角類藥材的研究進展

角類藥材的研究進展

角類材料是指特定動物的角及其加工產(chǎn)品。它是皮膚進化疾病的組織，由角質(zhì)細胞組成。它是從中國進口的一種獨特的中藥，通常是珍貴的中藥。具有活性強、療效顯著、副作用小等特點,應(yīng)用也日益廣泛,因此加強動物藥活性成分的研究十分必要。角類藥材的結(jié)構(gòu)與成分相似,均含有角蛋白類成分,因此其功效也相似,大多具有散熱行血、消腫辟邪、益腎補肺、強精活血等功效。角類中藥在中醫(yī)臨床應(yīng)用中有著悠久歷史。然而,目前由于動物角類藥材的生產(chǎn)原料短缺,價格昂貴,市場上角類藥材摻偽、摻假、冒充、替代等非法謀利的違法現(xiàn)象非常普遍,特別是針對羚羊角粉、水牛角濃縮粉等已失去了外觀性狀的珍稀名貴或常用藥材的摻偽、造假現(xiàn)象更為嚴(yán)重。劉睿等對各地市售的10批水牛角濃縮粉樣品中水分、總灰分、酸不溶灰分、浸出物和?；撬岷糠治?結(jié)果顯示其質(zhì)量差異較大,因而導(dǎo)致角類藥材的質(zhì)量參差不齊、市場秩序非?；靵y,嚴(yán)重危害了消費者的經(jīng)濟利益和身心健康。因角類藥材中化學(xué)成分多為變性的角蛋白,成分類型單一,藥效成分不明確,難以用化學(xué)含量測定、化學(xué)指紋圖譜等手段控制其質(zhì)量。因此,建立一套準(zhǔn)確性好、靈敏度高、專屬性強的動物角類藥材的質(zhì)量控制方法變得尤為重要。本文就現(xiàn)行的一些角類藥材的種類、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、來源、功效、化學(xué)成分分析、鑒別方法、質(zhì)量控制方法等方面進行綜述。1角類藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)2010年版《中國藥典》共收錄角類藥材6種,約占動物藥總數(shù)的12%。而目前臨床常用的角類藥材有水牛角(水牛角粉)、牦牛角、犀角(現(xiàn)已禁用,用水牛角替代)、羚羊角(羚羊角粉)、黃羊角、山羊角、鹿角、鹿茸、鹿角膠、鹿角霜等,其來源和功效各有異同,見表1。關(guān)于2010年《中國藥典》收載的角類藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中水牛角、羚羊角、鹿角、鹿茸的檢驗項目只有兩個,即性狀和鑒別。鹿角霜的檢測項目有性狀和水分檢查。鹿角膠的檢測項目主要有:性狀、鑒別、水分、總灰分、重金屬、砷鹽、含量測定。其它一些角類藥材至今還沒有標(biāo)準(zhǔn)收載。2分析方法及評價角類藥材中化學(xué)成分多為變性的角蛋白,目前國內(nèi)外對角類動物藥的研究較少并且大多局限于對微量元素和氨基酸的測定分析,如朱偉偉等對犀牛角氨基酸組成進行分析,楊清林等采用衍生化間接分析對四批山羊角提取物中氨基酸含量測定研究,周利兵通過主成分分析、因子分析和聚類分析,對青海高原牦牛骨、牦牛角中微量元素進行評價,對青海牦牛骨、牦牛角品質(zhì)作出科學(xué)評價。丘明明對鹿角(茸)、索有瑞等對牦牛內(nèi)氨基酸和無機微量元素亦進行了分析報道。近期也有些關(guān)于角內(nèi)脂類成分的報道,李峰等對鹿茸商品藥材中磷脂類成分進行分析,以期達到鑒別藥材的目的。3水牛角粉、熱提液和冷浸液的熱作用角類藥材具有活性強、療效好、不良反應(yīng)小、應(yīng)用范圍廣等特點。羚羊角與黃羊角、山羊角的藥理活性基本一致,它們的水溶性成分均有解熱、鎮(zhèn)痛和降壓的作用。劉睿等采用皮下酵母致熱法、光電管法、毛細管法評價了水牛角粉、熱提液和冷浸液的解熱、鎮(zhèn)靜、促凝血作用,證明水牛角粉、水牛角熱提液均具有明顯的解熱、鎮(zhèn)靜、促凝血作用,冷浸液解熱作用較弱。石磊等對6種角類動物藥(牦牛角、水牛角、藏羚羊角、羚羊角、廣角、犀角)超細粉鎮(zhèn)靜、催眠作用進行考察,得出6種角類動物藥超細粉對小鼠有一定的鎮(zhèn)靜作用及協(xié)同戊巴比妥鈉催眠作用。有關(guān)鹿茸(角)的報道是比較多的,歸納起來藥理活性大致為以下幾點:(1)增強機體免疫功能;(2)提高性功能;(3)抗氧化及抗衰老作用;(4)抗腫瘤作用;(5)保護心血管系統(tǒng)的作用;(6)促進生長、修復(fù)骨折作用;(7)抗關(guān)節(jié)炎作用;(8)提高記憶力作用。4角類醫(yī)學(xué)的鑒定4.1對患者的觀形態(tài)的研究宏觀性狀和微觀顯微技術(shù)結(jié)合鑒定角類藥材的方法是比較簡便的鑒別角類藥材的方法,早期沈圓就用此方法對羚羊角類藥材宏觀及微觀進行研究,并列出了檢索表、外觀形態(tài)簡圖和名稱圖示。徐蓮英等也對藏羚羊角和羚羊角的氨基酸成分進行分析。近期也有很多關(guān)于此類的報道,劉麗等利用光學(xué)顯微鏡對6種鹿茸茸毛的顯微特征進行了觀察與測量,實驗數(shù)據(jù)用SPSS13.0軟件統(tǒng)計分析,對不同品種的鹿茸進行比較鑒別。劉萌萌等系統(tǒng)地對全枝羚羊角的角尖、角基、骨塞以及絲狀和粉末狀的角類藥材的髓腔軸長比、骨碎片等顯微結(jié)構(gòu)特征對比、鑒別。性狀、顯微鑒別方法雖然較簡單快速,但對于比較相近的動物藥材,方法的專屬性仍受到很大的局限。4.2物理鑒定方法4.2.1層析法tcl4.2.2角類藥材的鑒別高效液相色譜法是使用最多、應(yīng)用最為廣泛的一種含量測定方法,具有靈敏度高、分析速度快、分離效果好等特點,在角類藥材的鑒別中也有一些報道。李曉蒙等通過對5批水牛角和羚羊角藥材中的氨基酸含量測定,得出羚羊角含較高的天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、酪氨酸,而水牛角則是丙氨酸、纈氨酸的含量較高,此結(jié)果從色譜峰中可以明顯看出。4.2.3牛科動物的藻類化學(xué)成分的檢測氣相色譜法是指用氣體作為流動相的色譜法。根據(jù)所用固定相的不同可分為兩類:固定相是固體的,稱為氣固色譜法;固定相是液體的則稱為氣液色譜法。徐愛仁等采用GC鑒別及聚類分析法對5種角類藥材(羚羊角、山羊角、水牛角、牦牛角、黃羊角)的脂類化學(xué)成分經(jīng)甲酯化,采用氣相色譜分離鑒定,歸一化法計算相對百分含量,并進行聚類分析,得出5種?？苿游锏慕侵兄惓煞衷诜N類及含量上有差異,可以通過比較5種角氣相色譜中相對百分含量在5%以上的共有峰峰面積比值是否分別在1.09~1.34間(8.9/11.8比值),2.09~3.21間(8.9/12.3比值),1.71~2.40間(11.8/12.3比值),來判斷是否為羚羊角。4.2.4角類藥材的鑒別與以上色譜法比較,光譜法具有快速、準(zhǔn)確、無損等特點。傅里葉變換紅外光譜(FTIR)技術(shù)近年來較多地被應(yīng)用于角類藥材的研究中?；贔TIR的基礎(chǔ)上,一種新的方法三級紅外光譜(傅立葉變換紅外光譜、二階導(dǎo)數(shù)譜和二維相關(guān)紅外光譜)也應(yīng)用于動物藥角類藥材的鑒別。在紅外圖譜中,每種角類都有它的宏觀指紋,然后通過二階導(dǎo)數(shù)光譜放大不同點并顯示它們潛在的特征吸收峰,最后在二維光譜中進行分析,是通過對無機鹽Ca3(PO4)2和硫酸鹽的吸收峰位置(Ca3(PO4)2的吸收峰一般在604cm-1和561cm-1,硫酸鹽的吸收峰在637cm-1和615cm-1)、酰胺光譜帶I和酰胺光譜帶II的強度不同展開研究,即可得出每種角類具有它的特征吸收峰,進而達到鑒別的效果,用這種方法不僅可以鑒別不同種類的角類藥材,對基源相近的角類藥材也有很好的鑒別效果。一些學(xué)者也采用紫外光譜法對角類藥材分析研究,同樣也可以達到對角類藥材鑒別的目的。也有部分報道關(guān)于X射線衍射Fourier譜鑒別,證明了通過應(yīng)用粉末X射線衍射Fourier指紋圖譜鑒定法也可以鑒別角類藥材。4.2.5羚羊角的檢測由于角類藥材的主要成分是角蛋白,因此針對蛋白質(zhì)的凝膠電泳技術(shù)也多用于角類藥材的鑒別。趙華英等采用此技術(shù)對貴重藥材羚羊角及其偽品的蛋白電泳鑒別,從其譜帶的條數(shù)、位置、深淺度看出它們有著明顯差異。在此基礎(chǔ)上,李峰等采用連續(xù)解離系的十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳法(SDS)對羚羊角及偽品進行了電泳圖譜的比較,結(jié)果表明各樣品間具有不同的蛋白質(zhì)成分,可用于羚羊角的鑒別。劉炎等采用紫外分光光度法(UV)和十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS)技術(shù),對羚羊角及其類似品山羊角和黃羊角進行水溶性蛋白質(zhì)含量和組分對比分析,得出蛋白組分可用于羚羊角的鑒定這一結(jié)論。此外,朱薇等通過對黃牛角、水牛角、鹿茸犀角、廣角、羚羊角的PAGE分析,確立了PAGE技術(shù)對中藥材,特別是動物類藥材進行鑒定是完全可行的。但該方法靈敏度相對較低,特別是對于水牛角濃縮粉等經(jīng)過水煮提取濃縮加工過的藥材,靈敏度受到較大的干擾。5角類藥材的質(zhì)量控制綜上所述,可見關(guān)于中藥角類藥材的鑒定問題已經(jīng)引起人們高度重視并在角類藥材的研究分析和鑒定方面也取得了一定的成果。而目前藥典標(biāo)準(zhǔn)中收載的對角類藥材的檢測項目只有性狀和鑒別。由于角類藥材標(biāo)準(zhǔn)的可控性不強,缺乏專屬性好的定性與定量檢測指標(biāo),致使含有角類藥材的成方制劑幾乎全都沒有定性與定量檢測項。這些懸而未決的疑難問題,嚴(yán)重制約了中國藥典標(biāo)準(zhǔn)的整體發(fā)展。以上討論的有些學(xué)者采取色譜法、光譜法、電泳技術(shù)等對角類藥材進行研究分析和鑒別,雖然也可達到想要的結(jié)果,但方法都會存在某些缺陷。因此,如何建立一套準(zhǔn)確性好、靈敏度高、專屬性強的動物角類藥材的質(zhì)量控制方法,是解決上述問題的關(guān)鍵。蛋白質(zhì)酶切技術(shù)和液質(zhì)聯(lián)用多肽識別技術(shù)在生物技術(shù)領(lǐng)域已有較多研究和應(yīng)用。Cheng等采用此技術(shù)成功地對阿膠、牛皮膠、豬皮膠、龜甲膠、鹿角進行鑒別。選擇適當(dāng)?shù)牡鞍酌笇穷愃幉闹械慕堑鞍走M行酶解,得到酶解肽,進而采用液質(zhì)聯(lián)用多肽識別技術(shù),并結(jié)合數(shù)據(jù)處理軟件和分析判別模型,建立各類樣品的特征肽段和質(zhì)譜信息庫,借用蛋白質(zhì)及多肽序列研究的成果,從分子層次研究各角類藥材的主體組分性質(zhì)及具有專屬鑒別意義的特征成分,建立基于角蛋白序列差異的角類藥材真?zhèn)舞b別方法及基于特征肽段的定性、定量測定方法,此方法經(jīng)驗證專屬性強并可以應(yīng)用于各角類藥材的來源鑒定及相關(guān)藥品的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。薄層層析法是除性狀、顯微鑒別外另一種較簡單、快捷的鑒別方法,至今在實驗中也常使用。吳杲等分別用石油醚和氯仿對羚羊角和羚羊角塞內(nèi)物質(zhì)進行提取,石油醚提取時用的展開劑為苯∶石油醚∶甲醇(4∶5∶1),氯仿提取時用的展開劑為苯∶氯仿∶甲醇(9∶2∶2),顯色劑均為10%硫酸乙醇溶液,兩者的薄層分析斑點大小和數(shù)量存在明顯差