高效液相色譜法測定化妝品中氫和苯酚

高效液相色譜法測定化妝品中氫和苯酚

作為一種消毒和防腐藥物，苯乙二醇和氫乙二醇可用于皮膚傷口和濕疹，具有一定的美白效果。但由于它們的毒性大,長期接觸會引起白血病及心血管疾病,我國衛(wèi)生部2007年1月頒布的《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》中規(guī)定苯酚、氫醌為美白祛斑類化妝品的禁用物質(zhì)。2007年衛(wèi)生部頒布標準中測定方法在1999年標準基礎上加以改進,推薦方法為高效液相色譜-二極管陣列檢測器結合氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析法、氣相色譜法、高效液相色譜法3種。對于可能出現(xiàn)的陽性結果第一種方法采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用確認,后兩種方法使用保留時間定性,相關參考文獻中也大多使用保留時間定性的方法。但由于化妝品種類繁多,基體復雜,單純用保留時間定性可靠性差,容易造成“誤判”。作者利用常規(guī)的高效液相色譜(紫外檢測器)和紫外分光光度計,建立了反相高效液相色譜結合紫外法對化妝品中苯酚、氫醌定性確認和定量檢測的方法,并對市場上不同品牌中高低檔美白祛斑類化妝品進行測定,結果準確,可為沒有配置二極管陣列檢測器及氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用設備的化妝品生產(chǎn)廠家及質(zhì)監(jiān)部門提供一定參考。1實驗部分1.1儀器、檢測方法Agilent1100高效液相色譜儀(紫外檢測器),Agilent色譜儀器公司;TU-1901紫外可見分光光度計,北京普析通用儀器有限公司;超聲波清洗儀,上海醫(yī)用儀器廠;MettlerAE240分析天平(1/100000天平),梅特勒-托利多(上海)儀器有限公司。苯酚,分析純,重結晶,汕頭西隴化工廠;氫醌,色譜純,sigma公司;甲醇,色譜純,美國Tedia公司;其余試劑均為國產(chǎn)分析純。1.2流動相、流速色譜柱:AgilentTC-C18(250mm×4.6mm,5μm);進樣量20μL;流動相為V(甲醇)∶V(水)=55∶45,流速為1.0mL/min;紫外檢測波長λ=280nm。1.3標準儲備液配制精密稱取苯酚標準品0.10701g,氫醌標準品0.09703g置于燒杯中,少量甲醇溶解,移至100mL容量瓶中,用甲醇稀釋并定容,搖勻,配成質(zhì)量濃度分別為1.0701g/L、0.9703g/L的標準儲備液。精確稱取化妝品試樣約1.000g于具塞比色管中,加甲醇定容至10mL,超聲提取20min,離心分離,取上清液以0.22μm濾膜過濾。2結果與討論2.1檢測波長的選擇經(jīng)紫外全波長掃描,苯酚、氫醌甲醇溶液在212nm、228nm及280nm處有較大吸收。考慮到在前兩個檢測波長下,流動相中甲醇的紫外吸收較強,基線不穩(wěn),且化妝品中許多組分都有吸收,造成較大干擾,故選擇280nm為檢測波長。另據(jù)有關文獻報道,用ODS柱,甲醇為流動相,目標物無響應,經(jīng)實驗驗證未曾發(fā)現(xiàn)類似問題。采用如下色譜條件:AgilentTC-C18色譜柱,流動相為甲醇/水(體積比55∶45),流速1.0mL/min,檢測波長λ=280nm,進樣量20μL,分析苯酚、氫醌混合標準溶液,結果見圖1。由圖1可見,苯酚、氫醌有較好的分離效果。根據(jù)對兩種物質(zhì)的標準溶液分別進樣,確定氫醌的保留時間為3.692min,苯酚的保留時間為5.878min。2.2標準曲線的制備精密吸取標準儲備液0.2mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL分別置于10mL容量瓶中,甲醇定容。按上述色譜條件,進樣20μL測定。每份標液測定5次,取峰面積平均值,以峰面積A為縱坐標,相應的質(zhì)量濃度為橫坐標,作圖得標準曲線,見圖2。對標準曲線進行回歸,得到氫醌的回歸方程為:y=23.083ρ+1.049(r=0.9999);苯酚的回歸方程為:y=12.861ρ+1.062(r=0.9998)。2.3加標回收率試驗取氫醌質(zhì)量濃度為97.03mg/L、苯酚質(zhì)量濃度為107.01mg/L的標準溶液,補充進樣3次,共8次,測得結果平均值為97.12mg/L和107.09mg/L,計算RSD分別為1.7%和1.9%。精密量取氫醌質(zhì)量濃度為10.40mg/L、苯酚質(zhì)量濃度為13.56mg/L供試液2mL,定量精確加入標準溶液(氫醌48.51mg/L、苯酚53.51mg/L)0.2mL、0.4mL、0.6mL、1.0mL,使用與樣品相同的方法制備和測定,取5次測定平均值計算回收率,回收率在96.2%～102.8%,結果見表1。從表1中可知,該方法具有良好的準確度、精密度和重現(xiàn)性。2.4紫外光譜分析對南通大型商場、個體批發(fā)市場銷售及美容院銷售使用的38種中高低檔美白護膚產(chǎn)品使用上述色譜方法進行苯酚、氫醌相對含量的測定,采用保留時間定性。其中購自大型商場的某著名歐產(chǎn)高級日霜及國產(chǎn)高級頸霜的分析結果見圖3。由圖3可見,樣品色譜圖中有一與標準物質(zhì)保留時間相同的成分,若單純以保留時間進行定性,勢必得出化妝品中含有氫醌的結論,可能會引起對商品質(zhì)量的“誤判”。對標液和樣品提取液進行紫外掃描,吸收光譜見圖4。由圖4可見,標液與樣品溶液的紫外光譜吸收峰位置和形狀完全不同,說明是兩種不同的物質(zhì),從而確定樣品中不含氫醌、苯酚。對38種樣品測定結果,單純以保留時間定性,發(fā)現(xiàn)有11種樣品出現(xiàn)陽性結果,以紫外光譜和保留時間共同確認,最終在兩個樣品中檢出氫醌和苯酚,定性結果與參照《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》中氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用確認結果完全一致。2.5b氫和苯酚質(zhì)量分數(shù)將檢出含氫醌的樣品按1.3中樣品溶液的配制方法處理,在上述色譜條件下測定5次,取峰面積平均值,按線性方程計算氫醌、苯酚的質(zhì)量分數(shù)。樣品一(某美白祛痘按摩膏)中氫醌、苯酚質(zhì)量分數(shù)為13.6μg/g、19.7μg/g;樣品二(某祛斑面膜)中氫醌、苯酚質(zhì)量分數(shù)為21.7μg/g、16.2μg/g。3標準曲線及方法用甲醇超聲提取目標物,高效