蜂蜜產(chǎn)地來源及摻偽判別方法研究進(jìn)展

蜂蜜產(chǎn)地來源及摻偽判別方法研究進(jìn)展

0蜂蜜摻假檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用背景根據(jù)現(xiàn)代研究，蜂蜜含有180多種成分，葡萄糖和糖果是主要成分，其次是水、葡萄糖、礦物質(zhì)、維生素、蛋白質(zhì)和氨基酸。中醫(yī)的臨床和實(shí)踐表明，蜜蜂具有改善脾胃功能、促進(jìn)消化、鎮(zhèn)靜神經(jīng)、提高身體素質(zhì)、促進(jìn)兒童生長(zhǎng)發(fā)育等功效。同時(shí)，這項(xiàng)研究還表明，蜜蜂對(duì)治療燒傷和傷口、促進(jìn)潰瘍愈合、傷口愈合和心血管疾病的輔助治療方面具有良好的療效。隨著人們生活水平的提高，人們對(duì)蜂蜜及其產(chǎn)品的特性、食用和藥用價(jià)值有了深刻的理解。蜂蜜的需求增加，對(duì)質(zhì)量的要求也在增加。但是由于利益的驅(qū)動(dòng),摻假制售假蜂蜜的現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生,其中常見的摻假方法主要是摻入蔗糖、果糖、葡萄糖、葡萄糖糖漿等.有些廠家甚至以葡萄糖、葡萄糖糖漿、果糖糖漿、蜂蜜香精等替代原料制造假蜂蜜,以天然蜂蜜的形式投放市場(chǎng),獲取暴利,這不僅損害消費(fèi)者的利益、造成了蜂蜜市場(chǎng)的混亂,同時(shí)也會(huì)影響一個(gè)國家蜂蜜的進(jìn)出口貿(mào)易.國際食品法典委員會(huì)、歐盟及其他國家都制定了蜂蜜品質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)以及蜂蜜的真實(shí)性推薦鑒別方法.然而,近年來由于蜂蜜造假向規(guī)?；?、專業(yè)化發(fā)展,造出的假蜂蜜產(chǎn)品感官指標(biāo)和部分理化指標(biāo)都與天然蜂蜜產(chǎn)品極為相似,假蜂蜜的市場(chǎng)占有率越來越大,因此,建立準(zhǔn)確、快速、有效的蜂蜜摻假檢測(cè)方法是食品安全和蜂蜜生產(chǎn)研究中的一個(gè)熱點(diǎn).筆者綜述了國外研究工作者近年來在識(shí)別蜂蜜產(chǎn)地及植物來源、辨別蜂蜜真?zhèn)畏矫嫠_展的一些研究工作,主要包括蜂蜜理化指標(biāo)分析、色譜及其聯(lián)用技術(shù)、光譜方法、同位素比率分析法、電子鼻以及差熱分析、生物免疫技術(shù)等,下面分別予以簡(jiǎn)單介紹.1利用蜜蜂的化學(xué)參數(shù)進(jìn)行蜜蜂分類蜂蜜的理化指標(biāo)主要包括密度、黏度、流變性、水分、淀粉酶值、羥甲基糠醛(HMF)和氨基酸、金屬礦物質(zhì)元素、pH值、電導(dǎo)率等.通過測(cè)定這些參數(shù),可對(duì)蜂蜜進(jìn)行質(zhì)量控制或摻假的初步判斷.傳統(tǒng)的理化檢驗(yàn)單純利用其中個(gè)別指標(biāo)進(jìn)行蜂蜜的真?zhèn)舞b別,存在相當(dāng)大的局限性.S.Popek利用蜂蜜的3個(gè)主要物理參數(shù)(總灰分、總酸度和動(dòng)態(tài)黏度)對(duì)73種蜂蜜進(jìn)行分類辨別分析,正確分類率達(dá)到98.67%.S.Serrano等利用水分、HMF、淀粉糖化酵素、pH值、內(nèi)酯酸、電導(dǎo)率、轉(zhuǎn)化酶、葡萄糖、果糖、蔗糖、脯氨酸、葡萄糖活化酶、活性水及不溶固形物等化學(xué)參數(shù)對(duì)安達(dá)盧西亞的兩種不同植物來源的蜂蜜進(jìn)行了分類分析,數(shù)據(jù)處理采用方差分析,挑出了對(duì)分類影響最顯著(方差百分比達(dá)78.95%)的6種化學(xué)參數(shù)(酸、水分、轉(zhuǎn)化酶、總糖度、電導(dǎo)率和固形物),用主成分分析和逐步辨別分析(SDA)建立數(shù)學(xué)模型進(jìn)行蜂蜜分類,準(zhǔn)確分類率達(dá)到96.6%.M.V.Baroni等利用蜂蜜的化學(xué)參數(shù)和微量礦物質(zhì)對(duì)阿根廷南北不同產(chǎn)地的蜂蜜進(jìn)行了辨別分析,葡萄糖、游離酸、pH、游離氨基酸、鈣和鋅離子被發(fā)現(xiàn)是影響分類的22個(gè)參數(shù)中最重要的6個(gè)參數(shù),這6個(gè)參數(shù)被用在逐步回歸和K-最鄰近判別分析中,對(duì)不同產(chǎn)地的蜂蜜分類的正確率達(dá)到99%,但是,當(dāng)22個(gè)參數(shù)全用時(shí)正確分類率只有83%.R.Fernandez-Torres等利用等離子光譜測(cè)定蜂蜜中的11種元素(Zn、P、B、Mn、Mg、Cu、Ca、Ba、Sr、Na和K),對(duì)40個(gè)不同地方包含了4種不同植物來源的蜂蜜進(jìn)行了分類研究,將獲得的數(shù)據(jù)分別用有監(jiān)督和無監(jiān)督模式識(shí)別方法進(jìn)行辨別分析,發(fā)現(xiàn)不同花種來源的蜂蜜辨別難度差異較大,桔子花和迷迭香花來源的蜂蜜最難辨別;L.A.Marghitas等利用前面所述的化學(xué)物理參數(shù)以及總酚量、總類黃酮量和蜂蜜的抗氧化活性參數(shù)也進(jìn)行了類似的研究.2蜂蜜品質(zhì)分析色譜方法是蜂蜜品質(zhì)鑒別和摻假鑒別中常用的方法,主要運(yùn)用包括氣相色譜、液相色譜及其聯(lián)用方法分析蜂蜜中的糖類、類黃酮、多酚、有機(jī)酸、揮發(fā)性物質(zhì)、氨基酸以及礦物質(zhì)等,用這些標(biāo)記物進(jìn)行蜂蜜品質(zhì)和摻假鑒別分析.2.1蜂蜜中的標(biāo)志化合物氣相色譜及其聯(lián)用技術(shù)主要檢測(cè)蜂蜜中的揮發(fā)性成分,由于不同植物來源的蜂蜜或摻加了不同物質(zhì)的假蜂蜜含有不同揮發(fā)性成分,從而可判定其植物來源、產(chǎn)地或者是否摻假.K.A.Aliferis等運(yùn)用頂空固相微萃取提取蜂蜜中的揮發(fā)成分,然后直接進(jìn)行GC-MS分析,將獲取的數(shù)據(jù)分別運(yùn)用偏最小二乘-辨別分析(PLS-DA)、SIMCA聚類、正交偏最小二乘-逐級(jí)聚類(OPLS-HCA)等進(jìn)行分析,所得結(jié)果進(jìn)行對(duì)比發(fā)現(xiàn)OPLS-HCA的誤判率最低,只有1.3%,同時(shí)通過MS檢驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)蜂蜜中的標(biāo)志性化學(xué)物質(zhì);A.I.Ruiz-Matute等用GC和GC-MS對(duì)蜂蜜進(jìn)行摻假研究,發(fā)現(xiàn)被檢測(cè)蜂蜜經(jīng)熱處理后,在摻假蜂蜜中能檢測(cè)到二果糖酸酐(DFA),而在天然蜂蜜中檢測(cè)不到DFA,因此,作者認(rèn)為DFA可作為標(biāo)志物鑒別蜂蜜中是否摻入了高果糖玉米糖漿(HFCS)和轉(zhuǎn)化糖(IS);M.L.Sanz等利用GC-MS通過對(duì)蜂蜜中的16種二糖和9種三糖進(jìn)行定性和定量檢測(cè),鑒別蜂蜜是否用糖漿摻假;K.L.Barry等用氣相色譜和模式識(shí)別方法對(duì)非洲的蜂蜜做了區(qū)分鑒定,結(jié)果顯示,模式識(shí)別遺傳算法與人工智能和進(jìn)化算法相結(jié)合可以很好地將歐洲和非洲的蜂蜜進(jìn)行分離.全二維氣相色譜—飛行時(shí)間質(zhì)譜(GC-GC-TOFMS)也已經(jīng)被應(yīng)用于蜂蜜產(chǎn)地、植物來源摻假的研究中.如I.Stanimirova等和C.Tomas等分別使用頂空固相微萃取(HS-SPME)和GC-GC-TOFMS相結(jié)合的方法來分析不同產(chǎn)地和植物來源的蜂蜜的揮發(fā)物;I.Stanimirova等應(yīng)用LDA法、SIMCA法、DPLS法、SVM法和最近提出的PUK法調(diào)查和研究了蜂蜜的產(chǎn)地來源,并取得了很好的效果;C.Tomas等運(yùn)用化學(xué)計(jì)量方法,將人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)同多層感知器相結(jié)合(ANN-MLP)進(jìn)行檢測(cè)分析,對(duì)來自歐洲一些國家和地區(qū)的374個(gè)蜂蜜樣品進(jìn)行了鑒定分析,都取得了很好的預(yù)測(cè)結(jié)果和準(zhǔn)確的類別鑒定結(jié)果.2.2蜂蜜品質(zhì)分析蜂蜜中的氨基酸、酚類、類黃酮化合物等經(jīng)常用作鑒別蜂蜜產(chǎn)地和植物來源的標(biāo)記物.F.A.Tomas-Barberan等用反相C-18柱梯度洗脫分析了不同植物來源的蜂蜜中的類黃酮物質(zhì),發(fā)現(xiàn)類黃酮可以作為鑒別不同植物來源的蜂蜜標(biāo)記物;C.P.Arquillue等將蜂蜜中的蛋白質(zhì)用酸水解后,采用HPLC測(cè)定出16種氨基酸,通過辨別分析可以確定西班牙本地的蜂蜜和其他蜂蜜的差別;M.Pawlowska等應(yīng)用HPLC測(cè)定蜂蜜中脯氨酸、亮氨酸及苯丙氨酸的總量以及它們的對(duì)映體比例來研究不同的蜂蜜差別,發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地和不同植物來源的蜂蜜中D-亮氨酸和D-苯丙氨酸存在顯著差別,可以作為標(biāo)記物對(duì)蜂蜜進(jìn)行品質(zhì)鑒別;E.Jorg等發(fā)現(xiàn)大多數(shù)蜂蜜中含有甲酯-4-羥基苯甲酸甲酯、香草酸甲酯和丁香酸甲酯,但是含量不同,有些蜂蜜中甚至可能不含其中的任何一種,由此可以作為蜂蜜產(chǎn)地和來源的鑒別指標(biāo),如洋槐蜜中就不含丁香酸甲酯,可以和其他蜂蜜區(qū)分開;J.F.Cotte等利用HPLC技術(shù)對(duì)在油菜蜜和冷杉蜜中摻入糖漿的蜂蜜進(jìn)行摻假鑒別,結(jié)果表明,蜂蜜中摻入糖漿的檢測(cè)限可以達(dá)到10%~20%.蜂蜜中糖的組成經(jīng)常被用作判定蜂蜜摻假的指標(biāo),統(tǒng)計(jì)分析顯示糖中HFCS、鈣、水分、灰分含量可以作為真假蜂蜜鑒別的標(biāo)記物.高效陰離子交換色譜法利用單糖在堿性溶液中以陰離子形式存在,可以在陰離子交換柱上被保留并得到分離,然后利用不同的檢測(cè)器對(duì)糖類進(jìn)行檢測(cè)從而進(jìn)行摻假辨別;V.Morales等利用高效陰離子交換色譜對(duì)分別摻入了5%、10%和20%的糖漿的蜂蜜進(jìn)行研究,用脈沖安培檢測(cè),并用活性炭去除單糖和雙糖,只留下低聚糖,分析發(fā)現(xiàn)除普遍的玉米糖漿(CS)和HFCS摻假外,還存在不同程度的異構(gòu)糖漿蜂蜜摻假(20%和40%).這種方法可以檢測(cè)到蜂蜜中最低5%的CS;B.Y.Christophe等通過高效陰離子交換法對(duì)蜂蜜中微量和重要的糖進(jìn)行分離,用脈沖安培檢測(cè),提出了一種新的化學(xué)計(jì)量方法———COFRAC法,該法可以最大限度地提取色譜分離中的化學(xué)信息.所獲得的數(shù)據(jù)分別用PCA-LD和人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)(ANN)進(jìn)行模式識(shí)別分析,結(jié)果顯示對(duì)真假蜂蜜的分離準(zhǔn)確率分別達(dá)到93%和100%.他們還用該法對(duì)不同摻假程度(含量從10%到40%)的假蜂蜜和真蜂蜜進(jìn)行了模式識(shí)別研究,結(jié)果表明,通過PLS建立的相應(yīng)線性回歸模型,可以很好地將真假蜂蜜區(qū)別開.3光譜法3.1紅外光譜分析技術(shù)紅外光譜技術(shù)包括近紅外和中紅外光譜技術(shù),是蜂蜜質(zhì)量控制和摻假鑒別中最常用的分析技術(shù),其原理是利用真蜂蜜和摻假蜂蜜中以糖類為主的化學(xué)成分的不同獲得光譜數(shù)據(jù),然后利用模式識(shí)別技術(shù)對(duì)這些數(shù)據(jù)進(jìn)行辨別分析.其中,S.Sivakesava研究小組和G.Downey研究小組在此方面進(jìn)行了大量探索研究.由于蜂蜜品種中反映不同種類的特征性成分含量低,以及不同品種蜂蜜之間所含的主要成分如糖及水分差別不大,因此運(yùn)用紅外光譜進(jìn)行種類和摻假鑒別必須依賴數(shù)據(jù)處理方法,以提高預(yù)測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度和精確度.在這些研究中,他們主要采用LDA、典型變量分析(CVA)、PCA和PLS等對(duì)摻加了葡萄糖、果糖、蔗糖和糖漿的假蜂蜜進(jìn)行了鑒別分析,都取得了比較滿意的分析結(jié)果.此外,G.Downey小組用葡萄糖與果糖按質(zhì)量比配制一定比例的摻假溶液加入到真蜂蜜中,然后在近紅外和中紅外光譜范圍內(nèi)對(duì)摻有不同比例葡萄糖和果糖的蜂蜜樣品進(jìn)行判別分析.得到的光譜數(shù)據(jù)分別用PLS、K-最近鄰法(KNN)和有監(jiān)督聚類方法(SIMCA)進(jìn)行摻假判別分析,研究發(fā)現(xiàn)摻加假蜂蜜的量越大正確分類的準(zhǔn)確率越高,質(zhì)量比為14%的摻假樣品的分類準(zhǔn)確率可以達(dá)到99%,之后他們又對(duì)分別摻有轉(zhuǎn)化甜菜糖漿、高果玉米糖漿、部分轉(zhuǎn)化甘蔗糖漿、葡萄糖糖漿和甜菜蔗糖的蜂蜜樣品進(jìn)行了判別分析,大部分摻假蜂蜜的分類正確率均在90%以上,只有摻加高果玉米糖漿和轉(zhuǎn)化甜菜糖漿的摻假樣品因判別正確率比較低(分別為75%和71.4%),認(rèn)為不能與真實(shí)蜂蜜區(qū)別開來.由于紅外光譜對(duì)微量成分的不敏感和水中氫鍵的影響,以及隨著摻假技術(shù)的提高,紅外光譜在分析蜂蜜摻假中的應(yīng)用需要進(jìn)一步探索和改進(jìn).3.2不同凈化方法對(duì)于蜂蜜理化指標(biāo)的分析可采用前表面熒光光譜法前表面熒光光譜法進(jìn)行了蜂蜜中含有可以產(chǎn)生熒光的多酚以及氨基酸等,氨基酸主要來源于植物花粉,可以作為蜂蜜產(chǎn)地、植物來源辨別和摻假分析的標(biāo)記物.R.Kaspar等用前表面熒光光譜法對(duì)11種單一花蜜和混合花蜜類型(371種樣品)進(jìn)行了鑒定分類.光譜數(shù)據(jù)處理采用化學(xué)計(jì)量學(xué)PCA和LDA分析建立數(shù)學(xué)模型,分類正確率均大于90%,該研究表明了前表面熒光光譜法對(duì)蜂蜜的植物來源鑒定的可能,但是該法需要大量已知蜂蜜產(chǎn)地的蜂蜜熒光數(shù)據(jù)庫才能保證結(jié)果的可靠.R.Karoui等用前表面熒光光譜對(duì)瑞士生產(chǎn)的蜂蜜樣品按植物來源進(jìn)行了分類.蜂蜜熒光數(shù)據(jù)來自于7種蜜源植物,即洋槐蜜、薔薇蜜、栗樹蜜、油菜蜜、甘露蜜、高山花蜜和低洼花蜜.研究把通過PCA得到的前10個(gè)主成分?jǐn)?shù)據(jù)匯總為一個(gè)矩陣,再進(jìn)行多變量因子辨別分析,對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品和驗(yàn)證樣品的分類準(zhǔn)確度分別達(dá)到100%和90%.結(jié)論表明了所研究的蜂蜜在不同的環(huán)境因素下,各自的理化性能也有所不同.同時(shí)還證明前表面熒光光譜法有望適用于蜂蜜的植物來源鑒定.3.3蜂蜜的拉曼光譜定量分析M.M.Paradkar等利用傅立葉變換拉曼光譜,對(duì)3類摻入了甘蔗轉(zhuǎn)化糖漿和甜菜轉(zhuǎn)化糖漿制成的假蜂蜜進(jìn)行研究,在200~1600cm-1的光譜范圍內(nèi)測(cè)得的拉曼光譜數(shù)據(jù),用化學(xué)計(jì)量學(xué)方法PLS和PCR進(jìn)行了摻假定量分析,利用LDA和CVA對(duì)蜂蜜是否摻假進(jìn)行判別,判別正確率達(dá)到了96%.研究還表明,如果能建立所有植物來源蜂蜜的拉曼光譜數(shù)據(jù),鑒別正確率將會(huì)大大提高.3.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析A.James等用氫質(zhì)子核磁共振波譜對(duì)5個(gè)國家的10個(gè)不同地區(qū)的蜂蜜進(jìn)行了產(chǎn)地辨別分析,通過氫質(zhì)子核磁共振波譜獲得蜂蜜的指紋波譜數(shù)據(jù),分別用偏最小二乘結(jié)合辨別分析(PLS-LDA)、兩級(jí)遺傳算法(Two-stageGP)、偏最小二乘結(jié)合遺傳算法(PLS-GP)3種模式識(shí)別方法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,結(jié)果顯示3種算法對(duì)阿根廷蜂蜜和非阿根廷蜂蜜區(qū)分的準(zhǔn)確率分別為75.8%、94.5%和96.2%,該法還討論了數(shù)學(xué)建模時(shí)對(duì)分類影響最大的蜂蜜的化學(xué)成分,并第一次發(fā)現(xiàn)了蜂蜜中存在的葫蘆巴堿及其對(duì)蜂蜜識(shí)別過程的影響.4其他方法4.1蜂蜜摻假及分類方法利用無線網(wǎng)絡(luò)檢測(cè)結(jié)果,和一般工電子鼻是利用氣體傳感器陣列的響應(yīng)圖案來識(shí)別氣味的電子系統(tǒng).電子鼻技術(shù)具有響應(yīng)時(shí)間短、檢測(cè)速度快、重復(fù)性好、不需要復(fù)雜的預(yù)處理過程,并且能避免人為誤差的特點(diǎn);WeiZhenbo等對(duì)8種不同種類的植物來源的蜂蜜和5個(gè)不同產(chǎn)地的阿拉伯蜂蜜進(jìn)行了分析研究,以確定它們的植物來源和產(chǎn)地.利用電子鼻獲得的數(shù)據(jù)和主成分分析(PCA)、聚類分析(CA)以及ANN相結(jié)合,結(jié)果顯示ANN對(duì)蜂蜜的植物來源和產(chǎn)地的確認(rèn)正確率可以達(dá)到95%,該方法同樣可以用作蜂蜜的摻假識(shí)別.J.Lammertyn等利用zNose電子鼻技術(shù)對(duì)蜂蜜的摻假進(jìn)行了研究.zNose電子鼻是一種尖端的新型化學(xué)分析儀器,它以超速氣相色譜分析(FGC)和聲表面波(SAW)檢測(cè)器聯(lián)用為基礎(chǔ),將氣味的化學(xué)色譜轉(zhuǎn)化成高分辨率的可視化嗅覺圖像(VaporPrint或稱指紋氣味),然后根據(jù)這些嗅覺圖像來識(shí)別不同的氣味.通過采用傳感器陣列和模式識(shí)別技術(shù)對(duì)分析對(duì)象進(jìn)行分類.J.Lammertyn等用zNose電子鼻得到真蜂蜜和摻假蜂蜜的VaporPrint,由于真?zhèn)畏涿鄣幕瘜W(xué)組成不同,產(chǎn)生的芳香氣味不同,該法將電子鼻取得的數(shù)據(jù)用PCA和典型辨別分析(CDA)相結(jié)合,對(duì)15到16種真假蜂蜜的分類正確率到達(dá)了94%.L.Roland等也用電子鼻結(jié)合一個(gè)改進(jìn)的ANN方法對(duì)6種不同的蜂蜜進(jìn)行了分類研究,他們用10種不同的半導(dǎo)體氣體傳感器獲取蜂蜜的氣味數(shù)據(jù),然后用改進(jìn)的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)及標(biāo)準(zhǔn)BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)方法對(duì)比進(jìn)行蜂蜜分類研究,結(jié)果顯示改進(jìn)的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)分類正確率達(dá)到99.6%,而標(biāo)準(zhǔn)BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)方法分類正確率只有91.3%,說明了不同的數(shù)據(jù)處理方法在蜂蜜分類中的重要性.4.2免疫印跡技術(shù)免疫印跡(immunoblotting)又稱蛋白質(zhì)印跡(Westernblotting),是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測(cè)復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法.該法將混合抗原樣品在凝膠板上進(jìn)行單向或雙向電泳分離,然后取固定化基質(zhì)膜與凝膠相貼.在印跡紙的自然吸附力、電場(chǎng)力或其他外力作用下,使凝膠中的單一抗原組分轉(zhuǎn)移到印跡紙上,并且固相化.最后應(yīng)用免疫同位素探針或免疫酶探針等,對(duì)抗原固定化基質(zhì)膜進(jìn)行檢測(cè)和分析,用于鑒定某種蛋白,也可對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分析.J.Sy咬imua等用多克隆技術(shù)分析不同產(chǎn)地、植物來源蜂蜜中的蛋白質(zhì),研究了蜂蜜中最豐富的RJ蛋白(55Ka蛋白),發(fā)現(xiàn)RJ蛋白中最常見的Apalbumin-1蛋白可作為蜂蜜產(chǎn)地和摻偽鑒別的標(biāo)記物,免疫印跡技術(shù)取得了滿意的結(jié)果,同時(shí)研究了RJ蛋白在小鼠中的活性表達(dá).M.V.Baroni等以蜂蜜中的花粉蛋白作為化學(xué)標(biāo)記,用免疫印跡技術(shù)測(cè)定蜂蜜的植物來源和產(chǎn)地,試驗(yàn)以向日葵和桉樹兩種植物的花粉蛋白制作抗體,并對(duì)來源于這兩種植物的蜂蜜進(jìn)行識(shí)別,結(jié)果發(fā)現(xiàn)可以很好地把其他植物來源的蜂蜜和它們分開,該法也可用作蜂蜜真?zhèn)蔚蔫b別,其不足是要選擇好SDS膠濃度,否則目標(biāo)蛋白得不到較好的分辨,另外還需要注意假陽性情況的出現(xiàn).4.3dsc曲線特性差示掃描量熱法(DSC)是20世紀(jì)60年代以后出現(xiàn)的一種熱分析方法,它是在程序控制溫度下,測(cè)量輸入到物質(zhì)和參比物的溫度差和溫度的關(guān)系的一種技術(shù).DSC能定量地測(cè)定各種熱力學(xué)參數(shù)(如熱焓、熵和比熱等)和動(dòng)力學(xué)參數(shù),它以樣品吸熱或放熱的速率,即熱流率dH/dt(單位毫焦/秒)為縱坐標(biāo),以溫度T或時(shí)間t為橫坐標(biāo),記錄到的曲線稱DSC曲線.鑒于蜂蜜和糖漿不同的熱力學(xué)性質(zhì),它們的差別將會(huì)在DSC曲線圖中表現(xiàn)出來,因此可以依此對(duì)摻假蜂蜜進(jìn)行鑒別.DSC具有分辨能力高、靈敏度高、快速、樣品需要量少的優(yōu)點(diǎn).Cordella等用該法進(jìn)行蜂蜜品種和摻假鑒別,試驗(yàn)設(shè)計(jì)首先用DSC確定純蜂蜜和純糖漿的熱行為;然后再用DSC檢測(cè)添加糖漿蜂蜜的曲線,觀察它們彼此的改變,由此來判別蜂蜜產(chǎn)地和真假.研究發(fā)現(xiàn)蜂蜜和糖漿的玻璃化溫度(Tg)相差大于或等于10℃.由此可用玻璃化溫度區(qū)別蜂蜜和糖漿.同時(shí)研究也發(fā)現(xiàn)熱力學(xué)參數(shù)熔融熱焓(△H)不能用作蜂蜜品種的檢驗(yàn).4.41c-4植物生產(chǎn)中蜂蜜的摻假自然界有3種光合作用的循環(huán)方式.碳同位素檢驗(yàn)技術(shù)的原理就是基于自然界幾乎所有蜜源植物的光合作用都是利用碳-3分子循環(huán)生成碳水化合物(糖類物質(zhì)),即卡爾文循環(huán),另外還有一類主要的循環(huán)即C-4分子循環(huán),稱為哈奇-斯萊克(Hatch-Slack)循環(huán).兩種不同的循環(huán)過程形成的兩種碳水化合物(糖類物質(zhì))的碳同位素比值(13C/12C,用δ13C表示)不同.一般情況下C-3植物的δ13C值在-22‰~-32‰之間;而C-4植物的δ13C值在-8‰~-20‰之間.如蜂蜜中δ13C值大于-23.5‰,一般認(rèn)為蜂蜜中可能摻入甘蔗、高粱、玉米等制備的C-4植物來源的糖分,但對(duì)于摻入的水稻、小麥、大豆等C-3植物淀粉制備的糖類成分就很難區(qū)分開來.研究人員又想到用蜂蜜中的蛋白質(zhì)中的C來鑒別摻假,并將其與蜂蜜的δ13C值差值(Δδ13C)來判斷蜂蜜摻假與否,如果Δδ13C值高于1‰,則認(rèn)為最小摻假量為7%.在G.J.Padovan的試驗(yàn)中,研究人員發(fā)現(xiàn)如果摻入1%~10%的蔗糖糖漿,摻假蜂蜜與其蛋白質(zhì)的Δδ13C值都小于1‰,這時(shí)會(huì)把這些摻假蜂蜜誤判為“合格”的純蜂蜜;當(dāng)加入20%、