細(xì)胞工程題型

名詞解釋：細(xì)胞工程(cellengineering):是應(yīng)用生命科學(xué)理論，借助工程學(xué)原理與技術(shù)，有目的地利用或改造生物遺傳性狀，以獲得特定的細(xì)胞、組織產(chǎn)品或新型物種的一門綜合性科學(xué)技術(shù)。細(xì)胞全能性(totipotency)：是指分化細(xì)胞保留著全部的核基因組，具有生物個體生長、發(fā)育所需要的全部遺傳信息，具有發(fā)育成完整個體的潛能。細(xì)胞分化(differentiation)：是指細(xì)胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能上發(fā)生差異的過程，包括時間上和空間上的分化。植物組織培養(yǎng)(planttissueculture):是指將植物組織在適當(dāng)培養(yǎng)條件下誘導(dǎo)長成完整植株的技術(shù)。毛狀根(hairyroot)：又名發(fā)狀根，是植株或組織、器官受到發(fā)根農(nóng)桿菌感染后形成的類似頭發(fā)一樣的根組織。人工種子(artificialseed)：是指將植物離體培養(yǎng)的胚狀體或芽包裹在含有養(yǎng)分和保護(hù)功能的人工胚乳和人工種皮中的類似種子的顆粒。植物脫毒：是利用物理、化學(xué)或生物學(xué)方法脫除植物所感染的病毒，在無菌條件下培養(yǎng)不帶病毒的植株，進(jìn)行快速繁育無病毒種苗的技術(shù)。植物細(xì)胞培養(yǎng)(plantcellculture):是在離體條件下，將分離的植物細(xì)胞通過繼代培養(yǎng)增殖獲得大量細(xì)胞群體的一種技術(shù)。細(xì)胞系：是以一種細(xì)胞為主的、能在體外長期生存的不均一的細(xì)胞群體。細(xì)胞株：指從一個經(jīng)過生物學(xué)鑒定的細(xì)胞系用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。原生質(zhì)體(protoplast):是去除細(xì)胞壁后裸露的球形細(xì)胞。細(xì)胞融合(cellfusion):是指使用人工方法使兩個或兩個以上的細(xì)胞合并形成一個細(xì)胞的過程。體細(xì)胞雜交(somaticcellhybridization):指將不同來源的體細(xì)胞融合并使之分化再生、形成新品種的技術(shù)。多倍體(polyploid):是指體細(xì)胞中含有超過正常染色體組數(shù)的個體。單倍體(haploid):是細(xì)胞中含有正常體細(xì)胞一半染色體數(shù)的個體，即具有配子染色體組的個體。植物離體受精(plantinvitrofertilization):是指在體外無菌條件下培養(yǎng)未受精的子房、胚珠和花粉，使花粉萌發(fā)進(jìn)入胚珠完成受精的技術(shù)。轉(zhuǎn)基因植物(transgenicplant):是指將外源基因轉(zhuǎn)入到植物的細(xì)胞或組織中獲得的具有新的遺傳性狀的植物。動物細(xì)胞培養(yǎng)(animalcellculture):是模擬動物體內(nèi)的生理環(huán)境使細(xì)胞分裂增殖的一種技術(shù)。原代培養(yǎng)(primaryculture):在首次傳代前的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。培養(yǎng)的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞。傳代培養(yǎng)(passageculture):是指將原代培養(yǎng)的細(xì)胞繼續(xù)轉(zhuǎn)接培養(yǎng)的過程。(細(xì)胞的體外大量增殖)。雜交瘤技術(shù)(hydridomatechnique):將骨髓瘤細(xì)胞與免疫的動物脾細(xì)胞融合得到既能夠分泌抗體又能在體外長期繁殖的雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)過克隆化培養(yǎng)得到可以分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，這種技術(shù)通稱為雜交瘤技術(shù)。單克隆抗體(monoclonalantibody，McAb):經(jīng)過免疫的哺乳類動物單一的B淋巴細(xì)胞可以分泌單一性抗體，這種具有特異性的、同質(zhì)性的抗體稱為單克隆抗體。體外受精(invitrofertilization,IVF):是指將哺乳動物的精子和卵子在體外人工控制的環(huán)境中完成受精過程的技術(shù)。體外受精動物也稱試管動物，是指將供體的精子和卵子在體外受精，體外培養(yǎng)胚胎發(fā)育到一定階段通過胚胎移植移入受體完成發(fā)育出生的動物。細(xì)胞核移植(cellnucleartransfer):是利用顯微操作技術(shù)將一種動物的細(xì)胞核移入同種或異種動物的去核成熟卵細(xì)胞內(nèi)的技術(shù)。細(xì)胞核移植動物又稱為克隆動物，是用特定發(fā)育階段的核供體及相應(yīng)的核受體(去核的成熟卵細(xì)胞)體外構(gòu)建重組胚，通過胚胎移植到受體完成發(fā)育出生的動物。轉(zhuǎn)基因動物(transgenicanimal):是指基因組內(nèi)穩(wěn)定地整合外源基因，并且外源基因可以穩(wěn)定地遺傳給后代的基因工程動物。干細(xì)胞(stemcell,SC):是一類具有自我更新和分化潛能的細(xì)胞。(可通過對稱分裂、不對稱分裂兩種形式進(jìn)行；根據(jù)分化能力強(qiáng)弱分為單能干細(xì)胞、多能干細(xì)胞、全能干細(xì)胞。)胚胎干細(xì)胞(embryonicstemcell):是從著床前胚胎內(nèi)細(xì)胞團(tuán)或原始生殖細(xì)胞經(jīng)體外分化抑制培養(yǎng)分離的一-種全能性細(xì)胞。(是全能干細(xì)胞)成體干細(xì)胞(adultstemcell,ASC):是成體組織內(nèi)具有更新和進(jìn)一步分化潛能的細(xì)胞。組織工程(tissueengineering):是利用生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)、工程學(xué)原理與技術(shù)，單獨(dú)或組合地利用細(xì)胞、生物材料、細(xì)胞因子實(shí)現(xiàn)組織修復(fù)或器官再生的一門技術(shù)。填空：植物組織培養(yǎng)再生植株的途徑：①器官發(fā)生途徑；②體細(xì)胞胚發(fā)生途徑。器官發(fā)生的三種方式：①先發(fā)芽后生根；②先生根后發(fā)芽；③同時生根發(fā)芽。（器官發(fā)生途徑）由外植體或單個細(xì)胞經(jīng)愈傷組織再生植株一般要經(jīng)過①啟動期、②愈傷組織誘導(dǎo)與繼代培養(yǎng)、③擬分生組織的形成、④器官原基和器官的形成。體細(xì)胞胚的發(fā)生實(shí)質(zhì)是細(xì)胞再分化，途徑有：①器官外植體直接發(fā)生途徑；②懸浮培養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生途徑；③愈傷組織發(fā)生途徑；④單細(xì)胞發(fā)生途徑；⑤原生質(zhì)體發(fā)生途徑。人工種子制作步驟：①胚狀體同步發(fā)育；②人工種皮制作；③人工胚乳配制；④包埋。植物單細(xì)胞分離方法：①酶解法；②愈傷組織誘導(dǎo)法。植物單細(xì)胞小規(guī)模培養(yǎng)：①看護(hù)培養(yǎng)（活躍生長的愈傷組織）；②飼養(yǎng)層培養(yǎng)（無活性或分裂很慢的細(xì)胞）；③液體淺層靜置培養(yǎng)；④細(xì)胞同步化培養(yǎng)。原生質(zhì)體分離純化方法：①酶解法（取材消毒、酶解制備、原生質(zhì)體收集）②原生質(zhì)體純化（具體：過濾-離心法、漂浮法、沉降法和漂浮法結(jié)合）。從融合效果上，細(xì)胞融合包括：①對稱融合（兩個完整細(xì)胞間的融合）②不對稱融合（利用物理或化學(xué)方法使某親本的核或細(xì)胞質(zhì)失活后再與另外一個完整的細(xì)胞進(jìn)行融合）。細(xì)胞融合方法包括生物法（病毒誘導(dǎo)）；化學(xué)法（NaNO3、PEG）;物理法（電融合法）。植物離體受精（體外受精）過程：①精細(xì)胞獲得；②卵細(xì)胞分離；③人工合子。貼附型細(xì)胞：一是細(xì)胞之間相互接觸，二是細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合。按照體外培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)不同，主要可分為：①成纖維型細(xì)胞；②上皮型細(xì)胞；③游走型細(xì)胞；④多形型細(xì)胞。非貼附型細(xì)胞：細(xì)胞體外生長不必貼壁，可在培養(yǎng)液中懸浮生長。形態(tài)學(xué)特點(diǎn)是胞體始終為球形。體外培養(yǎng)動物細(xì)胞一般經(jīng)過組織獲得、組織消化、接種、原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)幾個過程。體外培養(yǎng)細(xì)胞生長和增殖過程：①原代培養(yǎng)期；②傳代期；③衰退期。廣泛應(yīng)用的細(xì)胞保存方法：低溫冷凍保存法，其中程序性逐級冷凍比較常用。在加保護(hù)劑的條件下，慢凍快融是復(fù)蘇細(xì)胞的要領(lǐng)。多倍體動物培育方法：①物理方法（溫度休克法、水靜壓法）；化學(xué)方法（化學(xué)藥品）；生物方法（遠(yuǎn)緣雜交）。胚胎干細(xì)胞的體外誘導(dǎo)分化與篩選有：①細(xì)胞因子誘導(dǎo)法；②選擇性標(biāo)記基因篩選目的細(xì)胞法；③特異性轉(zhuǎn)錄因子異位表達(dá)法等。成體干細(xì)胞類型：神經(jīng)干細(xì)胞；骨髓造血干細(xì)胞；間質(zhì)干細(xì)胞。選擇：試管苗玻璃化：是指組織培養(yǎng)過程中特有的一種生理失調(diào)或生理病變，試管苗呈半透明狀、外觀形態(tài)異常的現(xiàn)象，又稱過度水化現(xiàn)象。褐變：分為酶促褐變和非酶促褐變。酶促褐變是由酚酶催化酚類物質(zhì)形成醍及其聚合物的結(jié)果；醍類物質(zhì)經(jīng)過非酶促聚合，形成黑褐色物質(zhì)，引起褐變的發(fā)生。生長素主要用來刺激細(xì)胞分裂和誘導(dǎo)根的分化。常用的有：吲哚乙酸（IAA）、2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）等。細(xì)胞分裂素主要是引起細(xì)胞分裂，誘導(dǎo)芽的形成和促進(jìn)芽的生長。常用的有：6-芐氨基嘌吟（BA）、6-呋喃氨基嘌吟（KT）、玉米素等。染色法測定原生質(zhì)體活力中：熒光素雙醋酸鹽法（發(fā)出熒光的具有活性）；酚藏花紅染料法（不著色的具有活性）；伊文斯蘭染色法（不吸收染料的具有活力）。有胞質(zhì)環(huán)流的有活力。抗原是制備單克隆抗體McAb的第一要素。簡答：植物組織培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)：（1） 便于人工控制培養(yǎng)條件；周期短，繁殖速度快。（2） 占用空間小，不受地區(qū)、季節(jié)限制。（3） 利于篩選突變體，是優(yōu)良品種培育的有效途徑。（4） 利于繁殖珍稀、瀕危植物，保持品種的特性。原生質(zhì)體特征：（1） 無細(xì)胞壁障礙，原生質(zhì)體能攝取DNA、質(zhì)粒、病毒、細(xì)菌、細(xì)胞器等外源物質(zhì)，是植物細(xì)胞工程進(jìn)行遺傳操作、基因轉(zhuǎn)移的良好材料。（2） 具有全能性，可再生細(xì)胞壁并再生成完整植株。（3）原生質(zhì)體適合進(jìn)行融合形成雜種細(xì)胞。能克服不同種細(xì)胞間的不親和障礙，培育新品種。細(xì)胞融合主要步驟：（1） 兩原生質(zhì)體或細(xì)胞相互靠近；（2） 質(zhì)膜融合形成細(xì)胞橋；（細(xì)胞橋的形成是細(xì)胞融合關(guān)鍵的一步）（3） 胞質(zhì)滲透；（4） 細(xì)胞核融合。轉(zhuǎn)基因植物受體：①葉盤；②原生質(zhì)體；③懸浮細(xì)胞；④愈傷組織；⑤胚狀體；⑥活體；⑦胚軸、莖尖、莖段等。轉(zhuǎn)基因植物方法：①直接導(dǎo)入法（基因槍法、PEG法）；②載體介導(dǎo)法（農(nóng)桿菌介導(dǎo)法、病毒介導(dǎo)法）；③花粉管通道法；④病毒感染法。轉(zhuǎn)基因植物鑒定：①選擇性培養(yǎng)檢測（利用抗生素標(biāo)記選擇轉(zhuǎn)入外源基因的細(xì)胞愈傷組織、用無激素的培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選出轉(zhuǎn)入Ti質(zhì)粒的受體）；②遺傳標(biāo)記檢測（GUS基因、藍(lán)色；熒光素酶基因、藍(lán)綠色熒光，③目的基因檢測（PCR、雜交）。動、植物培養(yǎng)基不同：動物細(xì)胞對營養(yǎng)的要求較高，培養(yǎng)液里的成分要滿足細(xì)胞進(jìn)行糖代謝、脂代謝、蛋白質(zhì)代謝及核酸代謝所需要的各種營養(yǎng)。單克隆抗體的生產(chǎn)途徑：①細(xì)胞融合（將免疫動物B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，得到雜交瘤）；②病毒轉(zhuǎn)化。HAT培養(yǎng)基篩選（第一次培養(yǎng)）的三種關(guān)鍵成分：次黃嘌吟、氨基蝶吟、胸腺嘧啶核苷。DNA合成的兩條途徑①正常途徑：糖、氨基酸T核苷酸TDNA，可以被氨基蝶吟阻斷；②補(bǔ)救途徑：核苷酸前體T核苷酸TDNA，需要（HGPRT）和（TK）兩種酶的參與。兩條途徑均被阻斷，瘤細(xì)胞因不能正常合成DNA而死亡，融合細(xì)胞可存活與繁殖。細(xì)胞融合與雜交瘤篩選（第二次培養(yǎng)）：雜交瘤細(xì)胞克隆化培養(yǎng)，目的是從細(xì)胞群體中選育出遺傳穩(wěn)定的分泌特異性抗體的雜交