dna分型技術(shù)在刑事案件中應(yīng)用

DNA分型技術(shù)

在刑事案件中的應(yīng)用周懷谷2005年12月第一講

法醫(yī)DNA技術(shù)的開展世紀(jì)大案—美國橄欖球運(yùn)發(fā)動(dòng)辛普森謀殺妻子嫌疑案世紀(jì)丑聞—美國總統(tǒng)克林頓與白宮實(shí)習(xí)生萊文斯基緋聞案美國前橄欖球明星

—辛普森

O.J.辛普森1947年7月9日生于舊金山一貧窮的黑人家庭，13歲參加黑幫“波斯戰(zhàn)士〞，15歲為此而坐牢。1967-1969年，南加州大學(xué)就讀，獲大學(xué)橄欖球賽最高獎(jiǎng)——海斯曼獎(jiǎng)。之后參加職業(yè)聯(lián)賽，1985年被選為年度風(fēng)云人物，當(dāng)時(shí)身價(jià)最高的球員之一。20年后進(jìn)入影視界，成為廣告明星、體育節(jié)目評(píng)論員、并在影片中擔(dān)任要角。布蘭伍血案時(shí)間：1994年6月12日〔星期日〕22時(shí)15分左右地點(diǎn)：南加州洛杉磯布蘭伍地區(qū)達(dá)班迪街被害人：辛普森前妻妮可、妮可男友隆納疑點(diǎn)：辛普森住宅后門停著的白色福特越野車駕駛位置的車門把手上有一點(diǎn)血跡，門下有多點(diǎn)血跡；屋后走道上有一只沾滿血跡的皮手套，與隆納尸體旁的另一只成對(duì)；辛普森左手有傷口；辛普森當(dāng)晚22時(shí)至23時(shí)之間行蹤不明。布蘭伍血案辨方人員：波頓博士——紐約州法醫(yī)，美國刑事界最具權(quán)威的法醫(yī)專家之一；柯克倫律師——洛杉磯著名的黑人律師；貝利律師——美國最有名的刑事辯護(hù)律師；艾蘭教授——美國憲法專家，哈佛大學(xué)法學(xué)院教授；杰拉德教授——上訴專家，加州大學(xué)法學(xué)院院長(zhǎng)；李昌鈺——被譽(yù)為神探的康州警政廳長(zhǎng)。布蘭伍血案檢方人員：克拉克檢察官——主檢女檢察官，過去十年沒有輸過一宗案件；達(dá)頓檢察官——洛杉磯最強(qiáng)的黑人檢察官；哈奇曼檢察官——首席檢察官，擔(dān)任幕后籌劃；其他——舊金山、圣地亞哥的物證、DNA專家。布蘭伍血案辛普森之妻妮可的血痕妮可之男友隆納的血痕辛普森的血痕現(xiàn)場(chǎng)滴血ABOAAEaD1111PGMSub－type1+2+1+2+2－2+2－布蘭伍血案疑點(diǎn)人員——白人刑警福爾曼1、最先趕到現(xiàn)場(chǎng)的刑警；2、主動(dòng)提議帶隊(duì)去辛普森家，并第一發(fā)現(xiàn)辛普森住宅后門停著的白色福特越野車駕駛位置的車門把手上有一點(diǎn)血跡；3、單獨(dú)搜查辛普森家，并發(fā)現(xiàn)屋后走道上有一只沾滿血跡的皮手套；4、討厭黑人，在不同場(chǎng)合講出許多仇恨黑人的話。布蘭伍血案疑點(diǎn)物證1、辛普森屋后走道上發(fā)現(xiàn)的一只沾滿血跡的皮手套，辛普森戴不上；2、現(xiàn)場(chǎng)有除被害人以外的兩種血鞋??；3、辛普森臥室內(nèi)發(fā)現(xiàn)的一雙血襪子，襪子兩側(cè)血跡完全一樣。布蘭伍血案存在的問題1、現(xiàn)場(chǎng)一張有血鞋印的紙片不見了；2、隆納呼機(jī)上的血跡沒有進(jìn)行檢驗(yàn)；3、妮可尸體肩部的血滴沒有收集、檢驗(yàn)；4、兩只不同地方收集的襪子放入同一物證袋。布蘭伍血案檢方：從現(xiàn)場(chǎng)采集的血樣中獲得的DNA指紋證據(jù)，除了與被害人相同外，其余的均與辛普森相同，其“配錯(cuò)〞對(duì)象的可能性小于一千萬分之一。辯方：你能保證在采血樣過程中，在DNA擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)中沒有被辛普森的血或DNA污染過？你能拿出數(shù)據(jù)證明這一千萬分之一的配錯(cuò)率是以黑人群體作對(duì)照的？布蘭伍血案精采鏡頭1、1994年6月17日17時(shí)許，加州405高速公路演繹90分鐘的追逐。2、世紀(jì)大審判：1995年1月24日開庭，1995年10月3日宣判，全程電視轉(zhuǎn)播。布蘭伍血案結(jié)果1、經(jīng)過245天的陪審，1995年10月2日十二名正式陪審員達(dá)成裁決，10月3日宣布：辛普森無罪。2、七成美國人認(rèn)為辛普森很可能有罪。3、檢方的一些現(xiàn)場(chǎng)證據(jù)也說明辛普森有涉案嫌疑。布蘭伍血案李昌鈺的觀點(diǎn)：刑事鑒定最重要的是物證，以及現(xiàn)場(chǎng)的重建工作。如果沒有完整的證據(jù)，就只能做局部的重建。這個(gè)案件就是只能進(jìn)行局部重建的案件。本案中洛杉磯警察局的刑事化驗(yàn)室在DNA方面有80％是做對(duì)的，但是在其余局部都有瑕疵。嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)工作者就是要把所有的疑點(diǎn)報(bào)告出來，希望檢方能合理地答復(fù)，而不是去證明被告到底有罪還是無罪。被告是否有罪，還是要有陪審團(tuán)或法官?zèng)Q定，而不是刑事鑒定人員。布蘭伍血案辛普森案件的意義1、司法部門認(rèn)識(shí)到DNA檢驗(yàn)對(duì)破案的重要性；2、人民群眾認(rèn)識(shí)了DNA，接受了DNA檢驗(yàn)；3、辦案人員認(rèn)識(shí)到證據(jù)的科學(xué)性、技術(shù)性、嚴(yán)密性和完整性?？肆诸D緋聞案第一代法醫(yī)DNA標(biāo)記DNA指紋技術(shù)〔法醫(yī)物證學(xué)第160頁〕DNA指紋圖(DNAfingerprint)阿萊克·杰弗里斯〔AlecJeffreys〕英國萊斯特大學(xué)的遺傳學(xué)家。1984年在調(diào)查疾病的DNA遺傳標(biāo)記時(shí)，發(fā)現(xiàn)RFLP〔限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性〕技術(shù)在法庭科學(xué)個(gè)體識(shí)別中的應(yīng)用價(jià)值，并積極將這一技術(shù)引進(jìn)法庭鑒定中。由于RFLP圖譜就像人的指紋，獨(dú)一無二，故被稱為DNA指紋圖。DNA指紋的法科學(xué)應(yīng)用個(gè)體識(shí)別。親子鑒定。首起親子鑒定案的應(yīng)用1985年，一名加納共和國的男孩申請(qǐng)移民英國，因?yàn)槠淠赣H已經(jīng)是英國的公民。用常規(guī)的血型檢測(cè)方法無法區(qū)分該女性真的是其母親還是其姨媽，為此，杰弗里斯采用了RFLP分析方法，最終證實(shí)了他們的母子關(guān)系，并通過此案使內(nèi)政部批準(zhǔn)而且成認(rèn)了這項(xiàng)技術(shù)。首起刑事案件的應(yīng)用1985年，英國中東部的一個(gè)小鎮(zhèn)連續(xù)發(fā)生了兩起強(qiáng)奸殺害女學(xué)生案。1986年警察拘留了一醫(yī)院勤雜工，供認(rèn)殺害了其中一名女學(xué)生。經(jīng)杰弗里斯檢驗(yàn)，于1986年11月21日排除了其嫌疑。1987年，采集第4583人——一面包房廚師，經(jīng)杰弗里斯檢驗(yàn)，于1987年9月證實(shí)了其嫌疑。DNA指紋技術(shù)的局限性需要檢材量大，靈敏度底。需要完整的大分子DNA存在。多位點(diǎn)探針無種屬特異性。高突變率。不能解決混合檢材的個(gè)體識(shí)別問題?！卜ㄡt(yī)物證學(xué)第171頁〕第二代法醫(yī)DNA標(biāo)記短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)〔法醫(yī)物證學(xué)第199頁〕常染色體STR片段銀染檢測(cè)常染色體STR片段熒光檢測(cè)常染色體STR片段熒光檢測(cè)Y染色體STR片段熒光檢測(cè)父系遺傳STR高識(shí)別率信息量大能自動(dòng)分型等位基因不連鎖快速分型費(fèi)用較貴微量DNA基于PCR方法降解DNAmtDNA測(cè)序結(jié)果〔法醫(yī)物證學(xué)第194頁〕母系遺傳DNA測(cè)序線粒體DNA分析的缺乏mtDNA分析提供的識(shí)別率相對(duì)較低，不能進(jìn)行個(gè)體識(shí)別。同一母系的所有后代個(gè)體擁有相同的線粒體DNA序列，線粒體DNA分析不能區(qū)分開來自同一母系的個(gè)體，這限制了其法醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用。線粒體DNA分析的靈敏度高，但同時(shí)也增加了污染的危險(xiǎn)性。高率突變使個(gè)體的線粒體DNA存在異質(zhì)性。同一個(gè)體的不同組織，如同一人的血液與口腔拭子mtDNA序列不同，甚至即使同一個(gè)體的毛發(fā)，不同根毛發(fā)也存在一個(gè)堿基的差異差異。PCR技術(shù)PCR，聚合酶鏈反響(PolymeraseChainReaction)，1985年由美國的Mullis等人創(chuàng)造，是一種在體外模擬自然DNA復(fù)制過程的核酸擴(kuò)增技術(shù)，即無細(xì)胞分子克隆技術(shù)，其特異性是由兩個(gè)人工合成的引物序列決定的。目前已廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、法醫(yī)學(xué)、考古學(xué)等許多領(lǐng)域，對(duì)基因克隆、DNA序列分析等現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)的開展起了巨大推動(dòng)作用?！卜ㄡt(yī)物證學(xué)第185頁〕第三代法醫(yī)DNA標(biāo)記單核苷酸多態(tài)性(SNPs)單堿基變異引起的DNA序列多態(tài)性。每400-1000堿基中就有一個(gè)SNP位點(diǎn)，整個(gè)人類基因組中共有300萬個(gè)以上的SNP。ACCTGTACTCGGTAACCTGTCCTCGGTA第二講

法醫(yī)DNA技術(shù)的應(yīng)用法醫(yī)DNA技術(shù)的應(yīng)用

確定兇殺現(xiàn)場(chǎng)有否罪犯遺留的生物性檢材及推斷犯罪過程串并案子確定死者身源認(rèn)定罪犯，或排除犯罪嫌疑人人類的基因突變率大約為1

/1,000,000第三講

法庭科學(xué)DNA數(shù)據(jù)庫

法庭科學(xué)DNA數(shù)據(jù)庫是將DNA技術(shù)、計(jì)算機(jī)自動(dòng)識(shí)別技術(shù)及網(wǎng)絡(luò)傳輸技術(shù)相結(jié)合，將DNA檢驗(yàn)結(jié)果輸入計(jì)算機(jī)，由計(jì)算機(jī)對(duì)可數(shù)碼化的DNA信息自動(dòng)比對(duì)分析，通過網(wǎng)絡(luò)技術(shù)實(shí)現(xiàn)異地查詢、跨地區(qū)協(xié)作的目標(biāo)。法庭科學(xué)DNA數(shù)據(jù)庫前科庫現(xiàn)場(chǎng)庫失蹤人員庫

……市級(jí)庫市級(jí)庫國家?guī)焓〖?jí)庫省級(jí)庫市級(jí)庫市級(jí)庫數(shù)據(jù)上報(bào)信息反響……

系統(tǒng)根本用途為刑事案件的偵查和審理提供依據(jù)；對(duì)高危犯罪嫌疑人群與犯罪現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行排查；為時(shí)間，空間跨度的系列犯罪提供串并線索；為查找失蹤人員提供證據(jù)；為軍人，從事高危工作的人群，易走失人群〔老年癡呆，精神病患者，兒童〕等提供DNA數(shù)據(jù)預(yù)存效勞；為DNA法庭科學(xué)物證實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)化管理提供指導(dǎo)。法庭科學(xué)DNA數(shù)據(jù)庫的組成

物證、血樣

位點(diǎn)名稱圖示基因型CD315/15VWA14/16FGA23/23D813/13D2129/29D1816/16D511/13D138/10D712/12現(xiàn)場(chǎng)物證庫前科人員庫入庫存儲(chǔ)無名尸體庫失蹤人員親屬庫自查確定同一個(gè)體判定尸體間親緣比對(duì)DNA數(shù)據(jù)庫的其他內(nèi)容及功能：災(zāi)害比對(duì)庫、被拐兒童及父母庫、親子鑒定庫、根底數(shù)據(jù)庫?；ゲ榕卸ㄊw身緣最早：80年代末的英國〔FSS〕；現(xiàn)普及北美、歐洲、亞洲、非洲的數(shù)十個(gè)國家

英國：6000萬人口，年發(fā)案約67.5萬起FSS數(shù)據(jù)庫：?jiǎn)渭?jí)結(jié)構(gòu)：伯明翰、韋斯比、倫敦年檢驗(yàn)?zāi)芰?3.5萬，現(xiàn)存前科庫150萬；現(xiàn)場(chǎng)庫13萬英國DNA數(shù)據(jù)庫歷年串并案件及認(rèn)定罪犯數(shù)據(jù)

年度檢材間匹配數(shù)上升倍數(shù)嫌疑人與檢材匹配數(shù)上升倍數(shù)9634846979762.8253155.09833573.4166736.69952441.6232351.42000104001.98704003.02001150001.41600002.3

美國自1998年開始正式建庫。應(yīng)用CODIS系統(tǒng)，二級(jí)結(jié)構(gòu)：NDIS國家?guī)旖ㄔ贔BI；SDIS各州參加CODIS系統(tǒng)的國立或私立實(shí)驗(yàn)室，共160個(gè)實(shí)驗(yàn)室。另其他17個(gè)國家的27個(gè)實(shí)驗(yàn)室也參加了CODIS系統(tǒng)〔2002，11〕庫存前科人員數(shù)據(jù)1，396，485現(xiàn)場(chǎng)物證數(shù)據(jù)51，789串案1，714認(rèn)定罪犯4，196協(xié)助調(diào)查6，257發(fā)揮作用比例23.5%新西蘭：1996年開始建庫，是國際上第2個(gè)建設(shè)國家DNA數(shù)據(jù)庫的國家；采用自行編制的數(shù)據(jù)庫軟件，效果良好，發(fā)揮作用近50%；中國香港特別行政區(qū)：2001年7月1日立法通過建立DNA數(shù)據(jù)庫：目前庫存數(shù)據(jù)現(xiàn)場(chǎng)物證1600，人員數(shù)據(jù)3500。國內(nèi)DNA開展歷史國外：DNA檢開始建開始熒光數(shù)據(jù)庫快速積累、驗(yàn)起步數(shù)據(jù)庫STR檢驗(yàn)顯著效益858790952000〔年代〕國內(nèi)：DNA檢提出建開始熒光剛剛起步、驗(yàn)起步庫建議STR檢驗(yàn)初見成效提取擴(kuò)增分析上海市公安局DNA實(shí)驗(yàn)室檢索再見！5-Aza-CdR對(duì)人食管癌細(xì)胞株生物學(xué)行為及TFPI-2mRNA表達(dá)的影響5-Aza-CdR對(duì)人食管癌細(xì)胞株生物學(xué)行為及TFPI-2mRNA表達(dá)的影響杜雅冰，邵應(yīng)舉，樊青霞，孫楨，王琳，趙培榮作者單位：(鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，河南鄭州450002)【摘要】目的探討5-氮雜-2-脫氧胞苷(5-Aza-2-deoxycytidine,5-Aza-CdR)干預(yù)對(duì)食管鱗癌細(xì)胞株Eca9706生長(zhǎng)增殖及其組織因子途徑抑制物2(tissuefactorpathwayinhibitor-2，TFPI-2)基因表達(dá)的影響。方法選取食管鱗癌細(xì)胞株Eca9706，并用不同濃度的5-Aza-CdR處理該細(xì)胞株。MTT法檢測(cè)干預(yù)前后細(xì)胞增長(zhǎng)率的變化，F(xiàn)CM法檢測(cè)干預(yù)前后細(xì)胞凋亡率的變化，RT-PCR技術(shù)檢測(cè)干預(yù)前后Eca9706細(xì)胞TFPI-2基因mRNA的表達(dá)，免疫組化檢測(cè)干預(yù)前后Eca9706細(xì)胞TFPI-2蛋白的表達(dá)。結(jié)果食管鱗癌細(xì)胞株Eca9706存在TFPI-2基因超甲基化狀態(tài)，經(jīng)5-Aza-CdR處理后，超甲基化狀態(tài)解除，細(xì)胞增殖受到抑制，細(xì)胞凋亡率明顯提高(P<0.05);細(xì)胞中TFPI-2蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)，同時(shí)mRNA的表達(dá)水平也較處理前明顯提高(P<0.05)。結(jié)論食管癌細(xì)胞系TFPI-2基因超甲基化可抑制其mRNA表達(dá)，當(dāng)其超甲基化解除后，細(xì)胞增殖受到抑制，同時(shí)細(xì)胞凋亡率相應(yīng)提高?！娟P(guān)鍵詞】食管癌;組織因子途徑抑制物-2;5-氮雜-2-脫氧胞苷;甲基化;免疫組化;逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反響;凋亡ABSTRACT：ObjectiveToexploretheeffectsof5-Aza-2-deoxycytidine(5-Aza-CdR)interventiononthegrowthandproliferationofEca9706celllineandproteinexpressionoftissuefactorpathwayinhibitor-2(TFPI-2).MethodsEca9706celllinewastreatedby5-azaCdRofdifferentconcentrations;MTT，flowcytometry，immunohistochemistryandRT-PCRwereusedtodeterminethecellgrowth，apoptosis，andtheexpressionofTFPI-2geneanditsprotein.ResultsEca9706celllinehadhypermethylationofTFPI-2.Afterdemethylationby5-Aza-CdRtreatment，theproliferationofEca9706wasinhibited，theapoptosisratewasalsoincreasedsignificantlyintheconcentration-dependentmanner.RT-PCRdetectedthatmRNAexpressionofTFPI-2geneinEca9706celllinerecoveredsignificantly(P<0.05).Conclusion5-Aza-CdRcanslowthegrowthofEca9706cell，increasetheapoptosisrate，reactivatetheTFPI-2genetranscriptionandproteinexpressionbydemethylation.KEYWORDS：esophagealcarcinoma;tissuefactorpathwayinhibitor-2;5-Aza-CdR;methylation;immunohistochemistry;RT-PCR;apoptosis組織因子途徑移植物2(tissuefactorpathwayinhibitor，TFPI-2)是絲氨酸蛋白酶抑制物，在調(diào)控腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移方面起著重要作用。目前，關(guān)于TFPI-2在食管癌中的基因表達(dá)情況的分析研究尚少。本研究旨在探討TFPI-2基因的失活機(jī)制，并尋找食管癌治療的新靶點(diǎn)。1材料與方法1.1材料RPMI-1640培養(yǎng)基購自北京索萊寶生物科技;標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清購自天津市灝洋生物制品科技;Trizol試劑購自MBI公司;RT-PCR試劑盒購自MBI公司;5-Aza-CdR購自Sigma公司;人食管癌細(xì)胞株Eca9706由鄭州大學(xué)腫瘤生物學(xué)研究室惠贈(zèng)。1.2細(xì)胞培養(yǎng)和藥物處理人食管癌細(xì)胞Eca9706以含10mL/L胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基，37℃、50mL/LCO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每2～3d消化傳代1次。1.3MTT法檢測(cè)干預(yù)前后細(xì)胞增長(zhǎng)率的變化取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，調(diào)整密度至5×104/mL接種于96孔板，按5-Aza-CdR濃度分為6組：0、0.4、1.6、6.4、25.6、102.4μmol/L，每組復(fù)設(shè)5個(gè)孔。待細(xì)胞貼壁后，分別于24、48、72h后參加MTT液，4h后棄去上清液，每孔加DMSO150μL，在490nm波長(zhǎng)測(cè)定各孔吸光度值(absorbance，A)。細(xì)胞增殖抑制率(cellularproliferationinhibitionrate，CPIR)按公式計(jì)算：CPIR=(1-實(shí)驗(yàn)組A均值/對(duì)照組A均值)×100%。1.4流式細(xì)胞儀(FCM)檢測(cè)干預(yù)前后細(xì)胞凋亡率的變化取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，按5×105/mL的密度接種于6孔板內(nèi)，待細(xì)胞貼壁后加藥，分組如下：對(duì)照組(0μmol/L),1.6μmol/L5-Aza-CdR組，25.6μmol/L5-Aza-CdR組，102.4μmol/L5-Aza-CdR組。每組均于5-Aza-CdR作用48h后消化收集細(xì)胞，700mL/L冰乙醇固定，流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞凋亡測(cè)定。1.5RT-PCR技術(shù)檢測(cè)TFPI-2基因mRNA的表達(dá)分組同F(xiàn)CM，每組細(xì)胞均5-Aza-CdR作用48h。TFPI-2的上、下游引物分別為5′-GTCGATTCTGCTGTTTTCC-3′和5′-ATGGAATTTTCTTTGGTGCG-3′，合成產(chǎn)物為440bp;β-actin作為內(nèi)參照，上下游引物分別為5′-AGGCATTGTGATGGACTCCG-3′和5′-AGTGATGACCTGGCCGTCAG-3′，合成產(chǎn)物為301bp。按照試劑盒說明書，用Trizol試劑提取細(xì)胞總RNA，經(jīng)紫外分光光度計(jì)分析后，按Sigma公司RevertAidFirstStrandcDNASynthesisKit說明書操作。先逆轉(zhuǎn)錄制備單鏈cDNA，再以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板，用上、下游產(chǎn)物進(jìn)行PCR反響擴(kuò)增目的基因。反響條件為：94℃預(yù)變性3min，然后94℃變性30s,51℃退火30s,72℃延伸30s，循環(huán)30次，最后72℃延伸5min,4℃保溫。擴(kuò)增片段經(jīng)20g/L瓊脂糖凝膠電泳鑒定。1.6免疫組化方法檢測(cè)TFPI-2蛋白的表達(dá)取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，按5×104/mL的密度接種于經(jīng)預(yù)處理的蓋玻片上，待細(xì)胞貼壁后加藥(分組同RT-PCR)。培養(yǎng)48h后參加40g/L多聚甲醛溶液固定30min,30mL/LH2O2封閉內(nèi)源性過氧化物酶，室溫下10min,100mL/L動(dòng)物血清封閉，室溫下10min，滴加1∶100的稀釋的TFPI-2抗體4℃過夜，二抗室溫下1h，滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素，37℃孵育30min，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，脫水透明封片。另取爬片滴加PBS液代替一抗作為陰性對(duì)照。結(jié)果判定：TFPI-2蛋白陽性信號(hào)均呈棕黃色顆粒樣物質(zhì)，位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。光鏡下隨機(jī)選取10個(gè)視野(每個(gè)視野觀察細(xì)胞數(shù)不少于100個(gè))，按陽性細(xì)胞所占百分比進(jìn)行結(jié)果判定。陽性率=(陽性細(xì)胞數(shù)/1000)×100%。1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示，采用單因素方差分析加LSD兩兩比較法進(jìn)行分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。2結(jié)果2.1干預(yù)前后細(xì)胞增長(zhǎng)率的變化經(jīng)MTT檢測(cè)，結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞抑制率明顯高于未加藥組，且隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)和濃度的增加而增加(表1)。表1不同濃度的5-aza-CdR對(duì)Eca9706細(xì)胞增殖的影響2.2干預(yù)前后細(xì)胞凋亡率的變化流式細(xì)胞儀分析可見，經(jīng)不同濃度5-Aza-CdR誘導(dǎo)48h后，Eca9706細(xì)胞各處理組凋亡率分別為(13.76±0.47)%、(26.97±0.39)%、(41.03±0.19)%，與5-Aza-CdR誘導(dǎo)濃度成正比。與對(duì)照組[(1.39±0.27)%]比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且各濃度組間比較差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，圖1)。以上實(shí)驗(yàn)重復(fù)5次。2.3干預(yù)前后Eca9706細(xì)胞mRNA的表達(dá)情況擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳顯示，Eca9706細(xì)胞中TFPI-2mRNA表達(dá)在各用藥組和未用藥組之間有明顯差異，TFPI-2mRNA在未用藥組細(xì)胞中未見表達(dá)。經(jīng)1.6、25.6、102.4μmol/L5-Aza-CdR處理后可見TFPI-2mRNA表達(dá)，說明在一定范圍內(nèi)隨5-Aza-CdR藥物濃度的增加TFPI-2mRNA表達(dá)逐漸增強(qiáng)(圖2)。圖1各組流式細(xì)胞凋亡散點(diǎn)圖A：對(duì)照組;B：1.6μmol/L5-Aza-CdR組;C：25.6μmol/L5-Aza-CdR組;D：102.4μmol/L5-Aza-CdR組。圖25-Aza-CdR處理前后Eca9706細(xì)胞TFPI-2mRNA的表達(dá)M：DNAmarker;β-actin：301bp;TFPI-2：440bp;1：對(duì)照組;2：102.4μmol/L組;3：25.6μmol/L組;4：1.6μmol/L組;5：H2O對(duì)照組。,2.4干預(yù)前后TFPI-2蛋白的表達(dá)情況免疫組化結(jié)果顯示，經(jīng)5-Aza-CdR作用Eca9706細(xì)胞48h，TFPI-2蛋白的陽性表達(dá)率增加，對(duì)照組、1.6μmol/L組、25.6μmol/L組、102.4μmol/L組TFPI-2蛋白的陽性表達(dá)率分別為(2.10±1.42)%、(9.31±2.70)%、(14.72±3.50)%、(68.20±3.20)%，不同濃度組之間以及用藥組與對(duì)照組之間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，圖3)。圖3各組TFPI-2蛋白的表達(dá)情況3討論人TFPI-2(hTFPI-2)基因定位于7q22區(qū)域，全長(zhǎng)由8164個(gè)堿基組成，其cDNA全長(zhǎng)為1222kb。其mRNA的啟動(dòng)子具有典型的管家基因特征，沒有典型的TATA盒或CAAT盒，在推定的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)區(qū)域GC含量超過80%[1]。TFPI-2可在體內(nèi)多種組織廣泛表達(dá)，在這些組織內(nèi)一旦出現(xiàn)腫瘤，TFPI-2的表達(dá)水平也會(huì)隨之顯著下降[2]。有研究證實(shí)，在絨毛膜癌、乳腺癌、前列腺癌、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤、纖維肉瘤和胸部惡性腫瘤組織中，與腫瘤產(chǎn)生相關(guān)的TFPI-2表達(dá)水平減少可能與其啟動(dòng)子的甲基化密切相關(guān)[1,3-5]。啟動(dòng)子區(qū)cpG島高甲基化在腫瘤形成機(jī)制中確實(shí)切作用尚不清楚，然而眾多證據(jù)說明，腫瘤抑癌基因CpG島異常的甲基化導(dǎo)致基因失活和轉(zhuǎn)錄抑制是腫瘤發(fā)生的重要機(jī)制之一[6-8]。目前，有體外實(shí)驗(yàn)說明，DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-Aza-CdR通過去甲基化作用可使多種含有CpG島的高甲基化抑癌基因重新表達(dá)，從而恢復(fù)抑癌功能[9]。本實(shí)驗(yàn)RT-PCR結(jié)果顯示，TFPI-2在Eca9706細(xì)胞中無表達(dá)，經(jīng)過不同濃度的5-Aza-CdR處理Eca9706細(xì)胞后，TFPI-2亦重新出現(xiàn)表達(dá)，且在一定范圍內(nèi)隨藥物誘導(dǎo)濃度的增大表達(dá)逐漸增強(qiáng)。MIZUNO等[10]研究說明，腫瘤細(xì)胞中DNMT的表達(dá)較正常的高4～12倍，也證實(shí)DNMT上調(diào)參與腫瘤發(fā)生。這與我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。根據(jù)MTT實(shí)驗(yàn)可知，經(jīng)過5-Aza-CdR干預(yù)處理過的Eca9706細(xì)胞增殖明顯受抑制，且隨著藥物濃度的增加，抑制作用越明顯。從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，DNA啟動(dòng)子區(qū)去甲基化能較明顯地抑制食管癌細(xì)胞增殖，并與其誘導(dǎo)劑量呈正相關(guān)，推測(cè)這種抑制作用與去甲基化后重新激活TFPI-2基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)有著直接關(guān)系;此外可能與去甲基化后誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)。進(jìn)而通過流式細(xì)胞儀分析，結(jié)果顯示，經(jīng)不同濃度5-Aza-CdR干預(yù)的Eca9706的細(xì)胞中，用藥組與對(duì)照組相比細(xì)胞凋亡率凋亡率有所增加，并且與5-Aza-CdR誘導(dǎo)劑量有依賴性關(guān)系。BENDER等[11]在同等條件下用5-Aza-CdR處理惡性腫瘤細(xì)胞系和正常纖維細(xì)胞系時(shí)，發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞增殖均被抑制，而纖維細(xì)胞增殖不被抑制。因此，5-Aza-CdR對(duì)Eca9706細(xì)胞增殖的抑制及凋亡的增加不是藥物的毒性影響，可能是因?yàn)槭筎FPI-2重新表達(dá)的結(jié)果。目前，國外以TFPI-2為藥物研究靶點(diǎn)，就TFPI-2在腫瘤治療、腫瘤臨床診斷、促進(jìn)傷口愈合和動(dòng)脈粥樣硬化治療等領(lǐng)域中的應(yīng)用，也正在進(jìn)行廣泛深入的研究。本研究用甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-Aza-CdR處理人食管癌Eca9706細(xì)胞株，檢測(cè)TFPI-2基因表達(dá)的變化及其對(duì)細(xì)胞增殖和凋亡的影響，以期尋找治療腫瘤的新靶點(diǎn)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】[1]HUBEF，REBERDIAUP，IOCHMANNS，etal.CharacterizationandfunctionalanalysisofTFPI-2genepromoterinahumanchoriocarcinomacellline[J].ThrombRes，203，109(4)：207-215.[2]MIYAGIiY，KOSHIKAWAN，YASUMITSUH，etal.cDNAcloningandmRNAexpressionofaserineprotein5andtissuefactorpathwayinhibitor-2[J].JBiochem，1994，116(5)：939-942.[3]RAOCN，SEGAWAT，NAVARIJR，etal.MethylationofTFPI-2geneisnotthesolecauseofitssilencing[J].IntJOncol，2003，22(4)：843-848.[4]KONDURISD，SRIVENUGOPALKS，YANAMANDRAN，etal.Promotermethylandsilencingofthetissuefactorpathwayinhibitor-2(TFPI-2)，ageneencodinganinhibitorofmatrixmetalloproteinasesinhumangliomacells[J].Oncogene，2003，22(29)：4509-416.[5]STEINERFA，HONGJA，F(xiàn)ISCHETTEMR，etal.Sequential5-Aza-2-deoxycytidi-ne/depsipeptideFK228treatmentinducestissuefactorpathwayinhibitor2(TFPI-2)expressionincancercells[J].Oncogene，2005，24(14)：2386-2397.[6]HERMANJG，BAYLINSB.Promoter-regionhypermethylationandgenesilencinginhumancancer[J].CurrTopMicrobiolImmunol，2000，249：35-54.[7]JONESPA，BAYLINSB.Thefundamentalroleofepigeneticeventsincancer[J].NatRevGenet，2002，3(6)：415-428.[8]EHRLICHM.DNAmethylationincancer：toomuch，butalsotoolittle[J].Oncogene，2002，21(35)：5400-5413.[9]PAZMF，F(xiàn)RAGAMF，AVILAS，etal.AsystematicprofileofDNAmethylationinhumancancercelllines[J].CancerRes，2003，63(5)：1114-1121.

[10]MIZUNOS，CHIJIWAT，OKAMURAT，etal.ExpressionofDNAmethyltransferasesDNMT1，3A，and3Binnormalhematopoiesisandinacuteandchronicmyelogenousleukemia[J].Blood，2001，97(5)：1172-1179.[11]BENDERCM，PAOMM，JONESPA.InhibitionofDNAmethylationby5-Aza-2-deoxycytidinesuppressesthegrowthofhumantumorcelllines[J].CancerRes，1998，58(5)：95-101.申明：本論文版權(quán)歸原刊發(fā)雜志社所有，我們轉(zhuǎn)載的目的是用于學(xué)術(shù)交流與討論，僅供參考不構(gòu)成任何學(xué)術(shù)建議?；脽羝庞辰Y(jié)束！

謝謝請(qǐng)您提出珍貴意見！再見O(∩_∩)O謝謝各位！OK“做〞論文的智慧和思維廣州市第65中學(xué)王建春2021年4月“做〞論文的智慧和思維為何提“做論文〞，而不是“寫論文〞？學(xué)術(shù)論文的四大屬性如何使論文具有創(chuàng)新性？做論文真的需要智慧和思維？智慧和思維的源泉：閱覽文獻(xiàn)，做有心人智慧和思維的張力：邏輯的根本魅力關(guān)于提高論文投稿發(fā)表率一、為何提“做論文〞，而不是“寫論文〞？做論文強(qiáng)調(diào)論文產(chǎn)生的過程：選題——資料的搜集、整理——實(shí)證操作——(數(shù)據(jù))整理——結(jié)論形成——文本的書寫與修改。寫論文：側(cè)重文本的書寫與修改何者厚重與嚴(yán)肅?何者薄弱與應(yīng)付？一目了然一、為何提“做論文〞，而不是“寫論文〞？為寫論文而論文：感慨：書到用時(shí)方很少狀態(tài)：沒有頭緒，無從下筆結(jié)果：生的偉大，憋的難受產(chǎn)物：胡亂拼湊，美麗垃圾根源：缺乏自己的思想或觀點(diǎn)所以，不太喜歡說“寫論文〞，喜歡聽別人說“做論文〞二、學(xué)術(shù)論文的四大屬性〔一〕學(xué)術(shù)性首先要明白什么是“學(xué)術(shù)〞，所謂學(xué)術(shù)，是指較為專門、系統(tǒng)的學(xué)問。所謂學(xué)術(shù)性，就是指研究、探討的內(nèi)容具有專門性和系統(tǒng)性，即是以科學(xué)領(lǐng)域里某一專業(yè)性問題作為研究對(duì)象。從內(nèi)容上看，學(xué)術(shù)論文更是富有明顯的專業(yè)性。學(xué)術(shù)論文是作者運(yùn)用他們系統(tǒng)的專業(yè)知識(shí)，去論證或解決專業(yè)性很強(qiáng)的學(xué)術(shù)問題。從語言表達(dá)來看，學(xué)術(shù)論文是運(yùn)用專業(yè)術(shù)語和專業(yè)性圖表符號(hào)表達(dá)內(nèi)容的，它主要是寫給同行看的，所以不在乎其他人是否看得懂，而是要把學(xué)術(shù)問題表達(dá)得簡(jiǎn)潔、準(zhǔn)確、標(biāo)準(zhǔn)，因此，專業(yè)術(shù)語用得很多。學(xué)習(xí)一門學(xué)科本質(zhì)上是掌握專業(yè)概念、術(shù)語和符號(hào)二、學(xué)術(shù)論文的四大屬性〔二〕科學(xué)性：科學(xué)性是學(xué)術(shù)論文的特點(diǎn)，也是學(xué)術(shù)論文的生命和價(jià)值所在。開展學(xué)術(shù)研究，寫作學(xué)術(shù)論文的目的，在于揭示事物開展的客觀規(guī)律，探求客觀真理，從而促進(jìn)科學(xué)的繁榮和開展，這就決定了學(xué)術(shù)論文必須具有科學(xué)性。所謂科學(xué)性，就是指研究、探討的內(nèi)容準(zhǔn)確、思維嚴(yán)密、推理符合邏輯。二、學(xué)術(shù)論文的四大屬性〔三〕創(chuàng)新性創(chuàng)新性被視為學(xué)術(shù)論文的特點(diǎn)之一，這是由科學(xué)開展的需要決定的?？茖W(xué)研究是對(duì)新知識(shí)的探求。如果科學(xué)研究只作繼承，沒有創(chuàng)造，那么人類文明就不會(huì)前進(jìn)。人類的歷史就是不斷發(fā)現(xiàn)、不斷創(chuàng)造也就是不斷創(chuàng)新的歷史。一個(gè)民族如果沒有創(chuàng)新精神，這個(gè)民族就要衰亡。同樣，一篇論文如果沒有創(chuàng)新之處，它就毫無價(jià)值。二、學(xué)術(shù)論文的四大屬性〔四〕理論性學(xué)術(shù)論文與科普讀物、實(shí)踐報(bào)告、科技情報(bào)之間最大的區(qū)別就是具有理論性的特征。所謂理論性就是指論文作者思維的理論性、論文結(jié)論的理論性和論文表達(dá)的論證性。三、如何使論文具有創(chuàng)新性？論文最根本的要求是新穎，具有獨(dú)創(chuàng)性，所以一篇學(xué)術(shù)論文的內(nèi)容絕不應(yīng)是空泛的、陳舊的、拾人牙慧的。一篇教育科研論文的賴以生存的屬性：創(chuàng)新性否那么，就是美麗的垃圾三、如何使論文具有創(chuàng)新性？〔一〕說人家沒說過的例：“根對(duì)礦質(zhì)元素吸收〞教學(xué)中對(duì)學(xué)生邏輯思維的訓(xùn)練〔2003年11月?生物學(xué)通報(bào)?〕高中生物史例教學(xué)中對(duì)學(xué)生科學(xué)思維的訓(xùn)練〔2004年6月?生物學(xué)教學(xué)?〕年級(jí)委員會(huì)制：大規(guī)模普通高中學(xué)校有效的“扁平化〞管理〔2021年7月?校長(zhǎng)引領(lǐng)與教師專業(yè)開展?〕創(chuàng)新相對(duì)容易，鬼很好畫，人不太好畫，但往往寫作難度最大，相關(guān)文獻(xiàn)不多，抄都沒得抄三、如何使論文具有創(chuàng)新性？〔二〕說人家說的不全、不系統(tǒng)針對(duì)“盲人摸象〞現(xiàn)象，綜合客觀看待，例：提高生物課堂教學(xué)有效性的系統(tǒng)化研究〔2006年10月?廣州市中小學(xué)、中等職業(yè)學(xué)校特約教研員論文選編?第八集〕有效教學(xué)的理論與實(shí)踐概略也比較容易，只要功夫深、鐵杵磨成針，功到自然成三、如何使論文具有創(chuàng)新性？〔三〕說人家說的不同一方向例：生物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)在培養(yǎng)學(xué)生科學(xué)思維中的作用〔2002年6月?中學(xué)生物學(xué)教學(xué)?〕；中學(xué)生的生物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)能力培養(yǎng)的迫切性；培養(yǎng)中學(xué)生生物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)能力的策略與措施講究靈性和運(yùn)氣，時(shí)機(jī)總是為有準(zhǔn)備的人準(zhǔn)備的三、如何使論文具有創(chuàng)新性？〔四〕說人家說得不太對(duì)或不準(zhǔn)確的談高中生物新課程課堂教學(xué)生成性的正確把握〔2021年4月?教育導(dǎo)刊?〕需要相關(guān)領(lǐng)域資料的積累，更需要判斷的勇氣和敏銳，真理往往在少數(shù)人手中三、如何使論文具有創(chuàng)新性？〔五〕說人家說過，但隨時(shí)代變化賦予新價(jià)值和新內(nèi)涵例：在初中生物教學(xué)中運(yùn)用“掌握學(xué)習(xí)教學(xué)模式〞的新視點(diǎn)〔2000年1月?廣州市中學(xué)生特約教研員論文選編〔第六集〕?〕新課程背景下中學(xué)德育的新開展〔2021年6月?中小學(xué)德育研究?〕需要傳承與創(chuàng)新的精神，不太容易說好四、做論文真的需要智慧和思維？那怎么會(huì)是需要？那家伙是相當(dāng)需要！四、做論文真的需要智慧和思維？天下文章一大抄，看你會(huì)抄不會(huì)抄會(huì)抄不會(huì)抄的根本區(qū)別在哪里？在于有沒有自己的思想和方法所以，我說教育科研的本質(zhì)是智慧與思維的較量四、做論文真的需要智慧和思維？所謂做論文，即是做學(xué)問。必須：基于現(xiàn)實(shí)兼顧過去瞄準(zhǔn)未來處理好“來龍〞與“去脈〞的關(guān)系問題四、做論文真的需要智慧和思維？不基于現(xiàn)實(shí)問題沒有實(shí)用價(jià)值，面臨生存問題不兼顧過去容易貽笑大方，犯低級(jí)錯(cuò)誤不瞄準(zhǔn)未來容易成為應(yīng)時(shí)順景文章，談不上具有學(xué)術(shù)的沉淀價(jià)值四、做論文真的需要智慧和思維？其實(shí)，對(duì)某一問題的歷史、現(xiàn)實(shí)和未來的關(guān)注這哪里僅僅是做學(xué)問涉及的是做人的智慧和道理所以，我說教育科研的本質(zhì)是智慧與思維的較量四、做論文真的需要智慧和思維？以?有效教學(xué)的理論與實(shí)踐概略?為例：處理“來龍〞與“去脈〞的關(guān)系有效教學(xué)提出的背景〔回憶過去〕有效教學(xué)的含義〔兼顧過去、基于現(xiàn)實(shí)〕關(guān)于有效教學(xué)認(rèn)識(shí)上的整體把握〔兼顧過去、基于現(xiàn)實(shí)〕擯棄傳統(tǒng)教學(xué)的“有效〞經(jīng)典陋習(xí)〔兼顧過去、基于現(xiàn)實(shí)〕高度警惕“美麗錯(cuò)誤〞：新課程理念下的低效、無效教學(xué)〔基于現(xiàn)實(shí)、瞄準(zhǔn)未來〕有效教學(xué)的應(yīng)然狀態(tài)——有效教學(xué)到底是啥模樣？〔基于現(xiàn)實(shí)〕有效教學(xué)的達(dá)成〔基于現(xiàn)實(shí)〕有效教學(xué)的資源〔基于現(xiàn)實(shí)〕學(xué)科操作性個(gè)案綱要〔基于現(xiàn)實(shí)〕有效教學(xué)“胎記〞的為難與可能的嬗變：從有效教學(xué)走向優(yōu)效〔優(yōu)質(zhì)〕教學(xué)〔瞄準(zhǔn)未來〕五、智慧和思維的源泉：閱覽文獻(xiàn)，做有心人人的運(yùn)氣取決于兩方面：一、看過的書二、交往的人五、智慧和思維的源泉：閱覽文獻(xiàn)，做有心人眼界決定境界思路決定出路深度決定高度眼界、思路、深度從哪里來？最快速的方法是閱覽文獻(xiàn)，做有心人！哲學(xué)上間接經(jīng)驗(yàn)與直接經(jīng)驗(yàn)的關(guān)系五、智慧和思維的源泉：閱覽文獻(xiàn)，做有心人眼界是由資料見識(shí)決定思路可以在閱讀資料中明晰深度是在不同資料中得以挖掘閱覽文獻(xiàn)，防止少見多怪，防止人云亦云，是做學(xué)問最根底但也是最重要的工作五、智慧和思維的源泉：閱覽文獻(xiàn)，做有心人著名的歷史學(xué)家吳晗說過：“資料工作和研究工作實(shí)際上是一回事，從來沒有做研究工作有成績(jī)的人，不搞資料工作的。〞梁?jiǎn)⒊舱f過：“大抵凡一個(gè)大學(xué)者平日用功，總是有無數(shù)小冊(cè)子或單紙片：讀書看見一段資料，覺其有用者，即刻抄下。馬克思、魯迅等都在自己的研究生涯中，在資料的收集方面用力甚劬。馬克思寫?資本論?，花了四十年心血，鉆研和摘要過的書籍達(dá)1500多種。魯迅寫?中國小說史略?，僅?小說舊聞鈔?就是從90余種、1500卷書中抄錄下來的。

資料的搜集是如此重要，以至于達(dá)爾文認(rèn)為：“科學(xué)就是整理事實(shí)，以便從中得出普遍規(guī)律或結(jié)論。〞五、智慧和思維的源泉：閱覽文獻(xiàn)，做有心人(一)搜集資料的原那么搜集資料要有目的性，要緊緊地圍繞自己的選題。搜集資料要多而又有全面性，歷史的、現(xiàn)實(shí)的、正面的、反面的、點(diǎn)上的、面上的、遠(yuǎn)的、近的，都要搜集?！茬妴⑷?、王策三兩位大專家的文章資料足可以讓我對(duì)本次新課程改革有更為飽滿的理解〕搜集資料要持之以恒，逐漸積累。五、智慧和思維的源泉：閱覽文獻(xiàn)，做有心人

(二)閱讀資料的方法〔在有限時(shí)間內(nèi)盡可能掌握更多的資訊〕

先粗讀，后精讀。注意理解大意。

把握作者的思路，分析、研究作者的論斷，掌握作者研究問題、論證問題的方式方法。先讀提要、序言或后記，后讀全文。現(xiàn)在各類圖書報(bào)刊資料的數(shù)量越來越豐富，要每一本都細(xì)加閱讀是不可能的，因此善于選擇就顯得十分重要了。在閱讀資料時(shí)，應(yīng)首先注意看資料的目錄和內(nèi)容提要，然后選擇自己所需要的內(nèi)容仔細(xì)閱讀和研究。先讀新資料，后讀舊資料。五、智慧和思維的源泉：閱覽文獻(xiàn)，做有心人

(三)寫讀書筆記的方法

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摘錄式筆記——照抄原文或內(nèi)容摘要。提綱式筆記——將資料的論點(diǎn)或根本內(nèi)容提綱挈領(lǐng)地表達(dá)出來。心得式筆記——將對(duì)某一問題的心得體會(huì)寫成短小的文章、札記、隨筆等。索引筆記——寫下有關(guān)的書名或論文題目，按照內(nèi)容本身的性質(zhì)搞出一個(gè)索引來，以備查用。〔本人最常用〕五、智慧和思維的源泉：閱覽文獻(xiàn)，做有心人做學(xué)問的人還是要必備一些書：中華人民共和國教育部制訂?普通高中課程方案〔實(shí)驗(yàn)〕?〔人民教育出版社，2003年4月第1版〕中華人民共和國教育部制訂?普通高中生物課程方案〔實(shí)驗(yàn)〕?〔人民教育出版社，2003年4月第1版〕朱慕菊主審、鐘啟泉等主編?根底教育課程改革綱要〔試行〕解談?〔華東師范大學(xué)出版社，2001年8月第一版〕朱慕菊主審、教育部根底教育司組織編寫?走進(jìn)新課程：課程實(shí)驗(yàn)者對(duì)話?〔北京師范大學(xué)出版社2002年6月第一版〕中華人民共和國教育部制訂?全日制普通高級(jí)中學(xué)生物教學(xué)大綱?(人民教育出版社2002年4月第1版)生物課程標(biāo)準(zhǔn)研制組編寫?普通高中生物課程方案〔實(shí)驗(yàn)〕解讀?〔江蘇教育出版社2004年3月第1版〕教育部根底教育司教育部師范教育司組織?普通高中生物課程標(biāo)準(zhǔn)研修手冊(cè)?〔高等教育出版社2004年5月第1版〕胡文耕著?生物學(xué)哲學(xué)?〔中國社會(huì)科學(xué)出版社2002年1月第1版〕五、智慧和思維的源泉：閱覽文獻(xiàn)，做有心人做學(xué)問的人還是要必備一些書：李文癢于永仙編著?探秘生物思維?〔北京科技出版社2002年7月第1版〕汪永祥主編?馬克思主義原理?〔中國人民大學(xué)出版社1989年4月第1版〕?簡(jiǎn)明國際教育百科全書?〔北京：教育出版社,1992〕馮克誠,西爾梟主編?實(shí)用課堂教學(xué)模式與方法改革全書?〔北京：中央編譯出版社,1994〕吳杰主編?外國現(xiàn)代主要教育流派?〔吉林：吉林出版社,1989〕高文主編?現(xiàn)代教育的模式化研究?〔山東教育出版社，2000年12月，第2版〕柳思儉、淳于家新編?實(shí)用中學(xué)學(xué)科課堂教學(xué)模式?〔山東教育出版社，1999年3月，第1版〕石鷗?教學(xué)病理學(xué)?〔湖南教育出版社,1999〕五、智慧和思維的源泉：閱覽文獻(xiàn)，做有心人做學(xué)問的人還是要必備一些書：黃濟(jì)、王策三?現(xiàn)代教育論?〔人民出版社,1996〕曹道平編著?生物學(xué)教學(xué)理論、方法與技術(shù)?〔山東教育出版社，1998年8月第1版〕羅樹華李洪珍主編?教師能力學(xué)?〔山東教育出版社，1997年2月第1版〕麥曦主編?教學(xué)設(shè)計(jì)的理論和方法?〔新世紀(jì)出版社，1996年4月第1版〕徐仁靜主編?中學(xué)生物創(chuàng)新教法?〔學(xué)苑出版社，1999年8月第1版〕張掌然張大松著?思維訓(xùn)練?〔華中理工大學(xué)出版社，2000年6月第1版〕李洪玉何一粟著?學(xué)習(xí)動(dòng)力?〔湖北教育出版社，1999年2月第1版〕姚海林著?學(xué)習(xí)規(guī)律?〔湖北教育出版社，1999年1月第1版〕葉佩珉主編?生物實(shí)驗(yàn)論?〔廣西教育出版社，2001年4月〕白月橋著?課程變革概論?〔河北教育出版社，1996年版〕李衍華著?形式邏輯自學(xué)讀本?〔解放軍出版社，1985年12月，第1版〕袁振國著?教育新理念?〔教育科學(xué)出版社，2003年3月第1版〕[美]BeverlyAbbey主編丁興富等譯?網(wǎng)絡(luò)教育：教學(xué)與認(rèn)知開展的新視角?〔中國輕工業(yè)出版社，2003年1月第1版〕周慶林主編?研究性學(xué)習(xí)指導(dǎo)?〔廣西大學(xué)出版社，2002年5月第1版〕五、智慧和思維的源泉：閱覽文獻(xiàn)，做有心人做學(xué)問的人還是要必備一些書：周慶林主編?研究性學(xué)習(xí)指導(dǎo)?〔廣西大學(xué)出版社，2002年5月第1版〕黃光揚(yáng)主編?教育測(cè)量與評(píng)價(jià)?〔華東師范大學(xué)出版社2002年8月第一版〕〔美〕W.JamesPopham著?促進(jìn)教學(xué)的課堂評(píng)價(jià)?〔中國輕工業(yè)出版社2003年1月第一版〕史曉燕?開展性教育評(píng)價(jià)的理論與實(shí)踐?〔河北教育出版社2003年11月第一版〕〔美〕StephenD.Brookfield著，張偉譯?批判反思型教師ABC?〔中國輕工業(yè)出版社，2002年