實驗動物采血技術(shù)給藥技術(shù)(一)

動物實驗基本操作技術(shù)實驗動物的抓取與固定性別鑒定年齡的大致判斷妊娠檢查分組與編號常規(guī)采血方法給藥途徑與方法麻醉方法處死方法一、大、小鼠的抓取固定第一節(jié)實驗動物的抓取與固定小鼠固定盒固定大鼠固定盒固定二、豚鼠的抓取固定法三、家兔的抓取固定法一、大、小鼠的性別鑒定第二節(jié)

性別鑒定Female

Male

二、兔的性別鑒定一、大、小鼠

1.根據(jù)形態(tài)鑒定日齡（大、小情況基本一樣）第三節(jié)年齡的大致判斷日齡/d外觀形態(tài)特征1仔鼠裸體鮮紅3耳殼露出表皮4臍帶瘢痕脫落5能翻身8能爬行日齡/d外觀形態(tài)特征10能聽到聲音9～11全身被白毛，門齒長出13～15眼皮張開，能跳躍，能抓取東西18以后能自行采食，獨(dú)立生活2.根據(jù)體重鑒定日齡⑴小鼠日齡與體重的對應(yīng)日齡/d初生51015202530體重/g1.84.06.011.015.021.021.0⑵大鼠日齡與體重的對應(yīng)日齡/d初生10203040體重/g6～717～2535～5055～90100～150日齡/d50607080體重/g150～210170～240210～270240～320常規(guī)采血方法

一、大、小鼠的采血方法

1．頸靜脈或頸動脈采血

2．股靜脈或股動脈采血

3．心臟采血

4．尾部采血

5．眼眶采血

6．?dāng)囝^取血頸靜脈或頸動脈采血尾部采血心臟采血二、豚鼠的采血方法

1．耳緣剪口采血

2．心臟采血方法同大、小鼠。

3．股動脈采血方法同大、小鼠。

4．后肢背中足靜脈采血三、家兔的采血方法

1．心臟采血

2．耳中央動脈采血

3．耳靜脈采血

四、狗、貓的采血方法

1．后肢外側(cè)跗外靜脈、內(nèi)側(cè)隱靜脈、前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈采血

2．股動脈采血

3.心臟采血同大、小鼠心臟采血

4．耳緣靜脈采血同兔耳緣靜脈采血

采血方法的選擇，決定于實驗?zāi)康乃柩恳约皠游锓N類。凡用血量較少的檢驗如紅、白細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白的測定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破組織取毛細(xì)血管的血。當(dāng)需血量較多時可作靜脈采血。靜脈采血時，若需反復(fù)多次，應(yīng)自遠(yuǎn)離心臟端開始，以免發(fā)生栓塞而影響整條靜脈。研究毒物對肺功能的影響、血液酸堿平衡、水鹽代謝紊亂，需要比較動、靜脈血氧分壓、二氧化碳分壓和血液pH值以及K+、Na+、Cl-離子濃度，必須采取動脈血液。采血場所有充足的光線；室溫夏季最好保持在25～28℃，冬季，15～20℃為宜；采血用具有采用部位一般需要進(jìn)行消毒；采血用的注射器和試管必須保持清潔干燥；若需抗凝全血，在注射器或試管內(nèi)需預(yù)先加入抗凝劑。采血時要注意

部位

動物種類ａ．尾靜脈大鼠、小鼠ｂ．耳靜脈兔、狗、貓、豬、山羊、綿羊ｃ．眼底靜脈叢兔、大鼠、小鼠d．舌下靜脈兔e．腹壁靜脈青蛙、蟾蜍f．冠、腳蹼皮下靜脈雞、鴨、鵝１．取少量血

部位

動物種類ａ．后肢外側(cè)皮下小隱靜脈狗、猴、貓ｂ．前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈狗、猴、貓ｃ．耳中央動脈兔ｄ．頸靜脈狗、貓、兔ｅ．心臟豚鼠、大鼠、小鼠ｆ．?dāng)囝^大鼠、小鼠ｇ．翼下靜脈雞、鴨、鴿、鵝ｈ．頸動脈雞、鴨、鴿、鵝２．取中量血

部位

動物種類ａ．股動脈、頸動脈狗、猴、貓、兔ｂ．心臟狗、猴、貓、兔ｃ．頸靜脈馬、牛、山羊、綿羊ｄ．摘眼球大鼠、小鼠３．取大量血動物種類最大安全采血量(ml)最小致死采血量(ml)小鼠0.20.3大鼠12豚鼠510兔1040狼狗100500獵狗50200猴15604.最大安全采血量與最小致死采血量給藥途徑與方法

在動物實驗過程中，應(yīng)根據(jù)不同的實驗?zāi)康?、動物種類、藥物類型來決定動物的給藥途徑與方法。動物的給藥方法主要分為注射法和投入法兩種，不同方法按給藥途徑又分為很多具體類型。注射法分為：皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、腦膜下注射、腦內(nèi)注射、胸腔內(nèi)注射、腰椎內(nèi)注射、靜脈注射、關(guān)節(jié)腔注射和心內(nèi)注射。投入法可分為：鼻腔內(nèi)投入、胃腔內(nèi)投入、腸管內(nèi)投入、氣管內(nèi)投入和經(jīng)口腔投入。以下將各種動物的主要給藥途徑和方法做一介紹。

（一）皮下注射皮下注射部位一般狗、貓多在大腿外側(cè)，豚鼠在后腿的內(nèi)側(cè)或小腹部；大白鼠可在側(cè)下腹部。兔在背部或耳根部注射。蛙可在脊背部淋巴腔注射。（二）皮內(nèi)注射皮內(nèi)注射時需將注射的局部脫去被毛，消毒后，用左手拇指和食指按住皮膚并使之繃緊，在兩指之間，用注射器連4(1/2)細(xì)針頭，緊貼皮膚表層刺入皮內(nèi)，然后再向上挑起并再稍刺入，即可注射藥液，此時可見皮膚表面鼓起一白色小皮丘。（三）肌肉注射

肌肉內(nèi)血管豐富，注射后吸收較快，僅次于靜脈注射；又因感覺神經(jīng)較皮下少，故引起疼痛較輕，臨床上應(yīng)用較多。1、部位凡是肌肉豐富的部位，均可進(jìn)行肌肉注射。犬貓在脊柱兩側(cè)的腰部肌肉或股部肌肉。2、方法局部消毒，將針頭迅速刺入肌肉內(nèi)，抽拔活塞無回血后緩慢注入藥液。注射時，不要將針頭全刺入肌肉內(nèi)，以免折斷時不易取出。

（四）腹腔注射用大、小白鼠做實驗時，以左手抓住動物，使腹部向上，右手將注射針頭于左（或右）下腹部刺入皮下，使針頭向前推

0.5～1.0cm，再以45度角穿過腹肌，固定針頭，緩緩注入藥液，為避免傷及內(nèi)臟，可使動物處于頭低位，使內(nèi)臟移向上腹。若實驗動物為家兔，進(jìn)針部位為下腹部的腹白線離開1cm處。

（五）靜脈注射

1．兔：兔耳部血管分布清晰。兔耳中央為動脈，耳外緣為靜脈。內(nèi)緣靜脈深不易固定，故不用。外緣靜脈表淺易固定，常用。先拔去注射部位的被毛，用手指彈動或輕揉兔耳，使靜脈充盈，左手食指和中指夾住靜脈的近端，拇指繃緊靜脈的遠(yuǎn)端，無名指及小指墊在下面，右手持注射器連6號針頭盡量從靜脈的遠(yuǎn)端刺入，移動拇指于針頭上以固定針頭，放開食指和中指，將藥液注入，然后拔出針頭，用手壓迫針眼片刻。2．小白鼠和大白鼠一般采用尾靜脈注射，操作時先將動物固定在鼠筒內(nèi)或扣在燒杯中，使尾巴露出，尾部用45～50℃的溫水浸潤半分鐘或用酒精擦拭使血管擴(kuò)張，并可使表皮角質(zhì)軟化，以左手拇指和食指捏住鼠尾兩側(cè)，使靜脈充盈，用中指從下面托起尾巴，以無名指和小指夾住尾巴的末梢，右手持注射器連4(1/2)號細(xì)針頭，使針頭與靜脈平行（小于30℃），從尾下四分之一處（約距尾尖2～3厘米）處進(jìn)針，此處皮薄易于刺入，先緩注少量藥液，如無阻力，表示針頭已進(jìn)入靜脈，可繼續(xù)注入。注射完畢后把尾部向注射側(cè)彎曲以止血。如需反復(fù)注射，應(yīng)盡可能從末端開始，以后向尾根部方向移動注射。3．狗狗靜脈注射多選前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈或后肢小隱靜脈注射。注射前由助手將動物側(cè)臥，剪去注射部位的被毛，用膠皮帶扎緊（或用手抓緊）靜脈近端，使血管充盈，從靜脈的遠(yuǎn)端將注射針頭平行刺入血管，待有回血后，松開綁帶（或兩手），緩緩注入藥液。（一）部位犬貓均可在頸靜脈溝上1/3與中1/3交界處進(jìn)行靜脈注射。犬還可在腕關(guān)節(jié)以上的前內(nèi)側(cè)或腕關(guān)節(jié)以下掌中部前內(nèi)側(cè)的靜脈，或跗關(guān)節(jié)外側(cè)上方的靜脈、股內(nèi)側(cè)的靜脈等注射。注射途徑小鼠大鼠豚鼠兔狗腹腔0.2～1.01～32～55～105～15肌肉0.1～0.20.2～0.50.2～0.50.5～12～5靜脈0.2～0.51～21～53～105～15皮下0.1～0.50.5～10.5～21～33～10幾種動物不同給藥途徑的常用注射量（毫升）

（六）經(jīng)口給藥多用灌胃法，此法劑量準(zhǔn)確，適用于小白鼠、大白鼠、家兔等動物。

1．小鼠、大鼠（或豚鼠）灌胃時將灌胃針按在注射器上，吸入藥液。左手抓住鼠背部及頸部皮膚將動物固定，右手持注射器，將灌胃針插入動物口中，沿咽后壁徐徐插入食道。動物應(yīng)固定成垂直體位，針插入時應(yīng)無阻力。若感到阻力或動物掙扎時，應(yīng)立即停止進(jìn)針或?qū)⑨槹纬?，以兔損傷或穿破食道以及誤入氣管。一般當(dāng)灌胃針插入小鼠3～4cm，大鼠或豚鼠4～6cm后可將藥物注入。常用的灌胃量小鼠為0.2～

1ml，大鼠1～4ml，豚鼠為1～5ml。2．狗、兔、貓、猴

灌胃時，先將動物固定，再將特制的開口器放入動物口中，開口器之寬度可視動物口腔大小而定，

灌胃時將開口器放于上述動物上下門牙之后，并用繩將它固定于嘴部，將帶有彈性的橡皮導(dǎo)管（如導(dǎo)尿管），經(jīng)開口器上的小圓孔插入，沿咽后壁而進(jìn)入食道，此時應(yīng)檢查導(dǎo)管是否正確插入食道，可將導(dǎo)管外口置于一盛水的燒杯中，如不發(fā)生氣泡，即認(rèn)為此導(dǎo)管是在食道中，未誤入氣管，即可將藥液灌入。

給狗、兔灌胃時，也可不用開口器：狗灌胃時，用12號灌胃管，左手抓住狗嘴，右手中指由右嘴角插入，摸到最后一對臼齒后的天然空隙，胃管由此空隙順食管方向不斷插入約20cm，可達(dá)胃內(nèi)，將胃管另一端插入水中，如不出氣泡，表示確已進(jìn)入胃，而沒誤入氣管內(nèi)，即可灌入。

兔灌胃時，將兔固定在木制固定盒內(nèi)左手虎口卡住并固定好兔嘴，右手取14號細(xì)導(dǎo)管，由右側(cè)唇裂避開門齒，將導(dǎo)管慢慢插入，如插管順利，動物不掙扎，插入約15cm時，即表示插入胃內(nèi)，將藥液注入。各種動物一次灌胃能耐受的最大容積小鼠為0.5～1.0ml，大鼠4～7ml，豚鼠為4～7ml，家兔為80～150ml，狗為200～500ml。

麻醉方法

麻醉(anesthesia)的基本任務(wù)是消除實驗過程中所至的疼痛和不適感覺，保障實驗動物的安全，使動物在實驗中服從操作，確保實驗順利進(jìn)行。一、常用的麻醉劑動物實驗中常用的麻醉劑分為三類，即揮發(fā)性麻醉劑、非揮發(fā)性麻醉劑和中藥麻醉劑。

1．揮發(fā)性麻醉劑包括乙醚、氯仿等，乙醚吸入麻醉適用于各種動物，其麻醉量和致死量差距大，所以安全度亦大，動物麻醉深度容易掌握，而且麻后蘇醒較快。其缺點(diǎn)是對局部刺激作用大，可引起上呼吸道粘膜液體分泌增多，再通過神經(jīng)反射可影響呼吸、血壓和心跳活動，并且容易引起窒息，故在乙醚吸入麻醉時必需有人照看，以防麻醉