病理學(xué)-染色體病

第七章染色體病一、人類正常染色體二、染色體畸變?nèi)?、染色體病數(shù)目畸變結(jié)構(gòu)畸變

常染色體病性染色體病人類正常染色體一、一、人類染色體的特征和類型染色體的形態(tài)、結(jié)構(gòu)特征在細胞周期中，以細胞分裂中期最為典型，稱為中期染色體。如何獲得中期染色體?

細胞培養(yǎng)與染色體制備

正常人外周血或細胞

RPMI1640培養(yǎng)基+15%小牛血清=5ml

370C，培養(yǎng)68hr

加秋水仙素，培養(yǎng)2～4hr（抑制細胞分裂）

收集細胞離心，去上清液（1000rpm/10min）

低滲處理，0.075MKCI，370C，25min

預(yù)固定，甲醇：冰醋酸=3：1

離心，去上清液（1000rpm/10min）

重復(fù)固定三次制片，染色，觀察，染色體分析

1、人體染色體數(shù)目、結(jié)構(gòu)

染色單體次縊痕短臂（p）長臂（q）隨體常染色質(zhì)區(qū)異染色質(zhì)區(qū)主縊痕（初級縊痕）每一個中期染色體均由兩條染色單體構(gòu)成，每一條染色單體由一個DNA分子螺旋而成。兩條染色單體互稱為姐妹染色單體。兩條染色單體通過一個著絲粒彼此連接。著絲粒將染色體分為兩臂，長臂（q）和短臂（p）。2、人類染色體的三種形態(tài)：1/2~5/8中央著絲粒染色體5/8~7/8亞中著絲粒染色體7/8近端著絲粒染色體中部亞中部近端部

——末端處染色體的四種類型：1/2~5/8中央著絲粒染色體5/8~7/8亞中著絲粒染色體7/8近端著絲粒染色體中部亞中部近端部端部

——末端處根據(jù)Denver體制，按相對長度、臂率和著絲粒指數(shù)把人類46條染色體分為23對，7個組。其中1～22對為男女共有，稱為常染色體(autosome)，另一對與性別有關(guān)，在組成上男女有所不同，稱為性染色體(sexchromosome)。XX代表女性，XY代表男性。丹佛體制：1960年，在美國Denver召開了第一屆國際細胞遺傳學(xué)會議，討論并確定正常人有絲分裂染色體的標準命名體制。2、人類染色體正常核型

核型（Karyotype):將一個體細胞中全套染色體按一定方式排列起來，構(gòu)成圖像。核型分析：將待測細胞的全套染色體按照Denver體制配對、排列后，分析確定其是否與正常核型的異同，稱為核型分析(karyotypeanalysis)。核型的描述

染色體總數(shù)，性染色體正常男性46

，XY正常女性46，XX正常男性：46，XY正常女性：46，XX3.染色體顯帶方法1968年，瑞典細胞化學(xué)家Caspersson1、帶型(bandingpattern)：應(yīng)用顯帶技術(shù)，將人類24種染色體顯示出的各自特異的帶紋。Q帶：氮芥喹吖因(QM)G帶：胰酶＋GiemsaR帶：經(jīng)鹽處理的標本＋Giemsa

反帶。研究cs的末端缺失和結(jié)構(gòu)重排。C帶：NAOH＋Giemsa

。-------著絲粒和副縊痕。N帶：硝酸銀。NOR----隨體T帶：長、短臂末端

顯帶染色體：用特殊的染色方法使染色體沿其長軸顯示出明暗交替或染色深淺不同的橫紋——帶。pq32112346432152131212123541213241p31常見帶型的類型、特點及臨床應(yīng)用1、Q帶（Qbanding）：Q顯帶用芥子喹吖因（QM）或鹽酸喹吖因（QH）等熒光染料對染色體標本進行染色，然后在熒光顯微鏡下進行觀察。但Q帶保存時間短，而且需要在熒光顯微鏡下進行觀察，因而，限制了Q顯帶技術(shù)的應(yīng)用。2、G顯帶（Gbanding）：染色體標本用熱、堿、蛋白酶等預(yù)處理后，再用Giemsa染色，可以顯示出與Q帶相似的帶紋。在光學(xué)顯微鏡下，可見Q帶亮帶相應(yīng)的部位，被Giemsa染成深帶，而Q帶暗帶相應(yīng)的部位被Giemsa染成淺帶。這種顯帶技術(shù)稱為G顯帶。G顯帶克服了Q顯帶的缺點，G帶標本可長期保存，而且可在光學(xué)顯微鏡下觀察，因而得到了廣泛的應(yīng)用，是目前進行染色體分析的常規(guī)帶型。常見帶型的類型、特點及臨床應(yīng)用G顯帶3、R顯帶（Rbanding）：所顯示的帶紋與G帶的深、淺帶帶紋正好相反，故稱為R帶（reversedband）。G帶淺帶如果發(fā)生異常，不易發(fā)現(xiàn)和識別，而R顯帶技術(shù)可以將G帶淺帶顯示出易于識別的深帶，所以R顯帶對分析染色體G帶淺帶部位的結(jié)構(gòu)改變有重要作用。4、C顯帶（Cbanding）：專門顯示著絲粒的顯帶技術(shù)。C顯帶也可使第1、9、16號和Y染色體長臂的異染色質(zhì)區(qū)染色。因而，C帶可用來分析染色體這些部位的改變。5、

T顯帶（Tbanding）：專門顯示染色體端粒的顯帶技術(shù)，用來分析染色體端粒。6、

N顯帶（Nbanding）：專門顯示核仁組織區(qū)的顯帶技術(shù)。7.高分辨顯帶（high-resolutionbanding）：分裂中期一套單倍染色體一般顯示320條帶。70年代后期，采用細胞同步化方法和改進的顯帶技術(shù)，獲得細胞分裂前中期、晚前期或早前期的分裂相，可以得到帶紋更多的染色體，能顯示550-850條帶，甚至2000條帶以上。高分辨顯帶技術(shù)，對染色體的分析達到了亞帶（subband）的水平。使我們能夠確認那些更為微小的染色體結(jié)構(gòu)改變了。

應(yīng)用

1、基因定位2、檢測染色體的數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常3、遺傳病的診斷和產(chǎn)前診斷FISH技術(shù)的發(fā)展1、單色FISH2、多色FISH（24種染色）

3、DNA纖維FISH4、比較基因組雜交1、單色FISH

2、多色FISH（24種染色）SCE（sisterchromatidexchange）顯示方法：

5-BrdU→T5-BrdU2、帶的命名人類體細胞的正常核型（Denver體制）

組染色體號主要特征A組B組C組D組E組F組G組123亞中著絲粒染色體中央著絲粒染色體4——5亞中著絲粒染色體、無隨體6——12、X亞中著絲粒染色體大小13——15近端著絲粒染色體、有隨體161718亞中著絲粒染色體中央著絲粒染色體19——20中央著絲粒染色體21——22、Y近端著絲粒染色體、有隨體Y染色體略大、長臂平行伸展、無隨體三、人類細胞遺傳學(xué)研究的新進展（一）染色體高分辨顯帶早中期、晚前期550-----850（二）微細胞遺傳學(xué)定義：運用人類高分辨染色體顯帶技術(shù)，研究染色體細微結(jié)構(gòu)及結(jié)構(gòu)改變后的遺傳效應(yīng)的科學(xué)。對象：染色體微細變化如：21三體綜合征21q22.3（三）分子細胞遺傳學(xué)----在微細胞遺傳學(xué)基礎(chǔ)上

4500KB--------幾十KB到2000KB1、熒光原位雜交

2、DNA纖維熒光原位雜交

3、染色體涂染