苯磺酸氨氯地平片劑含量的HPLC測(cè)定

苯磺酸氨氯地平片劑含量的HPLC測(cè)定（單點(diǎn)校正法）一、目的要求學(xué)習(xí)高效液相色譜儀器的基本使用方法。掌握單點(diǎn)校正法的色譜定量分析方法。二、基本原理苯磺酸氨氯地平為抗心律失常藥，臨床主要用于治療高血壓和心絞痛。采用非極性的十八烷基鍵合相（ODS）為固定相和極性的甲醇一水溶液為流動(dòng)相的反相分離模式適合于苯磺酸氨氯地平片劑含量的測(cè)定，空白輔料均無干擾?？梢杂脝吸c(diǎn)校正法直接進(jìn)行分析測(cè)定。wAcAw廠siX100% c廠siX100%iAiAss三、 實(shí)驗(yàn)條件a） 高效液相色譜儀（配紫外檢測(cè)器），以色譜工作站聯(lián)機(jī)控制儀器、處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。超聲波清洗機(jī)進(jìn)樣器：手動(dòng)進(jìn)樣器，100pL微量注射器色譜柱：C]80.5pm,250X4.6mmb） 分離條件流動(dòng)相比例：甲醇一0.03mol?L-i磷酸二氫鉀溶液（65:35）進(jìn)樣量：20pL檢測(cè)波長：237nm流動(dòng)相流量：1.0mL/min四、實(shí)驗(yàn)步驟a） 按儀器的要求打開計(jì)算機(jī)和液相色譜主機(jī)，調(diào)整好流動(dòng)相的流量、檢測(cè)波長等參數(shù)，用流動(dòng)相沖洗色譜柱，直至工作站上色譜流出曲線為一平直的基線。b） 稱取苯磺酸氨氯地平對(duì)照品約50mg,置50mL量瓶中，加甲醇適量，超聲10min使溶解，并加甲醇至刻度，搖勻得1.0mg/mL貯備液。精密量取1.0mg/mL貯備液5.0mL至50mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻、過濾，得100yg/mL的對(duì)照品溶液。c） 取苯磺酸氨氯地平片劑10粒，研勻。精密稱取適量（相當(dāng)于苯磺酸氨氯地平5mg）置50mL容量瓶中，加流動(dòng)相超聲溶解，過濾，濾液作樣品溶液。d） 分別取苯磺酸氨氯地平對(duì)照品和樣品溶液20yL進(jìn)樣，記錄色譜圖。e） 根據(jù)對(duì)照品和樣品的峰面積，用單點(diǎn)校正法計(jì)算苯磺酸氨氯地平片劑的含量。五、 問題討論紫外檢測(cè)器是否適用于檢測(cè)所有的有機(jī)化合物？為什么？為什么液相色譜多在室溫下進(jìn)行分離檢測(cè)而氣相色譜法相對(duì)要在較高的柱溫下操作？驗(yàn)?zāi)康模簩W(xué)習(xí)氧化還原滴定法的原理與實(shí)驗(yàn)方法，各種滴定終點(diǎn)確定方法（V?E曲線法，二次微商法）。實(shí)驗(yàn)原理：用KCrO滴定Fe2+,其反應(yīng)式如下：KCrO+6Fe2++14H+—2Cr3++6Fe3++HO2272272利用鉑電極作指示電極，飽和甘汞電極作參比電極，與被測(cè)溶液組成工作電池。在滴定過程中，隨著滴定劑的加入，鉑電極的電極電位發(fā)生變化。在化學(xué)計(jì)量點(diǎn)附近鉑電極的電極電位產(chǎn)生突躍，從而確定滴定終點(diǎn)。儀器和試劑:儀器：飽和甘汞電極鉑電極pH—mv計(jì)滴定管（酸式）攪拌磁試劑：KCrO溶液（0.01mol/L）硫酸亞鐵銨溶液二苯胺磺酸鈉（指示劑）227實(shí)驗(yàn)步驟：1．準(zhǔn)備好鉑電極和飽和甘汞電極；在滴定管中加入重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液。2.試樣的配制：在50mL燒杯中，將10mLFe2+和8mL3mol的HSO相混合；再24加入幾滴二苯胺磺酸鈉作指示劑。3?用酸式滴定管裝入0.01mol/L：KCrO溶液，排氣泡，調(diào)零后置于鐵架臺(tái)上2274.試液中Fe2+含量的測(cè)定：開動(dòng)攪拌磁子，待電位值穩(wěn)定后讀數(shù)。向燒杯中滴加KCrO溶液，記錄滴定劑為1mL，2mL，3mL，4mL，4.4mL,4.5mL,4.6mL,4.7227mL,4.8mL,4.9mL,5.0mL,5.1mL,5.2mL,6.0mL,7.0mL,8.0mL,9.0mL處的電動(dòng)勢(shì)值。5．關(guān)閉儀器和攪拌電源開關(guān)。清洗滴定管,電極,燒杯并放回原處。6．根據(jù)數(shù)據(jù)，給出E-V曲線，確定滴定終點(diǎn)；用二次微商法確定終點(diǎn)，比較兩種結(jié)果。實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象：溶液因加入了指示劑，隨著KCrO溶液的加入，溶液由無色變成淺綠色最后變227成紫色，可幫助指示滴定終點(diǎn)。當(dāng)KCrO溶液加入的體積達(dá)到4.8mL時(shí)，電位227發(fā)生突躍。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：1．實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄如下：V (mL)(K2Cr2O7)0.01.02.03.04.04.44.6電位數(shù)（V）-388-432-456-476-504-524-5424.74.84.95.05.15.26.07.09.0-559-649-719-745-762-772-789-801-8132．E-V曲線：曲線上拐點(diǎn)對(duì)應(yīng)的體積即為滴定終點(diǎn)時(shí)所耗標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積。根據(jù)此曲線，當(dāng)體積為4.8mL時(shí)，發(fā)生突躍。此時(shí)電動(dòng)勢(shì)數(shù)值為-649V。根據(jù)體積可計(jì)算出Fe2+的含量為0.0288mol/L.二階微商法（計(jì)算法）滴定體積V1VepV2△2E/AV2作E-V曲線所用數(shù)據(jù)作△E/AV-V曲線所用數(shù)據(jù)作A2E/AV2-V曲線所用數(shù)據(jù)加KCrO溶2 2 7液體積V/mLE-mVAE/mVAV/mLAE/AV加KCrO溶液2 2 7體積V/mLA2E/AV2加KCrO溶液體2 2 7積V/mL0.0-388-441.0-440.5201.01.0432-241.0-241.52.0-456-201.0-202.542.0

3.0-476-281.0-283.5-83.04.0-504-200.4-504.2-31.43.854.4524-180.2-904.5-133.34.354.6-542-170.1-1704.65-533.34.5754.7-559「-900.1-9004.75-73004.74.8-649-700.1-7004.8520004.84.9-719-260.1-2604.9544004.95.0-745-170.1-1705.059005.005.1-762-100.1-1005.157005.3755.2-772-170.8-21.35.6174.895.3756.0-789-121.0-126.510.336.057.0-801-122.0-68.047.259.0-813計(jì)算如下：加入4.7mL時(shí)，△2E/AV2=-7300; 加入4.8mL時(shí)，△旳卜V2=2000滴定劑體積/mL 4.7x4.8△2E/AV2 -7300 0 20004.8-4.7=x-4.72000+73000+7300x=4.78mL4.A2E/AV2-V曲線：此曲線最高點(diǎn)與最低點(diǎn)連線與橫坐標(biāo)的交點(diǎn)即為滴定終點(diǎn)體積實(shí)驗(yàn)討論：1.電位滴定:每滴加一次滴定劑，平衡后測(cè)量電動(dòng)勢(shì)。關(guān)鍵:確定滴定反應(yīng)的化學(xué)計(jì)量點(diǎn)時(shí),所消耗的滴定劑的體積;快速滴定尋找化學(xué)計(jì)量點(diǎn)所在的大致范圍;突躍范圍內(nèi)每次滴加體積控制在O.lmL;記錄每次滴定時(shí)的滴定劑用量（V）和相應(yīng)的電動(dòng)勢(shì)數(shù)值（E）,作圖得到滴定曲線。2.電位滴定終點(diǎn)確定方法（l）E-V曲線法：圖（a） 簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確性稍差。（2）AE/AV-V曲線法：圖（b） —階微商由電位改變量與滴定劑體積增量之比計(jì)算之。曲線上存在著極值點(diǎn)，該點(diǎn)對(duì)應(yīng)著E-V曲線中的拐點(diǎn)。3）A2E/AV2-V曲線法：圖（c）。靈敏準(zhǔn)確且不受試液底色的影響。A2E/AV2二階微商計(jì)算：3．在計(jì)量點(diǎn)時(shí)，二苯胺磺酸鈉顏色如何變化二苯胺磺酸鈉的氧化態(tài)為紫色，還原態(tài)為無色，變色的條件電極電位為0.85V。變色范圍為0.85±0.059/2V，用KCrO滴定Fe2+的突躍范圍的電位正好將指示227劑的變色范圍包含在內(nèi)，故計(jì)量點(diǎn)時(shí)，指示劑由無色而氧化為紫色。4?在本實(shí)驗(yàn)中為何要加HSO及HPO?2 4 3 4KCrO在酸性溶液中顯示很強(qiáng)的氧化能力，因此要加1mol/LHSO，此時(shí)22724CrO2-/Cr3+的條件電極電位為1.08，能使Fe2+氧化為Fe3+。27在1mol/LHSO中E'Fe3+/Fe2+=+0.68V,加入1：3(V/V)的HPO后由于PO3-與Fe3+形成穩(wěn)定的無色絡(luò)離子［Fe(PO)",而使Fe3+/Fe2+電對(duì)的條件電4 42極電位降低，所以在有HPO存在的HSO介質(zhì)中滴定Fe2+時(shí)，起始條件電極電位3 4 2 4最低，滴定突躍最長。5.從E-V曲線上確定的計(jì)量點(diǎn)位置，是否位于突躍的中點(diǎn)？為什么？從E-V曲線上確定的計(jì)量點(diǎn)位置，并不位于突躍的中點(diǎn)，因?yàn)樵谠撗趸€原反應(yīng)中所涉及的二個(gè)半反應(yīng)為：Fe2+—e?Fe3+ n—11CrO2-+14H++6e—2Cr3++7HO n—62722n工氣，所以等當(dāng)點(diǎn)并不在滴定突躍的中點(diǎn)，而是偏向電子轉(zhuǎn)移數(shù)較多的CrO2-一方。在這里是用KCrO滴定Fe2+，因此等當(dāng)點(diǎn)偏向于滴定突躍的末端。272276．為什么氧化還原滴定可以用鉑電極作為指示電極鉑是一種性質(zhì)穩(wěn)定的惰性金屬，當(dāng)鉑電極插入可溶性氧化態(tài)或還原態(tài)物質(zhì)的滴定溶液中，電極本身并不參加反應(yīng)，而是作為一個(gè)導(dǎo)體，在這里僅起傳導(dǎo)電子的作用，沒有離子穿越相界面?。為物質(zhì)的氧化態(tài)(Fe3+)和還原態(tài)(Fe2+)轉(zhuǎn)移電子提供了場(chǎng)所，它能顯示溶液中對(duì)應(yīng)的氧化態(tài)和還原態(tài)離子濃度間的關(guān)系，因而可在氧化還原滴定中用作指示電極。目的與要求1、掌握吸收曲線的測(cè)定與繪制方法2、掌握直接比較法定量的方法3、熟悉紫外分光光度計(jì)的使用方法原理樣品中的苯甲酸在酸性條件下可用水蒸氣蒸餾法提取，在堿性條件下形成苯甲酸鹽。苯甲酸及其鹽對(duì)紫外光有選擇性吸收，其吸收光譜的最大吸收波長在225nm左右。用紫外可見分光光度計(jì)可測(cè)定物質(zhì)在紫外光區(qū)、可見光區(qū)的吸收光譜,并可定量測(cè)定。儀器與試劑1、儀器751型分光光度計(jì)；1cm石英吸收池一套；50ml容量瓶二只;刻度吸管5ml、10ml各一只；滴管一只。2、試劑苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1ml相當(dāng)于O.lmg苯甲酸）；O.1mol/L、0.01mol/L氫氧化鈉溶液。操作步驟操作步驟1、苯甲酸吸收曲線的繪制取苯甲酸儲(chǔ)備液4.00ml,置于50ml容量瓶中，用0.01mol/L氫氧化鈉溶液定容,搖勻。此液1ml相當(dāng)于8“g苯甲酸。測(cè)定條件：氫燈，1cm石英比色皿，0.01mol/L氫氧化鈉為參比測(cè)定波長：從210nm-240nm每隔一定波長（2nm-5nm）測(cè)定一次吸光度，在225nm左右隔1nm測(cè)定一次吸光度。繪制苯甲酸的紫外吸收曲線，得最大吸收波