維生素c對(duì)失血性休克大鼠腸內(nèi)補(bǔ)液時(shí)腸組織氧自由基損傷的影響

維生素c對(duì)失血性休克大鼠腸內(nèi)補(bǔ)液時(shí)腸組織氧自由基損傷的影響

口服或胃內(nèi)液體恢復(fù)主要用于戰(zhàn)爭(zhēng)、自然災(zāi)害和事故等特殊環(huán)境下的戰(zhàn)爭(zhēng)、創(chuàng)傷和休克士兵。由于液體供應(yīng)不足，（或）治療條件差等原因，早期靜脈恢復(fù)難以實(shí)施。但低血容量休克時(shí)腸道處于嚴(yán)重缺血缺氧狀態(tài),口服補(bǔ)液在發(fā)揮快速?gòu)?fù)蘇作用的同時(shí),也給腸道帶來再灌注過程,導(dǎo)致腸組織過度炎癥和過氧化損傷。維生素C(vitaminC,VC)是體內(nèi)重要的抗氧化的非酶類物質(zhì),以往研究報(bào)告能減輕缺血再灌注引起的組織水腫和過氧化損傷。本研究擬在40%血容量失血大鼠腸內(nèi)補(bǔ)液時(shí)加入VC,觀察其對(duì)失血性休克早期腸補(bǔ)液過程中氧自由基產(chǎn)生和腸組織水腫的影響,為降低戰(zhàn)、創(chuàng)傷休克早期口服補(bǔ)液引起的胃腸并發(fā)癥提供治療方法和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1材料和方法1.1碳酸氫鈉的溶液雄性Wistar大鼠32只,60～70日齡,體重200～230g,購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中心。葡萄糖-電解質(zhì)溶液(glucose-eletrolytesolution,GES)配方:每1L水中溶解3.5g氯化鈉、2.5g碳酸氫鈉、1.5g氯化鉀和20g葡萄糖,使用前置于37℃恒溫水浴箱預(yù)熱。VC:北京試劑公司產(chǎn)品。ZNB-XB型輸液泵:北京科力豐科技發(fā)展有限公司產(chǎn)品。黃嘌呤氧化酶(XOD)、髓過氧化物酶(MPO)和脂質(zhì)過氧化物丙二醛(MDA)檢測(cè)試劑盒:南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。1.2方法1.2.1大鼠腸道過血性血流動(dòng)力學(xué)實(shí)際肝胰腺組織病理學(xué)檢測(cè)大鼠購(gòu)入后適應(yīng)性喂養(yǎng)1周,術(shù)前禁食18～20h,禁水2h。大鼠稱重后用氯胺酮-速眠新Ⅱ肌內(nèi)注射(肌注)復(fù)合麻醉后,行右側(cè)頸動(dòng)脈插管監(jiān)測(cè)平均動(dòng)脈壓(meanarterialpressure,MAP)。于腹正中線切開腹壁,暴露十二指腸上端,于幽門遠(yuǎn)端1cm處行十二指腸造口并插入一段無菌膠管,外接ZNB-XB型輸液泵。待大鼠清醒后按全身總血量的40%(按65mL/kg體重)分兩次放血,每次5min,間隔15min。放血畢結(jié)扎動(dòng)脈近端、縫合皮膚。按隨機(jī)數(shù)字表法將動(dòng)物分為手術(shù)對(duì)照組(S組)、單純失血組(H組)、葡萄糖-電解質(zhì)溶液(GES)組和GES/VC組,每組8只。S組和H組手術(shù)或失血后無處理;GES組和GES/VC組在失血后立即開啟輸液泵進(jìn)行腸內(nèi)補(bǔ)液,前4h補(bǔ)液量為2倍失血量的GES液;GES/VC組大鼠在傷后立即將VC(250mg/kg)溶于GES中注入十二指腸。1.2.2XOD、MPO活性和MDA含量失血后4h處死大鼠,取空腸起始段10cm組織,分裝后放入液氮中冷凍保存。測(cè)定前按重量體積比1∶9制備成10%的組織勻漿液,嚴(yán)格按試劑盒中說明書步驟測(cè)定腸組織中XOD、MPO活性和MDA含量。1.2.3腸組織含水率測(cè)定于傷后4h,取相同段腸組織稱量濕重后,放入烤箱90℃烤72h,再稱量干重,計(jì)算腸組織含水率(%)=(濕重-干重)/濕重×100%。1.3統(tǒng)計(jì)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件處理,結(jié)果以表示,進(jìn)行組間方差分析,P<0.05為差異有顯著性。2結(jié)果2.1mpo活性和mda含量與S組和H組相比,GES組和GES/VC組XOD、MPO活性和MDA含量均顯著增高(P<0.05);H組與S組相比,只有MPO差異有顯著性;而GES/VC組以上各指標(biāo)均比GES組顯著降低(P<0.05)。2.2各組腸組織含水量比較與假手術(shù)組比較,失血各組腸組織含水量均顯著增加;GES組和GES/VC組腸組織含水量顯著高于H組(P<0.05)。GES/VC組(72.5%±4.3%)顯著低于GES組(85.7%±5.2%)(P<0.05)。3失血性休克大鼠口服維生素c對(duì)腸組織中氧自由基的影響戰(zhàn)、創(chuàng)(燒)傷時(shí)由于大量失血或血管內(nèi)液外滲,導(dǎo)致有效循環(huán)血容量不足引起低血容量性休克。此時(shí)機(jī)體為滿足重要生命臟器的血液供應(yīng),血流發(fā)生重新分布,胃腸道血流量減少,腸組織細(xì)胞缺血缺氧。此時(shí)腸內(nèi)輸入大量液體,吸收后雖然能迅速恢復(fù)腸道局部和全身灌流,有效改善燒傷休克的臟器功能和循環(huán)指標(biāo);但另一方面,能造成腸道局部的缺血-再灌注效應(yīng),進(jìn)一步加重組織損傷。氧自由基大量生成是缺血-再灌注時(shí)組織氧化損傷的重要環(huán)節(jié),而黃嘌呤氧化酶途徑是小腸氧自由基生成的主要途徑之一,在復(fù)蘇過程中缺血組織重新獲得氧供給,此時(shí)缺血腸組織中堆積的ATP代謝產(chǎn)物次黃嘌呤在黃嘌呤氧化酶的催化作用下大量生成黃嘌呤,同時(shí)穩(wěn)態(tài)的分子氧被轉(zhuǎn)化為極不穩(wěn)定的氧自由基,氧自由基幾乎能與任何細(xì)胞成分發(fā)生反應(yīng),造成細(xì)胞結(jié)構(gòu)、代謝和功能的全面紊亂,甚至死亡。黃嘌呤氧化酶(XOD)是氧自由基生成的黃嘌呤氧化酶途徑中的關(guān)鍵酶,其活性高低直接決定組織氧自由基含量多少,因此XOD活性可作為反映組織氧自由基生成的靈敏指標(biāo)。MDA是氧自由基攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸,引起脂質(zhì)過氧化作用而形成的過氧化物,其含量可反映細(xì)胞受氧化應(yīng)激時(shí)脂質(zhì)過氧化程度,從而間接反映組織細(xì)胞過氧化損傷的程度。正常情況下MPO存在于中性粒細(xì)胞,在機(jī)體受損時(shí)中性粒細(xì)胞聚集于損傷組織并大量釋放MPO,因此組織局部MPO活性與受損傷程度呈顯著正相關(guān)。維生素C屬水溶性維生素,是正常細(xì)胞中存在的非酶類抗氧化劑,具有強(qiáng)烈的還原性,能減輕脂類過氧化反應(yīng),減少脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)生,清除氧自由基,保護(hù)機(jī)體免受過氧化損傷。王璇等研究顯示,維生素C可以減輕過氧化氫對(duì)血管內(nèi)皮的氧化損傷,降低血管通透性。本研究結(jié)果顯示,失血性休克大鼠口服葡萄糖-電解質(zhì)液后,腸組織中XOD和MPO活性增高,MDA生成增多,腸組織含水率增加。給予口服大劑量