制備色譜參考資料

一.背景?與蒸餾、萃取比較，制備液相是更有效的分離方法?廣泛用于樣品和產(chǎn)品的提取和純化?用于合成、植化、生化和制藥等領(lǐng)域二.制備HPLC應(yīng)用領(lǐng)域成份量所在領(lǐng)域微克生物酶毫克結(jié)構(gòu)描述和鑒定克對照品千克工業(yè)規(guī)模三.分析和制備HPLC目的?分析HPLC－－樣品組成的信息，研究大部分或全部組分(產(chǎn)品)?制備HPLC回收純品，研究一種或幾種樣品組分(目標(biāo)組分)四.分析／制備HPLC的特點(diǎn)進(jìn)樣量僅夠檢測即可盡量大模式反向HPLC正相HPLC柱內(nèi)徑1～5mm>10mm添料1～5um>10um流速<10mi/min>10mi/min進(jìn)樣通常不是問題進(jìn)樣較難檢測條件選擇最大靈敏度降低靈敏度樣品溶解度通常不重要非常重要流動(dòng)相揮發(fā)性不重要溶劑揮發(fā)五.制備HPLC的策略1：很高的生產(chǎn)效率和產(chǎn)量，收率很低。2：高純品，但是生產(chǎn)效率和產(chǎn)量很低。3：峰在基線上被完全分開，產(chǎn)品純度、產(chǎn)量和生產(chǎn)效率都達(dá)到最高。六.制備分離的策略?如為了進(jìn)行活性或藥物測試，某種組份必須被完全單獨(dú)提取，那么組份的純度是最重要的參數(shù)，產(chǎn)量和生產(chǎn)效率是其次的。?如果某種合成中間體必須被純化，并且需要有足夠的量為下一步合成作準(zhǔn)備，那么純度就不是最重要的了。而生產(chǎn)效率在這種情況下就是個(gè)首先需要解決的問題，因?yàn)槠渲苯雨P(guān)系到完成整個(gè)合成工作的進(jìn)程和速度。同時(shí)產(chǎn)量也是很重要的，因?yàn)楦邇r(jià)值組份的損失需要控制在最少的范圍內(nèi)。七.建立制備HPLC方法考慮?建立分析HPLC方法（流動(dòng)相、添加劑）?粗產(chǎn)品分離?樣品在流動(dòng)相中溶解度八.擴(kuò)大規(guī)模的制備色譜?分析液相：?會(huì)達(dá)到很好的分離效果，峰形尖銳并且很對稱。?進(jìn)樣量是微克級(jí)，甚至更低。?樣品量和固定相之比甚至小于1:100000。?進(jìn)樣體積一般大大小于柱體積（小于1:100）。?制備液相：?最大的區(qū)別就是超量進(jìn)樣。九.分析色譜吸附等溫線分析液相的目的是給一種組份定性、定量。重要的色譜參數(shù)有溶解度、峰寬和峰的對稱性。如果進(jìn)樣量越來越多，峰高和峰面積會(huì)增加，但峰的對稱性和容量因子保持不變。最佳的峰形應(yīng)是一條高斯曲線十.制備色譜吸附等溫線將超過一定量的樣品注射進(jìn)色譜柱，吸附變化線就會(huì)成非線性。這意味著峰形會(huì)變的不再對稱，表現(xiàn)為嚴(yán)重拖尾和k縮小。濃縮超量進(jìn)樣。在一些情況中，根據(jù)進(jìn)樣量的增加，容量因子也相應(yīng)變大，并造成很強(qiáng)的前峰。吸附變化線取決于組份的多少，色譜柱的載樣能力就必須根據(jù)實(shí)驗(yàn)來決定十一.樣品重量對峰的影響十二.體積法超量載樣樣品組份溶解性差，濃縮法超量載樣不能使用，更大樣品體積注射到色譜柱中。超過一定進(jìn)樣體積，峰高不變，但峰變寬并且呈矩形。制備液相中濃縮法超量載樣比體積法超量載樣更受歡迎，因?yàn)榭杀环蛛x的樣品量更高。組份的溶解性限制，兩種超量載樣技術(shù)結(jié)合使用十三.進(jìn)樣體積對峰寬與峰形影響樣品體積／峰基線體積：1－0.3，2－3，3－5，4－15十四.制備方法步驟1.優(yōu)化分析方法的選擇性。2.在分析柱上進(jìn)行超量載樣。3.放大到制備柱十五.線性放大?可變參數(shù)：流量、進(jìn)樣量、檢測池尺寸、溶劑消耗、產(chǎn)品產(chǎn)量、系統(tǒng)死體積、進(jìn)樣管體積、樣品收集體積?不可變參數(shù)：填料種類、色譜柱長度、色譜柱背壓、樣品濃度、回收率、純度、操作時(shí)間、色譜柱性能、操作溫度十六.優(yōu)化制