臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎

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臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（完整版）實用資料(可以直接使用，可編輯完整版實用資料，歡迎下載）萬方數(shù)據(jù)萬方數(shù)據(jù)萬方數(shù)據(jù)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎作者:李銘,王立華作者單位:李銘(解放軍323醫(yī)院細(xì)胞中心,陜西西安,710054,王立華(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院血液學(xué)研究所血液病醫(yī)院刊名:西北國防醫(yī)學(xué)雜志英文刊名:MedicalJournalofNationalDefendingForcesinNorthwestChina年,卷(期:2021,33(3被引用次數(shù):1次參考文獻(xiàn)(17條1.SymmonsD;TurnerG;WebbRTheprevalenceofrheumatoidarthritisintheUnitedKingdom:newestimatesforanewcentury20022.JiangH;ChessLAnintegratedviewofsuppressorTcellsuhsetsinimmunoregulation20043.BachJFRegulatoryTcellsunderscrutiny20034.黃志祥;鄭奔榮;李天旺CD4+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及其在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的研究進(jìn)展[期刊論文]-臨床醫(yī)學(xué)工程2021(105.PengSLTranslatingregulatoryTcellsinrheumatoidarthritis:revisitingthepast20076.Vukmanovic-StejicM;ZhangY;CookJEHumanCD4+CD25hiFoxP3+regulatoryTcellsarederivedbyrapidturnoverofmemorypopulationsinvivo[外文期刊]20067.ValenciaX;StephensG;Goldbach-ManskyRTNFdownmodulatesthefunctionofhumanCD4'CD25hiT-regulatorycells20068.ZhengZH;LiXY;DingJAllogeneicmesenchymalstemcellandmesenchymalstemcell-differentiatedchondrocytesuppresstheresponsesoftypeⅡcollagen-reactiveTsellsinrheumatoidarthritis2021(019.MorganME;FliermanR;vanDuivenvoordeLMEffectivetreatmentofcollagen-inducedarthritisbyadoptivetransferofCD25*regulatoryTcells200510.LawsonCA;BrownAK;BejaranoVEarlyrheumatoidarthritisisassociatedwithadeficitintheCD4+CD25highregulatoryTcellpopulationinperipheralblood200611.GaoJ;DemnisJE;SolchanaLATissueengineeredfabricationofanosteochondralcompositegraftusingratbonemarrowderivedmesenchymalstemcells2001(0412.趙霞;賀韋東;馬明秀骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外對T淋巴細(xì)胞分泌IL-2、IL-4功能的影響[期刊論文]-中國免疫學(xué)雜志2021(0213.AugelloA;TassoR;NegriniSMCelltherapyusingallogeneicbonemarrowmesenchymalstemcellspreventstissuedamageincollageninducedarthritis2007(0414.黃鵬;馬廉人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞應(yīng)用研究現(xiàn)狀[期刊論文]-中國輸血雜志2021(0315.李楠臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞與炎癥性腸病[期刊論文]-山東醫(yī)藥2021(1616.王黎明;周建軍;白雯臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療17例類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的臨床療效觀察2021(0717.栗占國;張奉春;鮑春德類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎2021引證文獻(xiàn)(1條引用本文格式:李銘.王立華臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎[期刊論文]-西北國防醫(yī)學(xué)雜志2021(3ofInflammationandTissueDamageinAcuteandChronicRelap-singEAE[J].MagneticResonanceinMedicine,2003,50:309.[10]BBrochet,MSA.Deloire,T.Touil,etal.EarlymacrophageMRIofinflammatorylesionspredictslesionseverityanddiseasede-velopmentinrelapsingEAE[J].NeuroImage,2006,32:266.[11]ChinetCL,PaiM,BousquetPF,etal.DistinctspatiotemporalpatternofCNSlesionsrevealedbyUSPIO-enhancedMRIinMOG-inducedEAEratsimplicatestheinvolvementofspino-olivocerebellarpathways[J].JournalofNeuroimmunology,2021,211:49.[12]于國平,朱克,梁顯胤,等.實驗性自身免疫性腦脊髓炎的小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)[J].中華神經(jīng)科雜志,1999,32(2:86.(收稿日期:2021-12-24基金項目:吉林省科技廳資助課題(200505193*通訊作者文章編號:1007-4287(202101-0011-03小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、純化及鑒定趙繼學(xué)1a,王廣義1b,張海玉1a*,伏鑫2(吉林大學(xué)1.第一醫(yī)院a.兒外科;b.普外科,吉林長春130021;2.中日聯(lián)誼醫(yī)院摘要:目的探討分離、培養(yǎng)、純化和鑒定小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymalstemcells,MSCs方法,觀察MSCs體外生長特征。方法取小鼠脛骨和股骨,取出骨髓細(xì)胞,用1.073g/ml的Percoll分離液梯度離心,培養(yǎng)皿培養(yǎng)、換液除去非貼壁細(xì)胞,獲得MSCs,通過傳代對MSCs進(jìn)行純化和擴(kuò)增培養(yǎng)。進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,測定生長曲線,用流式細(xì)胞儀檢測P3代MSCs細(xì)胞周期及表面抗原。結(jié)果新分離的MSCs呈小圓形,形態(tài)規(guī)整。培養(yǎng)傳代后,細(xì)胞大小均勻,形態(tài)較一致,多為梭形。P1、P2、P3代MSCs生長曲線均呈S型。P3代MSCs75.27%的細(xì)胞處于G0-G1期。P3代MSCsCD44表達(dá)陽性,表達(dá)率為88.71%,CD34表達(dá)陰性。結(jié)論利用密度梯度離心法聯(lián)合貼壁培養(yǎng)法分離純化骨髓MSCs,在含15%FBS的DMEM-LG培養(yǎng)基中培養(yǎng)MSCs,可獲得穩(wěn)定生長的昆明小鼠MSCs。培養(yǎng)的MSCs細(xì)胞系性狀穩(wěn)定,表型穩(wěn)定均一,適于做進(jìn)一步研究。關(guān)鍵詞:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞;細(xì)胞培養(yǎng);鑒定;小鼠中圖分類號:Q78文獻(xiàn)標(biāo)識碼:AIsolation,cultivation,purificationandidentificationofmicebonemarrowmesenchymalstemcellsinvitroZHAOJi-xue,WANGGuang-yi,ZHANGHai-yu,etal.(TheFirstHospitalofJilinUniversity,Changchun130021,ChinaAbstract:ObjectiveToexploreanewmethodfortheisolation,cultivaton,purificationandidentificationofMSCsandobservethebiologicalfeaturesofmiceMSCsinvitro.MethodsBonemarrowwasextractedfromthetibiaandthighboneofmice.Themarrowliquidwereisolatedwith1.073g/mloercoll.MSCswereobtainedbyremovingthenon-adherentcells.ThentheMSCswerepurifiedandexpandedthroughpassageintime.Thegrowthcurvewasdrawnandthemorphologywasobserved.CellcycleandtheantigenexpressionofP3MSCsweremeasuredwithFACS.ResultsTheMSCsexhibitedasmallroundshapeafterfreshseparation.Aftercultivatedandpassaged,theMSCswerehomoge-nenouslyfusiformshaped.ThegrowthcurvesofP1,P2andP3MSCswere“S”shape.ThecellsofG0-G1stageaccountfor75.27%.TheexpressionofCD44waspositive,whiletheexpressionofCD34wasnegative.ConclusionThemeth-odofdensitygradientcentrifugationcombinedwithadherentculturecouldisolateMSCsfrombonemarrowsimplely.DMEM-LGmediumsupplementedwith15%fetalbovineserumissuitableforthecultureofMSCs.TheculturedMSCslineageisstableandcanbeusedforfurtherresearch.Keywords:Bonemarrowmesenchymalstemcells;Cellculture;Identification;Mice(ChinJLabDiagn,2021,16:0011骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs是骨髓中存在的除造血干細(xì)胞(HSCs外的另一類干細(xì)胞。由于其來源充足,取材相對方便,易于體外擴(kuò)增,以及免疫原性低等優(yōu)勢,已經(jīng)在組織工程和移植領(lǐng)域得到了廣—11—中國實驗診斷學(xué)2021年1月第16卷第1期泛的關(guān)注。本實驗旨在建立一種分離、培養(yǎng)、純化及鑒定MSCs的方法,并對其生物學(xué)特性進(jìn)行研究,為后續(xù)利用骨髓MSCs治療肝臟疾病的研究提供穩(wěn)定的干細(xì)胞模型。1材料與方法1.1材料與試劑清潔級昆明小鼠,雌雄兼用,體重25±2g,購自吉林大學(xué)實驗動物中心[合格證號:SCXK(吉2003-0001];DMEM培養(yǎng)基(美國GibcoBRL公司;胎牛血清(美國Hyclone公司;淋巴細(xì)胞分離液(上海恒信公司,0.25%胰蛋白酶(華美公司,兔抗鼠CD34、CD44熒光抗體(美國PHARMINGEN公司。1.2方法1.2.1骨髓MSCs的體外分離、培養(yǎng)及擴(kuò)增斷頸處死小鼠,超凈臺上取脛骨和股骨,切開兩端松質(zhì)骨,并在骨干中部剪斷,無血清DMEM-LG培養(yǎng)基沖出骨髓細(xì)胞,制成單細(xì)胞懸液,經(jīng)Percoll密度梯度離心法,分離和收集有核細(xì)胞,用含15%FBS的DMEM-LG培養(yǎng)基重懸離心管中的MSCs,鏡下細(xì)胞計數(shù),使細(xì)胞密度達(dá)到1×106個/ml,CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng),換液,將MSCs不斷純化。當(dāng)細(xì)胞生長融合達(dá)80%-90%時,用1∶1的0.25%胰蛋白酶和0.02%EDTA消化分散細(xì)胞,在顯微鏡下控制消化時間,計數(shù)細(xì)胞,以1∶3密度擴(kuò)增培養(yǎng)。此時標(biāo)記為P1代,以后每3-4d換液1次;當(dāng)細(xì)胞生長融合達(dá)80%-90%時,繼續(xù)以1∶3的密度傳代擴(kuò)增培養(yǎng),傳代培養(yǎng)并記為P2代,余類推。倒置相差顯微鏡逐日觀察細(xì)胞形態(tài)和生長情況。1.2.2骨髓MSCs生長曲線的繪制取對數(shù)生長期的P1、P2、P3代MSCs以1.0×105/ml密度分別接種在96孔培養(yǎng)板中,每3孔為一組,每孔100μl。分別在接種后的第1d、2d、3d、4d、5d、6d,以MTT法測細(xì)胞活力。每孔加入MTT溶液(5g/l10μl,混勻。繼續(xù)培養(yǎng)4h,終止培養(yǎng),小心吸棄孔內(nèi)上清液。每孔加入100μlDMSO溶液,振蕩,鏡下觀察結(jié)晶物充分溶解后,在酶聯(lián)免疫檢測儀上測定各孔在490nm波長處的光吸收值,每組取3孔測定值的平均值。以天數(shù)為橫軸,OD值為縱軸繪制細(xì)胞生長曲線。1.2.3骨髓MSCs的細(xì)胞周期分析取生長狀態(tài)良好的P3代細(xì)胞,0.25%胰酶消化,制成單細(xì)胞懸液,采用流式細(xì)胞儀直接熒光法檢測細(xì)胞周期。其中激發(fā)光源為15mW氬離子激光,波長488nm。FACS軟件收集細(xì)胞,Lysis軟件分析處理數(shù)據(jù),記錄陽性細(xì)胞百分率。1.2.4骨髓MSCs表面抗原檢測取生長狀態(tài)良好的P3代小鼠骨髓MSCs,用1:1的EDTA(0.02%和胰蛋白酶(0.25%混合液進(jìn)行消化,離心后棄去培養(yǎng)基。PBS洗滌后制成濃度為1×106/ml的單細(xì)胞懸液。在3個管中各加100μl細(xì)胞懸液,并標(biāo)記為1,2,3號。在1、2號管中分別加入兔抗鼠CD34-FITC10μl,CD44-FITC10μl,3管中加入抗人IG-FITC10μl,3管為陰性對照。室溫孵育30min,流式細(xì)胞儀檢測。2結(jié)果2.1昆明小鼠骨髓MSCs的基本形態(tài)新分離的MSCs呈小圓形,形態(tài)規(guī)整。MSCs傳代培養(yǎng)的細(xì)胞大小均勻,形態(tài)較一致,多為梭形,此時細(xì)胞不再以成克隆的方式生長,而是散在分布生長。MSCs連續(xù)傳3代,細(xì)胞形態(tài)無明顯變化,無衰老征象,傳代周期6-7d。表明MSCs得到了進(jìn)一步的純化及擴(kuò)增。P3代后的MSCs能較好的用于后期實驗。2.2骨髓MSCs生長曲線測定由MTT法測定小鼠P1、P2、P3代各個時間點(diǎn)骨髓MSCs活率,繪制的生長曲線呈S型(見圖1,由圖可見,MSCs在接種后第1-2d為潛伏期,隨后便快速增殖,進(jìn)入對數(shù)生長期,持續(xù)2-3d,此后細(xì)胞增長逐漸減緩,進(jìn)入平臺期。P3代的MSCs能較好的用于后期實驗。2.3骨髓MSCs細(xì)胞周期分析結(jié)果取生長良好的三代細(xì)胞,采用流式細(xì)胞儀直接熒光法,檢測細(xì)胞周期,記錄陽性細(xì)胞百分率,見圖2。由圖可見,75.27%的細(xì)胞處于G0-G1期,表明MSCs具有強(qiáng)大的分化增殖能力。2.4骨髓MSCs表面抗原的表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測顯示P3代小鼠骨髓MSCs強(qiáng)表達(dá)CD44,表達(dá)率為88.71%,基本不表達(dá)造血細(xì)胞表面標(biāo)志CD34。(見圖3。3討論骨髓MSCs是具有多向分化潛能和高度自我更新能力的組織干細(xì)胞。研究證實骨髓MSCs不僅可以分化為與其組織來源一致的細(xì)胞,而且具有跨系或跨胚層分化為不同組織來源細(xì)胞的潛能。但骨髓中MSCs的數(shù)量極少,僅占0.001%-0.01%[1],要利用MSCs就必須對其進(jìn)行體外分離、擴(kuò)增。現(xiàn)體外分離得到均一的骨髓MSCs的方法逐漸—21—ChinJLabDiagn,January,2021,Vol16,No.1圖1MSCs生長曲線圖2MSCs細(xì)胞周期圖3MSCs表面抗原的表達(dá)A:CD34,B:CD44成熟,而通過體外擴(kuò)增獲得足夠數(shù)量的間充質(zhì)干細(xì)胞己實現(xiàn)。分離骨髓MSCs的方法主要有四種:貼壁篩選法[2]、密度梯度離心法[3]、免疫磁珠分離法[4]、流式分選法[5]等。后兩種方法是目前獲得MSCs純度最高的方法,然而該方法操作復(fù)雜、費(fèi)用及設(shè)備要求較高。在分離中對細(xì)胞活性有一定影響。我們使用密度梯度離心和貼壁篩選相結(jié)合,利用Percoll(1.073g/ml分離液將大部分造血細(xì)胞與單個核細(xì)胞分離開來,并經(jīng)過體外貼壁培養(yǎng)一段時間,通過換液去除懸浮生長的造血細(xì)胞,獲得較理想的骨髓MSCs。我們用生長曲線來描述骨髓MSCs的生長繁殖能力,骨髓MSCs生長曲線分潛伏適應(yīng)期、對數(shù)生長期和平臺期。發(fā)現(xiàn)昆明小鼠P1、P2、P3代骨髓MSCs的生長曲線均呈S型。骨髓MSCs的生長性狀穩(wěn)定,P1、P2、P3代細(xì)胞的形態(tài)、生長曲線無明顯差別,潛伏適應(yīng)期1-2d,對數(shù)生長期2-3d,傳代周期約6-7d。MSCs具有無限增殖的能力,但前提是必須具備MSCs體外生長的最佳環(huán)境。目前公認(rèn)MSCs的培養(yǎng)必須用FBS做支持[6],合適的血清濃度對細(xì)胞的生長具有關(guān)鍵性的作用。血清中含有多種營養(yǎng)成分,對細(xì)胞的生長起著重要作用,但培養(yǎng)基中血清的濃度并非越高越好。張怡等[7]實驗證實,血清濃度<10%不利于細(xì)胞生長;10%-15%時,細(xì)胞增殖旺盛,形態(tài)均一;當(dāng)血清濃度>15%時,易引起骨髓MSCs分化而影響增殖。本實驗采用15%FBS的DMEM-LG培養(yǎng)基培養(yǎng)骨髓MSCs,細(xì)胞增值速度快,表形均一,得到了理想的傳代細(xì)胞。MSCs的表型不均一,分別具有間充質(zhì)細(xì)胞、上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的特點(diǎn)。所以過去一直沒有發(fā)現(xiàn)MSCs特異性的表面標(biāo)志物。一般認(rèn)為,MSCs對SH2、SH3、CD29、CD44、CD77、CD90、CD106、CD120a、CD124等都呈陽性反應(yīng),對CD1a、CD31、CD34、CD14、CD45、CD56等成陰性反應(yīng)[8,9]。大多數(shù)實驗室通過MSCs不表達(dá)CD14、CD34及CD45,而表達(dá)CD44、CD90、CD106等標(biāo)志,對MSCs進(jìn)行初步鑒定。目前尚未發(fā)現(xiàn)MSCs特異性標(biāo)記分子,可聯(lián)合應(yīng)用多種抗體幫助分離鑒定MSCs。本實驗中利用密度梯度離心法結(jié)合MSCs貼壁生長的特性,從成年昆明小鼠骨髓中分離、擴(kuò)增培養(yǎng)獲得形態(tài)均一的細(xì)胞集落。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果提示75.27%的細(xì)胞處于G0-G1期,表明MSCs具有強(qiáng)大的分化增殖能力。分離培養(yǎng)的骨髓MSCs強(qiáng)表達(dá)CD44,而造血譜系標(biāo)記CD34基本不表達(dá),說明所分離的細(xì)胞是有別于骨髓HSCs的MSCs,培養(yǎng)的P3代細(xì)胞均一性較好。參考文獻(xiàn):[1]PhinneyDG,KopenG,IsaacsonRL,etal.Plasticadherentstro-malcellsfromthebonemarrowofcommonlyusedstrainsofin-bredmice:variationsinyield,growth,anddifferention[J].JCellBiochem,1999,72(4:570.[2]FriedensteinAJ,ChailakhyanRK,GerasimovUV.Bonemarrowosteogenicstemcells:inVitrocultivationandtransplantationindiffusionchambers[J].CellTissueKinet,1987,20(3:263.[3]張本斯,王凡,鄧力,等.大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離純化與初步鑒定[J].中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志,2003,12:161.[4]EncinaNR,BillotteWG,HofmannMC.Immunomagneticisola-tionofosteoprogenitorsfromhumanbonemarrowstroma[J].LabInvest,1999,79(4:449.[5]ZoharR,SodekJ,McCullochCA.Characterizationofstromalprogenitorcellsenrichedbyflowcytometry[J].Blood,1997,90(9:3471.[6]KicicA,HallCM,ShenWY,etal.Arestemcellcharacteristicsalteredbydiseasestate[J]StemCellsDev,2005,14(1:15.[7]張怡,趙連三,唐紅.小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離與培養(yǎng)[J].生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志,2004,21(5:746.[8]CongetPA,MinguellJJ.Phenotypicalandfunctionalpropertiesofhumanbonemarrowmesenchymalprogenitorcells[J].JCellPhysiol,1999,181(1:67.[9]PittengerMF,MackayAM,BeckSC,etal.Multi-line-agepoten-tialofadulthumanmesenchymalstemcells[J].Science,1999,284(5411:143.(收稿日期:2021-11-30—31—中國實驗診斷學(xué)2021年1月第16卷第1期造血干細(xì)胞造血干細(xì)胞（Stemcell，SC）是指骨髓中的干細(xì)胞，具有自我更新能力并能分化為各種血細(xì)胞前體細(xì)胞，最終生成各種血細(xì)胞成分，包括紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板，它們也可以分化成各種其他細(xì)胞。它們具有良好的分化增殖能力，干細(xì)胞可以救助很多患有血液病的人們，最常見的就是白血病。但其配型成功率相對較低，且費(fèi)用高昂。捐獻(xiàn)造血干細(xì)胞對捐獻(xiàn)者的身體并無很大傷害。造血干細(xì)胞基本介紹造血干細(xì)胞（HemopoieticStemcell，HSC）的干，譯自英文“stem”，意為“樹”、“干”和“起源”。類似于一棵樹干可以長出樹杈、樹葉，并開花和結(jié)果等。通俗地講，造血干細(xì)胞是指尚未發(fā)育成熟的細(xì)胞，是所有造血細(xì)胞和免疫細(xì)胞的起源，它不僅可以分化為紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板，還可跨系統(tǒng)分化為各種組織器官的細(xì)胞，具有自我更新、多向分化和歸巢（即定向遷移至造血組織器官）潛能。因此是多功能干細(xì)胞，醫(yī)學(xué)上稱其為“萬用細(xì)胞”，也是人體的始祖細(xì)胞。干細(xì)胞是具有自我復(fù)制和多向分化潛能的原始細(xì)胞，是機(jī)體的起源細(xì)胞，是形成人體各種組織器官的祖宗細(xì)胞。造血干細(xì)胞有兩個重要特征：其一，高度的自我更新或自我復(fù)制能力；其二，可分化成所有類型的血細(xì)胞。造血干細(xì)胞采用不對稱的分裂方式：由一個細(xì)胞分裂為兩個細(xì)胞。其中一個細(xì)胞仍然保持干細(xì)胞的一切生物特性，從而保持身體內(nèi)干細(xì)胞數(shù)量相對穩(wěn)定，這就是干細(xì)胞自我更新。而另一個則進(jìn)一步增殖分化為各類血細(xì)胞、前體細(xì)胞和成熟血細(xì)胞，釋放到外周血中，執(zhí)行各自任務(wù)，直至衰老死亡，這一過程是不停地進(jìn)行著的。造血干細(xì)胞造血原理造血干細(xì)胞造血干細(xì)胞（hemopoieticstemcell）又稱多能干細(xì)胞。是存在于造血組織中的一群原始造血細(xì)胞。也可以說它是一切血細(xì)胞（其中大多數(shù)是免疫細(xì)胞）的原始細(xì)胞。由造血干細(xì)胞定向分化、增殖為不同的血細(xì)胞系，并進(jìn)一步生成血細(xì)胞。人類造血干細(xì)胞首先出現(xiàn)于胚齡第2～3周的卵黃囊，在胚胎早期（第2～3月）遷至肝、脾，第5個月又從肝、脾遷至骨髓。在胚胎末期一直到出生后，骨髓成為造血干細(xì)胞的主要來源。具有多潛能性，即具有自身復(fù)制和分化兩種功能。在胚胎和迅速再生的骨髓中，造血干細(xì)胞多處于增殖周期之中；而在正常骨髓中，則多數(shù)處于靜止期（G0期），當(dāng)機(jī)體需要時，其中一部分分化成熟，另一部分進(jìn)行分化增殖，以維持造血干細(xì)胞的數(shù)量相對穩(wěn)定。造血干細(xì)胞進(jìn)一步分化發(fā)育成不同血細(xì)胞系的定向干細(xì)胞。定向干細(xì)胞多數(shù)處于增殖周期之中，并進(jìn)一步分化為各系統(tǒng)的血細(xì)胞系，如紅細(xì)胞系、粒細(xì)胞系、單核-吞噬細(xì)胞系、巨核細(xì)胞系以及淋巴細(xì)胞系。由造血干細(xì)胞分化出來的淋巴細(xì)胞有兩個發(fā)育途徑，一個受胸腺的作用，在胸腺素的催化下分化成熟為胸腺依賴性淋巴細(xì)胞，即T細(xì)胞；另一個不受胸腺，而受腔上囊（鳥類）或類囊器官（哺乳動物）的影響，分化成熟為囊依賴性淋巴細(xì)胞或骨髓依賴性淋巴細(xì)胞，即B細(xì)胞。并分別由T、B細(xì)胞引起細(xì)胞免疫及體液免疫。如機(jī)體內(nèi)造血干細(xì)胞缺陷，則可引起嚴(yán)重的免疫缺陷病。造血干細(xì)胞分化造血干細(xì)胞是血細(xì)胞（紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板等）的鼻祖，是高度未分化細(xì)胞，具有良好的分化增殖能力，干細(xì)胞可以救助很多患有血液病的人們（如白血病）。因為造血系統(tǒng)原始細(xì)胞惡性增生、不會凋亡，從而導(dǎo)致了白血病發(fā)病，而救助他們的方法就是將這些惡性細(xì)胞全部殺滅，但是化療是敵我不分得，在殺滅癌細(xì)胞的同時也殺死了正常的造血干細(xì)胞，導(dǎo)致人體血細(xì)胞缺乏，危及病人生命。當(dāng)病人需要根除白血病時，就要一次性殺滅癌細(xì)胞，但是這樣超大劑量的化療往往也將正常干細(xì)胞殺滅的寥寥無幾。為了讓病人盡快恢復(fù)造血功能，挽救病人的生命就需要輸注造血干細(xì)胞，這就是我們所知道的骨髓移植。但是自體的骨髓移植雖然成功率大，排異反應(yīng)小，但是在采集的時候難免會混雜有白血病細(xì)胞，造成以后復(fù)發(fā)的來源，所以有時需要進(jìn)行異基因骨髓移植。但是不是任何人的骨髓拿來都可以移植的，如果兩個人免疫標(biāo)記相差太大就會造成過強(qiáng)的排異反應(yīng)，使得移植失敗，病人死亡。您在血液中心采集的干細(xì)胞樣本，將會送到骨髓庫進(jìn)行基因存檔，當(dāng)有病人需要異基因骨髓移植，而他和您的骨髓配型相近的話，血液中心會通知你捐獻(xiàn)干細(xì)胞，也就是獻(xiàn)骨髓。它不是想象中的那么可怕，對身體也無害，就是將您的血液循環(huán)到一個采集機(jī)器中，機(jī)器自動采集，就像獻(xiàn)血一樣.造血干細(xì)胞主要作用造血干細(xì)胞移植技術(shù)的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用：骨髓移植技術(shù)的發(fā)現(xiàn)生命科學(xué)是二十世紀(jì)發(fā)展最為迅猛的學(xué)科之一，已經(jīng)成為自然科學(xué)中最引人注目的領(lǐng)域。1957年，美國華盛頓大學(xué)多納爾·托瑪斯發(fā)現(xiàn)正常人的骨髓移植到病人體內(nèi)，可以治療造血功能障礙。這一技術(shù)的發(fā)現(xiàn)，使多納爾·托瑪斯本人榮獲了諾貝爾獎。這一技術(shù)很快得到全世界的認(rèn)可，并已成為根治白血病等病的主要手段。造血干細(xì)胞移植技術(shù)的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用為人類戰(zhàn)勝疾病帶來新的希望。骨髓移植可治疾病造血干細(xì)胞移植是現(xiàn)代生命科學(xué)的重大突破。造血干細(xì)胞移植可治療惡性血液病，部分惡性腫瘤，部分遺傳性疾病等75種致死性疾病。包括急性白血病、慢性白血病、骨髓增生異常綜合征、造血干細(xì)胞疾病、骨髓增殖性疾病、淋巴增殖性疾病、巨噬細(xì)胞疾病、遺傳性代謝性疾病、組織細(xì)胞疾病、遺傳性紅細(xì)胞疾病、遺傳性免疫系統(tǒng)疾病、遺傳性血小板疾病、漿細(xì)胞疾病、地中海貧血、非血液系統(tǒng)惡性腫瘤、急性放射病等。因為有了造血干細(xì)胞移植技術(shù)，世界各地成千上萬患有以上疾病的患者，重新燃起了生命的希望。捐獻(xiàn)介紹生理上無損健康人體血液中有多種血細(xì)胞，紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板等，它們都是有壽命的，多則120天，少則36小時，不斷新陳代謝。它們均來自于一種始祖細(xì)胞，我們稱它為造血干細(xì)胞。造血干細(xì)胞具有高度的自我更新、自我復(fù)制的能力，可分化生成各種血細(xì)胞。造血干細(xì)胞有很強(qiáng)的再生能力，失血或捐獻(xiàn)造血干細(xì)胞后，可刺激骨髓加速造血，1-2周內(nèi)，血液中各種成分可恢復(fù)到原來水平。適齡、健康的志愿者捐獻(xiàn)造血干細(xì)胞后，由于血細(xì)胞數(shù)量減少，會促使骨髓把儲備的白細(xì)胞釋放，并刺激骨髓造血功能，促使血細(xì)胞的生成，不會影響身體健康。人體的造血干細(xì)胞主要存留在長骨的骨髓腔和扁平骨的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼內(nèi)，這是一種紅色的海綿狀組織，被稱為紅骨髓。人出生時，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡長大，脂肪細(xì)胞增多，相當(dāng)部分紅骨髓變成黃骨髓。此種變化是由于成人不需要全部骨髓參加造血，部分骨髓造血已經(jīng)足夠補(bǔ)充所需血液。當(dāng)身體嚴(yán)重缺血時，部分黃骨髓又可以變成紅骨髓而繼續(xù)進(jìn)行造血。實踐上證明安全我國大陸已經(jīng)采集1700多例造血干細(xì)胞，這是無血緣關(guān)系的，有血緣關(guān)系的則更多；臺灣已經(jīng)采集800多例造血干細(xì)胞（大部分為骨髓）。國際上美國已經(jīng)采集2萬多例造血干細(xì)胞（大部分為骨髓）；日本已經(jīng)采集5500多例造血干細(xì)胞（全部是骨髓）。據(jù)多年的臨床觀察和國際上的報道，至今還沒有因采集外周血造血干細(xì)胞引起對捐獻(xiàn)者傷害的案例。在采集完成后，一些輕微疼痛感和不適將很快消失。動員劑安全可靠從外周血采集造血干細(xì)胞簡單、省事，故我國捐獻(xiàn)造血干細(xì)胞較多采用此種方法。但在正常生理條件下，外周血的造血干細(xì)胞數(shù)量少，不能滿足移植的需要，如注射細(xì)胞動員劑,可使外周血造血干細(xì)胞增加20~30倍。目前使用的細(xì)胞動員劑是“粒一巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM--CSF）”，除能增加外周血造血干細(xì)胞的數(shù)量外，還有輔助心臟功能等作用。據(jù)多年的臨床觀察和國際上的報道，至今還沒有發(fā)現(xiàn)其對人體健康的危害和副作用。采集量和標(biāo)準(zhǔn)成年人（18～45歲）的骨髓量一般在3000克左右，大部存于骨髓腔。成人一例采集量為50—200ml造血細(xì)胞懸液，采集次數(shù)不超過2次。一般循環(huán)處理血量不少于10000ml。CD34+＞2×106/kg、MNC＞5×108/kg。每天檢測CD34+量，在最高峰時間采集，對捐獻(xiàn)者本身無不良影響。采集技術(shù)成熟中華骨髓庫有經(jīng)專家委員會審定的移植醫(yī)院和采集醫(yī)院（中心），在這樣的醫(yī)院里采集造血干細(xì)胞如同采集成分血一樣簡單、安全。在整個采取過程中所用的器材都經(jīng)過嚴(yán)格消毒，并一次性使用，確保了捐獻(xiàn)者的安全。骨髓與骨髓的功能血液是由血漿（血液中的液體部分）和血細(xì)胞（紅細(xì)胞、粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、血小板等）組成的紅色、不透明并帶粘性的液體。正常成人的總血量約為體重的8％。血液在血管內(nèi)流動不息，是人體內(nèi)運(yùn)輸營養(yǎng)物質(zhì)、攜帶代謝產(chǎn)物、調(diào)節(jié)內(nèi)環(huán)境平衡及行使防御功能的條條“河流”。人們對血液的認(rèn)識是逐漸加深的。古代埃及人提倡以血液來沐浴，旨在返老還童或恢復(fù)健康。1900年紅細(xì)胞ABO血型發(fā)現(xiàn)之前，許多人因血型不符的輸血而發(fā)生嚴(yán)重的溶血反應(yīng)甚至死亡。1929年發(fā)明了骨髓穿刺針，從此骨髓細(xì)胞才成為血液學(xué)研究的一個重要部分。正常人體的血細(xì)胞維持?jǐn)?shù)量和功能相對恒定。這種恒定是新陳代謝的動態(tài)平衡，即衰老、死亡的細(xì)胞經(jīng)常不斷地被新生的細(xì)胞所取代。例如人類紅細(xì)胞的平均壽命約為120天，血小板的壽命約7－10天。一個正常成年人每天約有10個紅細(xì)胞衰老死亡；同樣也有相近數(shù)量的紅細(xì)胞新生。成年人的造血器官主要局限在骨髓、脾臟以及淋巴結(jié)中。但脾臟及全身淋巴結(jié)在出生后主要作用是促使淋巴細(xì)胞的第二次增殖，即淋巴細(xì)胞在接觸抗原后繁殖的免疫反應(yīng)。所以骨髓造血功能顯得尤為重要。出生后，骨髓在正常情況下是唯一產(chǎn)生紅細(xì)胞、粒細(xì)胞和血小板的場所，骨髓也產(chǎn)生淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。骨髓是存在于長骨（如肱骨、股