姬松茸多糖對哮喘模型小鼠氣道炎癥和h2類細胞因子水平的影響

姬松茸多糖對哮喘模型小鼠氣道炎癥和h2類細胞因子水平的影響

氣管哮喘是由嗜酸性粒細胞、大細胞、淋巴氏合金等疾病細胞參與的呼吸道慢性炎癥。當th1和th2的免疫平衡受到破壞時，th2占主導地位后，th2細胞將通過釋放白色介質素（il）-4、il-5和il-13等炎癥細胞因子，促進ige的形成和釋放，以及嗜酸性細胞的聚集和激活，誘導玻璃細胞過度分泌。加劇呼吸道炎癥的發(fā)生。因此，減少th2炎癥細胞因子是哮喘免疫治療的研究熱點。季松又名胡普，屬于亞硝泮、層菌、傘菌、蘑菇科和蘑菇科。它來自巴西，是一種食品菌。它的深層發(fā)酵體和發(fā)芽液中含有各種生物活動，其中糖作為主要活性物質。結果表明，季松糖能降低血壓，腫瘤、輻射和氧化反應。初始研究結果表明，季松糖對大鼠呼吸道炎癥和th2細胞因子水平的影響具有抑制作用。1材料和方法1.1細胞因子及儀器實驗動物選擇雌性Balb/c小鼠40只,體質量為(18±4)g,由延邊大學實驗動物中心提供,合格證號為SCXK(吉)2011-0007.卵清蛋白(OVA)及氫氧化鋁粉均購自美國Sigma公司;細胞因子IL-4,IL-5,IL-13檢測試劑盒均購自長春百奧生物有限公司.儀器:霧化吸入器(大連醫(yī)療器械廠U219,歐姆龍);酶聯(lián)免疫檢測儀(RT-2100C,美國).姬松茸多糖由延邊大學藥學院鄭昌吉副教授提供.1.2方法1.2.1動物和組成選擇雌性Balb/c小鼠40只,按照隨機數(shù)字表法分為4個組,即正常對照組、哮喘模型組、姬松茸多糖小、大劑量組,每組各為10只.1.2.4肺組織病理學的觀察取左肺常規(guī)固定、脫水、包埋、切片、HE和三色染色,觀察肺組織病理學改變.1.2.5統(tǒng)計學處理采用SPSS14.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析.實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準偏差表示,多組均數(shù)比較采用單因素方差分析,其樣本均數(shù)之間的兩兩比較采用LSD法,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義.2結果2.1嗜酸性事業(yè)細胞、淋巴細胞計數(shù)變化與正常對照組比較,哮喘模型組小鼠BALF中炎癥細胞總數(shù)及中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、淋巴細胞計數(shù)均明顯升高(P<0.05);與哮喘模型組比較,姬松茸多糖小、大劑量組小鼠BALF中炎癥細胞總數(shù)及中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、淋巴細胞計數(shù)均明顯降低(P<0.05).見表1.2.2il-13、il-13水平與正常對照組比較,哮喘模型組小鼠BALF中IL-4,IL-5,IL-13水平均明顯升高(P<0.05);與哮喘模型組比較,姬松茸多糖小、大劑量組小鼠BALF中細胞因子IL-4,IL-5,IL-13水平均明顯降低(P<0.05).見表2.2.3對小鼠肺組織病理學改變的影響正常對照組小鼠肺組織無明顯病理學改變.哮喘模型組小鼠肺組織切片HE染色觀察可見支氣管管腔狹窄、上皮細胞損傷、支氣管及血管周圍有大量炎癥細胞浸潤,以嗜酸性粒細胞為主.姬松茸多糖小、大劑量組小鼠肺組織病理學改變與哮喘模型組相比較明顯減輕.見圖1.3不同模型小鼠th2和il-13變化支氣管哮喘的主要發(fā)病機制為Th1/Th2細胞因子免疫平衡被破壞,Th1反應減弱,Th2反應增強從而釋放IL-4,IL-5,IL-13等炎癥細胞因子所致.Th2細胞亞群主要釋放IL-4,IL-5,IL-13等炎癥細胞因子,可誘導嗜酸性粒細胞的產(chǎn)生和聚集,協(xié)助B細胞產(chǎn)生IgE等抗體,介導體液免疫應答及Ⅰ型變態(tài)反應.本實驗采用哮喘模型觀察了Th2型細胞因子IL-4,IL-5,IL-13的水平變化,結果表明哮喘模型組小鼠IL-4,IL-5,IL-13水平均明顯升高,提示Th2優(yōu)勢顯著.本實驗結果亦表明,姬松茸多糖干預后,不僅肺組織病理學改變較哮喘模型組顯著減輕,且小鼠BALF中炎癥細胞數(shù)計數(shù)、IL-4,IL-5,IL-13水平均明顯降低,提示姬松茸多糖對哮喘模型小鼠具有保護作用,其機制可能與下調Th2優(yōu)勢、減少炎癥細胞浸潤有關.1.2.2對姬松茸多糖的誘導實驗樣本的獲取與處理參照文獻中的方法.除正常對照組小鼠外,其他各組小鼠分別從第1,14d開始致敏,每只小鼠腹腔注射給予混合液(OVA20μg、氫氧化鋁凝膠1mg)200μL.在致敏后的第21,22,23d,分別霧化吸入給予1%(體積分數(shù))OVA溶液20min.正常對照組以給予生理鹽水代替OVA進行腹腔注射及霧化吸入.姬松茸多糖小、大劑量組于致敏后第17~23d分別灌胃給予姬松茸多糖200,400mg/kg進行治療,對照組和哮喘模型組分別灌胃給予同等劑量的生理鹽水,灌胃1h后給予霧化吸入.最后1次霧化吸入結束48h后將小鼠處死.以PBS1mL行支氣管肺泡灌洗,來回沖洗3次,收集、混勻支氣管肺泡灌洗液(BALF).取50μL加入等劑量的細胞計數(shù)液,用細胞計數(shù)板計數(shù)細胞.之后于4℃條件下,以3000r/min離心10min,取上清液,-80℃超低溫冰箱保存.細胞涂片,在高倍顯微鏡下觀察嗜酸性粒細胞、中性粒細胞及淋巴細胞,進行分類計數(shù)