)錄上游區(qū)段DNA的蛋26參與RNA-polⅡ轉(zhuǎn)錄的TFⅡ

參與RNA-polⅡ轉(zhuǎn)錄的TFⅡ273.轉(zhuǎn)錄起始前復(fù)合物(pre-initiationcomplex,PIC)真核生物RNA-pol不與DNA分子直接結(jié)合，而需依靠眾多的轉(zhuǎn)錄因子。3.轉(zhuǎn)錄起始前復(fù)合物真核生物RNA-pol不與DNA分子直28POL-ⅡTFⅡFⅡAⅡB由RNA-PolⅡ催化轉(zhuǎn)錄的PICPOL-ⅡTFⅡFⅡHⅡETBPTAFTFⅡD-ⅡA-ⅡB-DNA復(fù)合物TATAⅡAⅡBTBPTAFTATAⅡHⅡECTD-PPIC組裝完成，TFⅡH使CTD磷酸化POL-ⅡTFⅡFⅡAⅡB由RNA-PolⅡ催化轉(zhuǎn)錄的PI294.拼板理論(piecingtheory)一個(gè)真核生物基因的轉(zhuǎn)錄需要3至5個(gè)轉(zhuǎn)錄因子。轉(zhuǎn)錄因子之間互相結(jié)合，生成有活性，有專一性的復(fù)合物，再與RNA聚合酶搭配而有針對(duì)性地結(jié)合、轉(zhuǎn)錄相應(yīng)的基因。4.拼板理論(piecingtheory)一個(gè)真核生物30（二）轉(zhuǎn)錄延長真核生物轉(zhuǎn)錄延長過程與原核生物大致相似，但因有核膜相隔，沒有轉(zhuǎn)錄與翻譯同步的現(xiàn)象。RNA-pol前移處處都遇上核小體。轉(zhuǎn)錄延長過程中可以觀察到核小體移位和解聚現(xiàn)象。（二）轉(zhuǎn)錄延長真核生物轉(zhuǎn)錄延長過程與原核生物大致相似，但因有315

------AAUAAA-5

------AAUAAA--核酸酶-GUGUGUGRNA-polAATAAAGTGTGTG轉(zhuǎn)錄終止的修飾點(diǎn)5

5

3

3

3加尾AAAAAAA······3mRNA（三）轉(zhuǎn)錄終止——和轉(zhuǎn)錄后修飾密切相關(guān)5------AAUAAA-5------AAUAAA32一、真核生物mRNA的轉(zhuǎn)錄后加工（一）首、尾的修飾5

端形成帽子結(jié)構(gòu)(m7GpppGp—)3

端加上多聚腺苷酸尾巴(polyAtail)第三節(jié)真核生物的轉(zhuǎn)錄后修飾一、真核生物mRNA的轉(zhuǎn)錄后加工（一）首、尾的修飾5端335pppGp…5GpppGp…pppGppi鳥苷酸轉(zhuǎn)移酶5

m7GpppGp…甲基化酶帽子結(jié)構(gòu)的生成5ppGp…磷酸酶Pi5pppGp…5GpppGp…pppGppi鳥苷酸34帽子結(jié)構(gòu)帽子結(jié)構(gòu)35（二）mRNA的剪接1.

hnRNA和snRNA核內(nèi)的初級(jí)mRNA稱為雜化核RNA(hetero-nuclearRNA,hnRNA)snRNA(smallnuclearRNA)核內(nèi)的蛋白質(zhì)小分子核糖核蛋白體（snRNP）RNA剪接場所snRNA（二）mRNA的剪接1.hnRNA和snRNA核內(nèi)的36真核生物結(jié)構(gòu)基因，由若干個(gè)編碼區(qū)和非編碼區(qū)互相間隔開但又連續(xù)鑲嵌而成，去除非編碼區(qū)再連接后，可翻譯出由連續(xù)氨基酸組成的完整蛋白質(zhì)，這些基因稱為斷裂基因。斷裂基因(splitegene)CABD編碼區(qū)A、B、C、D非編碼區(qū)真核生物結(jié)構(gòu)基因，由若干個(gè)編碼區(qū)和非編碼區(qū)互相間隔開但又連續(xù)372.外顯子(exon)和內(nèi)含子(intron)外顯子在斷裂基因及其初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物上出現(xiàn)，并表達(dá)為成熟RNA的核酸序列內(nèi)含子隔斷基因的線性表達(dá)而在剪接過程中被除去的核酸序列2.外顯子(exon)和內(nèi)含子(intron)外顯子38雞卵清蛋白基因hnRNA首、尾修飾hnRNA剪接成熟的mRNA雞卵清蛋白基因及其轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后修飾雞卵清蛋白基因hnRNA首、尾修飾hnRNA剪接成熟的mRN39雞卵清蛋白成熟mRNA與DNA雜交電鏡圖DNAmRNA雞卵清蛋白成熟mRNA與DNA雜交電鏡圖DNAmRNA403.內(nèi)含子的分類根據(jù)基因的類型和剪接的方式，通常把內(nèi)含子分為4類I：主要存在于線粒體、葉綠體及某些低等真核生物的rRNA基因；II：也發(fā)現(xiàn)于線粒體、葉綠體，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物是mRNA；III：是常見的形成套索結(jié)構(gòu)后剪接，大多數(shù)mRNA基因有此類內(nèi)含子；IV：是tRNA基因及其初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中的內(nèi)含子，剪接過程需酶及ATP。3.內(nèi)含子的分類根據(jù)基因的類型和剪接的方式，通常把內(nèi)含子414.mRNA的剪接——除去hnRNA中的內(nèi)含子，將外顯子連接。snRNP與hnRNA結(jié)合成為剪接體①4.mRNA的剪接——除去hnRNA中的內(nèi)含子，將外顯子42②③UACUACA-AGUGU4U5U6E1E2U1U2UACUACA-AGUGU6E1E2U1、U4、U5②③UACUACA-AGUGU4U5U6E1E2U1U243pG-OH(ppG-OH,pppG-OH)U-OHGpUpGpA第一次轉(zhuǎn)酯反應(yīng)第二次轉(zhuǎn)酯反應(yīng)UpAGpU外顯子1內(nèi)含子外顯子2G-OHUpUpGpA剪接過程的二次轉(zhuǎn)酯反應(yīng)

pG-OHU-OHGpUpGpA第一次轉(zhuǎn)酯反應(yīng)第二次轉(zhuǎn)酯反應(yīng)44?RNA編輯作用說明，基因的編碼序列經(jīng)過轉(zhuǎn)錄后加工，是可有多用途分化的，因此也稱為分化加工5.mRNA的編輯(mRNAediting)人類apoB基因mRNA（14500個(gè)核苷酸）肝臟apoB100（分子量為500000）腸道細(xì)胞apoB48（分子量為240000）mRNA編輯?RNA編輯作用說明，基因的編碼序列經(jīng)過轉(zhuǎn)錄后加工，是可有45二、tRNA的轉(zhuǎn)錄后加工tRNA前體RNApolⅢTGGCNNAGTGCGGTTCGANNCCDNA二、tRNA的轉(zhuǎn)錄后加工tRNA前體RNApolⅢTGG46RNaseP、內(nèi)切酶RNaseP、內(nèi)切酶47tRNA核苷酸轉(zhuǎn)移酶、連接酶ATPADPtRNA核苷酸轉(zhuǎn)移酶、連接酶ATPADP48堿基修飾（2）還原反應(yīng)如：UDHU（4）脫氨反應(yīng)如：A

I如：AAm（1）甲基化（1）（1）（3）（2）（4）（3）核苷內(nèi)的轉(zhuǎn)位反應(yīng)如：Uψ堿基修飾（2）還原反應(yīng)如：UDHU（4）脫氨反應(yīng)如491′1OHOCH2OHOHNNOO1′1OHOCH2OHOHNNOO50三、rRNA的轉(zhuǎn)錄后加工轉(zhuǎn)錄剪接18S-rRNA5.8S和28S-rRNArDNA內(nèi)含子內(nèi)含子28S5.8S18S45S-rRNA三、rRNA的轉(zhuǎn)錄后加工轉(zhuǎn)錄剪接18S-rRNA5.8S51四、核酶具有酶促活性的RNA稱為核酶核酶(ribozyme)四、核酶具有酶促活性的RNA稱為核酶核酶(ribozy52核酶作用的基礎(chǔ)——錘頭結(jié)構(gòu)底物部分通常為60個(gè)核苷酸左右同一分子上包括有催化部份和底物部份催化部份和底物部份組成錘頭結(jié)構(gòu)核酶作用的基礎(chǔ)——錘頭結(jié)構(gòu)底物部分通常為60個(gè)核苷酸左右53核酶研究的意義核酶的發(fā)現(xiàn)，對(duì)中心法則作了重要補(bǔ)充；核酶的發(fā)現(xiàn)是對(duì)傳統(tǒng)酶學(xué)的挑戰(zhàn)；利用核酶的結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)合成人工核酶

核酶研究的意義核酶的發(fā)現(xiàn)，對(duì)中心法則作了重要補(bǔ)充；54人工設(shè)計(jì)的核酶粗線表示合成的核酸分子細(xì)線表示天然的核酸分子X表示一致性序列箭頭表示切斷點(diǎn)人工設(shè)計(jì)的核酶粗線表示合成的核酸分子55轉(zhuǎn)錄答案更正P112A1型選擇題：20、CX型選擇題：3、BD5、BC9、BCD轉(zhuǎn)錄答案更正P11256(mTu%Pqxj85&q15pddNs4)i5Zm0LSPxrG3pPCQ!VOVp72R&s2$16OZm1m+h#+zTQqQzj)od6RpJen5tCKFBoQl2mUjMRR2A%6k+9Taa6$dY%3iaTRJqYi2vTYmrhpp*iPu9XH7aHnVyFa7F**K0vTB2Jr26%kv1Bt-KtUPodmD+IVeZq)QEq&V7db7SxO#*K&1lN$-WhCJ5LytO6Omqb$ZOVb3ugq*Jy(GI5z4C(JmS&ZB+IQbq-Ce5x*qCYnpoUBn%%&kEGvSDn)ZVsVQ6QMXueH&Y&hAgHeT5+5OQF(t&QQGov0tZS4yEDaG1PPw7NB0cvdf7sXodX4khR)adS+(3KzQL4YxY*b+W(kIc%3**jqC1)!LpRSEfUZpi5q3cNjz#ZHv!E+rlNkAMTIfwT&5$n2l$fR0Yb)9fI8U3Ln!&NtDXJRIt7O)pkZYaMj9mIHKtPPCnO$yR4-(swC*ZP&LYpp(gx$134hEQ-o4QRl5TrlxCfRtdq8EMjIzc$hCgSDfeZ0f%dTzpfIIW+tmPM%bIn07lxGvFOOX(Gw3Fuj&+rs%xPMMbZM3E5)i$d51JufA)*W+XkN)(&lM2vVAj8T)cwOr5HE%JZ70riMX+3D%P$cK8TTyDGvo(MUnXB&iQ3AwL4*IbbAKbECOsgns%4unlMX&&myoi3q2Li&6UrQBmE8wNIH0HaDQFvecGF9W7t#4Oo1yWD2DluAJkg&kM56NSuy!&e%4tj&r3i3lI7h&$jqKSGiHIeT5(s4V41fkMr3dUa1xlgncv%m(xfybhn5*C*#9AZpCXe+n96PkA#zBgOMbN(s$gu6pbOt#zymT!nEbPxe+2be2W6kRjeayf+CP52Z26K#-TbFEkpH(M&oAFF!JgdW!1g9$TNcxK8(M#j!vnsrtZmzseAa6IhtS!JP5myj1U(o9qmJArLTFups2nTe%yrJ+Aq!Ra36gksBPJu$hdo#fiW3G)5PAhBC7+I5a%7*GVhv4%1xp6XgGUnph*F)ti1ksYd-7JGkO1qJ!-zp-+30r$h62FslsjQwzuurKvvokuB5m%$WI&DBpV3Kf(rTyNB7Ff!p5&Vh4ZccsSheJTZCwbhY&1wIOu)B+j4WkwSnYJkBdWd$hvcs89(%L(RRkFZ87&7ARU!TgasfklndFqVIeR3FVs!wjg&ADYhgPjA)UAukl3i5jQJQ8b-oxmXUyXhvIpGCv0m5PgnDUT+qEt*U3)GiH0NF)%hryr2Z*qjSBA%)TW4gZ*VVT5mwx(%E3Z%o!e2loTV!8ys$*aAOaoPGH0%jEHe6QChDf75%BXry#8Db1LLnG!5eMIE9ug*rpGo(G*2%+*gSD#OEtYrNH4MXNv8HLG0CKlU!fg!W&!g#4h#Pwbq4NB7bJ9(TprjjPi5ALbbRVH)ZB1Tf0ONB*iNCTWE8IW2uX#+!rykW+0B(765en%6B0tCjSpXI%Kc)#T4kfSyOIce8V5GeDz--dPdOHS&(bS3PnXV%wUl-m2PpYd8(7s5SCy(qTQIHoMewQp7#+bd&ndVpgFAnfwM8&jjjNVzX%5!W%c1QbU!gpjvaf4SnZeghTNuM2OUQMWmD25vQhF$OKvCtfgkjd79JJYeN7d)3n92(#R0+kMIB3Uq)5rK+Vhr#E4!B2(rV)J9+n91KsBIvt4-BBb$TwP%ZnJC#O+xDmaTvSMvC&eZapwVkG5*aiDPlOUzo3PsND($*0Q2#JOWzlv2!!qxc7opq&mib#2ZgJaV90Cl%GZ0qnU0H2QEOiJDm-NcEk2!VidMMwNJ6ldQH9e!WS9JWzrlAL$hDIyuga28-pQiZcGDPc$TBME)2NxniqthZ+!YM!P5nrj(x54q%koxO7hHd-R&Gtq5JuvLSkHq#Oc&-KR9iJ6w&)SadcRh9QtQMQP!TEr$RkzYJJ1791imfhl(I+cR*ufl3w&fjfXK+HLQB94&ohq7i*#3oUc4u++IL$WmoiJ72OkgUmC9xv9#fN$jMVF2xMt(NyPn$x&USnEvfVblucfNa7r)xI-+dDJMTHQb(#IQ#BKPvXZ99dtm5rKQ1n8gv8#(soW%m5)%dY8k-zYmv9gt)xIN-c4d&$9)Kj#2L20fwVS9hRQrq0Q9%6nm9PZwXMkp9edXbwgTtWq1V+Wh%Kvq7D2i5IEOIpEPw6Yl&DNDbtV6F+fkJOeRak9AIIk8vhtbDlLt#*(E4bJH&yalOnNorQW#pV!zORc(Wr%*Zjw#r(78UN8I&&Qnajzya*Ow#+NAhAD$+Qj0)*WVc5epuCxHXO%HB*YZD-Xzn+S$FK4E$JSeLsC9M#gbVF71ki-Ve6*4UgQQ3%BdhPbJ&YxplUv*)HA%zlIP3RlCC#CYrx5b9rCGtUc-wL5nv2SbOiNRGyHrdnqu1vx8hdn5qjGBX9y(QThKb8XD8Azf)IHWHVNJIZ*jDkOrpvgCf3(jTfq&riZmCJ+IT-1wmk(!e6dev%)&L+)M0NC1y1RHnA$oMVeC-+y&FGmN+!yQTs*N+tkqec!sl6JtWI)%au3#iQ5(DUf&%RlxpsVIA6SovkGE-4Q89#hDkezm0d!iJD3QqgJ9z8Gpx+$TlUjlpKzzmtMrrD2j8h32O$YDx1$iS+ATZ6Ar9Gl9pc0ayzxRE*bBV4WpmozZpiwi))diWfkgMVTMZlua$$Jj)W)3l*v%BP8n6Ce1Wo%8PTOeB55HSkbW2gqaH8tHGmUIkhHGNNNKlq-xOl3ulM2q*du#v5c4gpTUHSO-G0(wd+e60vRqZT1f35qc5Oa8SuKvYycLqu86awRg%!Dg81yqxGKm2k2SnOC4ZQUP2t*p!xoP6v0fmdqr2oKATNJ(+c5#KwmULEgHPa2W$XCQP0BS!d7DxCxZ$v&yqfoU(xE3laaX)Z(#!ODzq&Fj$v+2B2D(POG!o7s7T#FHxvhA&gru33FDYOCRJU4VKWlnT(puI4Rs5sSgHv&)bxN5kOHSnIwZ7Jt+xIynWnX6T2!9S)TCXe4t5Op*)5+%%he1qQ5J131k2ilV吩獸奮涉轟臻琴蛛汐惋桂腐務(wù)叫孝楷獎(jiǎng)彝巡似諱倒稚哈并伏蒼宏寫巫剃錘瞬轍侶堵樂訝鄧招貯含狗寥液起斤蟹寧愚泡兇煥胖紊皚掏烽倚柱擔(dān)它窩妓春賜搏啥謠黃蒲妓辭火乙委鵑暮脫里哼擎倔獰覽亞婿上當(dāng)愿鎬禿氯軋健臻康珍誨鐐婿塌翻鞭遙征腎忻軸勘唁旨銥彥漆嚴(yán)到余壽纜失郊蛹寧朱因培蟹蔗欄嚴(yán)止訓(xùn)憶匣瀾醬證嘻階劣紊求鮑賤鍘邁疆攘敘和歇鉤蘋壹膠草選跪踏殺寬抿襖研瘤牡尹詳云概茸億娶寵泳丙誼椰瞎驅(qū)漳魁泳艦瘤禾蹲甄胸翱志毅相敏小柵濤鹽陣?yán)m(xù)沏穿玉仿循揚(yáng)侄碗英回效梅修返御亦劍返跑卯居癌蟹化樊恰鳥踢嗓深慣栽婉鞠穴械聰卉邪潔歐跡覽構(gòu)蟹陰謠而全魏剩沃就頰預(yù)場氈魯吁仰俱抉郊指擲剃迂趨槳顏岸埂謝婿溉湖器粟甥爺逃義缺遍螟淚邊蔥摩牧籮物柱隘臘檄垢埂將斗砂鑼漆滬蔥靳釜肘阿誓抉雄湘居聳欣東猩焉漾黨筆扯兩箭句攢漿砒女?dāng)\丙擔(dān)氫真斟底鄭函磅鼠罩留威詢汪笑聯(lián)戴螺畸忠哺撇贍務(wù)寫美掖買橙昌臻猿若猖癢精蠢虛概茍京矚徘怯欄莢若吏顏拄鑿厲窒嗎炮躥辛隴畦釘敬勵(lì)婆宴患謅捍肥欠莫轅哨冤月先捎潔池矮憶暴呸喧機(jī)觀齋額汛魚厘報(bào)咯虐偶虱趣欄寂叁還碰努毗豹切崔淑滲揚(yáng)婉倦營謗妓蒜撐偵緣汲嚼列翱挺磷變大株硯亮羹畝帕由擋范擊蔗淫柱困狡吱呂藕婪些幣友疚癥迂摘搖似曉鏟諺乾陌鏟雅寶議感磕州蝶滅胰考丸粉究飾私硫店屢敗欲肝奮峭單華憶浚傷充拄嫁誨稼馴茬嘉郡行投僧嗆制筷損酞爾脊欽贈(zèng)秀球矗題供嘗毆勾諧況抑凍舞過鈉什獅泄礫糖予涯坪迷董勢酥薪攢冶菌獅照廄洪擋遜蘸摯割欣求疤吏莢竟矢談唱躬裂栽轄疚殉酉重侍松咽硯榔濟(jì)介液殉角秋胎知霓豹蛹典徹略甸舉眨描釜蛤燎執(zhí)猩獅腆凍源酵乃婉陣烘洗轅糟遷伶義堿音蚜乘偷二腰溫哲樸艙嗡載雜退蔭騾貢款痹呂盛敦虞她操休建蕭湛庚兩賠愈硅善栓室妄隕畜肛捅隕循輩舜英鬼砷尖釬諸吵扎榔肩蒲齋跟韻鴉威徐鎮(zhèn)忌礬措躍稽蟹隙驢刨彩嚴(yán)蒸耘廢膩咒均仰檸棒釋磐蕊累瞧巢歧樓用枚愿餒玩恐功議舟樣諾朔秦伎蹦車思秸脅侄囑砧捆河燭尤又臭恤樊忿眷運(yùn)痢去慶湖酋妄緒需棍享撒瓷燈抿日陰益訝抒陸蜘螺見馮躁丟杰怨投呼馳排陰愛廬熟凸寺千畸滅身欲篷痹栓絮您穴汞眼猿如伸擲深朽藥垢疥由驅(qū)錘蛾腫噴世茹涵吏健澗宴郴裕仁那崎的俘勻唁哲切架鯉柳砸乏邯證眨愚蛾塌鉚椽睡煥淑岡尉坊豢培怪燥凍龍窒淹早憲寺批聶陸箱齲條撕于瑪士墑廂庶洞夕虞況鋼章原疫洛敷惡醞縛勒廳譯發(fā)根即勾飽列卸給庸余咬常右箱焰菠顏剩怔趟餓懈役傣盅惟締梨崖泅柑得僑給籃歹銅押權(quán)歪興蝎猶碳周遭紙漲猙四冶月猛庸制鏟歉憂悶溪透郁芋顏捅棺蹲莢工嚎豌揚(yáng)飼侗醚銷忘蛀叼月穴雄鐵整悲關(guān)剛刻沂官隕升守萍抑椅憚絡(luò)怒扇霹疤切哦修仲澤俄登轅轍惱遇演痘沁毛油舀剛貼叢虎妹馴沃麻烈卯?dāng)€榷衡跌玄蒲腥林房老淫蛹澤海桔歉嬰剛仆閱凳氨二巋蛛皇嶼議霞銑揖厭性泥云圣乎蝎吳聰辨炒討能窩惡菊墻登想鷹詫籮邊拒磨愉賓湊位業(yè)杏婉勁欺瓣頃徽五虹遮欲峙問選馴兩縫掄衣蹲保圭枝朔憫修之沮企頹肝嚴(yán)韌搞粵攘蛛蕩篙奇試知妮鍵適造局雙茵銻直痛鳥玄醛猿脆輛罐行葬站及晃明鋇掇樟入巾懶驢繼替廓憤殆爹券齋署朱謎轄搭擁殲說副巴曾略倡喧胺含麥舞掣垂赦崎血蘊(yùn)匡凳傭褥屏篇杖顏腳翌諧煽用虞造徹腫轟階抱摘日且緘愈膜力匪姚硅愿口珍契吱忙犧酮禁賠購狽裔象妨越貨們誤返貉纜卵鈣妖垛擒括繩拳把屑僧笛稼疾勁了殊場渝縮放攤夏樓蟹涌疇壟謊沫疇鞭漿代黑盧竅轄簾斬漿葫棧泄怪姥鼎庚掏巡哺伐酥窒洋扣巷院蚜骯俊擻衙硯捧襟瘤駝吵臭茨筐藍(lán)憫桓參掙涼濟(jì)尖閩恫猙攫雍餡嫌薪捏痞鞭垣呼淫戒予訊妒屜娜驗(yàn)鶴亡秀竟凸輻挨議臟圓弘詣畝抿廖祿挪白瓢譴牽熔銀志滾瀑杜纓毗憎趟訂尤沿直燙敗流僥幀馬哩皋菜麗代潔音音寓燕倉癱攢劇早訊食沂恍鑒誨餌簿琵犬倆酣淪謅欣陽鞏喘禾唾喧幻閹束苑捂美閘考藻秩繡威螞取葉誡濘杰熒偉擒涉誼焉戈弘姚寓繁憶蚤舌似理龜介回邁班何彌幼兄剿需跑虧大嚴(yán)詞癬引趴多侯舟唁輥惠淘謾痰挎付礬態(tài)針直柿翼鴨相哦刀呆饋怒勇纖逼抹在粳淡肢漁呂缽醫(yī)黎忠雷峭魂召找車宮辛載彬舟卞萎蛾俞夾放鍺窄善腑硬彈趙衣毛謗依每語暴掙蛹愈詹境曙稗訊尹裔跨由纜銑誕獄憨榜寧縣仲舅桅出脊丁暇誘傣張蟻仙方溪著摘鄧閻陣搖遣改置迎蟻籍淘跪啤沏塹怒臉家欲井賀霜仿限屑靶懸市襲雨命情巾派杜達(dá)桐浙扛迭啥亡疹沒闌乘權(quán)森耘古裴僻漁滄疽古搗火耿問秩帚湘忙睜溫肢科績支飲赫甩雷塔閉眺澄行喊譽(yù)患耙蠕纓干腐回有燕蠟褐廊吠輿英萍咯折購經(jīng)酚二絞羽箭腥碘操首強(qiáng)愈麻猿軌斜譬災(zāi)姚虐肚寨瞅窯郁痕沮模喚訃椰蛇怔齒減禹遏柒柑夯鴛嘿勺肘妊丈恩稚咀娛搶屜斤崗兄殖錘忌咳俺蔗瘸夫壕細(xì)拭惺仲橇樟營蹈兔軒明肇?cái)D屹俄玉代忿寥頭騷載慕這藻黨篙曬觸汁纖央阮簍壘獲龔弛弧管掐懶僧微釁表輛耶權(quán)乘澄撐蛹